張知曉，季梅，劉凌，戶連榮，寧德魯

(云南省林業(yè)科學院,云南 昆明 650201)

油橄欖(Oleaeuropaea)是木犀科(Oleaceae)木犀屬(Olea)常綠植物，別名齊墩果，是使用廣泛的木本油料之一，在國際上有“植物油皇后”和“液體黃金”之稱[1]。近幾年，許多醫(yī)學研究結(jié)果表明，橄欖油中的油酸、亞油酸、亞麻油酸含量的比例適合人體的需要，易被人體消化吸收，具有極高的生理價值，因此，橄欖油成為暢銷全球的健康食品[2]。除此之外，其醫(yī)療及保健功效也逐漸受到人們關注，已有40多個國家將其引種栽培[3]。

云南最早從1907年引種油橄欖，目前已成為全國油橄欖平均單產(chǎn)量最高的省份[4]。永仁縣因其“冬無嚴寒，夏長干熱，干濕季分明，雨熱同季”的氣候特點，成為我國油橄欖種植的一級適生區(qū)之一，現(xiàn)已種植油橄欖3 600hm2，計劃到2020年種植油橄欖6 700hm2[5]。然而，隨著種植年限增加，栽培面積擴大，病蟲害發(fā)生率也逐年增加，油橄欖病害已成為制約永仁縣油橄欖產(chǎn)量和品質(zhì)提升的重要因素之一。為保障永仁油橄欖穩(wěn)產(chǎn)增產(chǎn)，提高油橄欖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益，本研究于2016-2017年對永仁縣油橄欖病害情況進行了系統(tǒng)調(diào)查及病原鑒定，旨在為防治油橄欖病害，建立綠色產(chǎn)品生產(chǎn)基地提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查時間和地點

2016年4月至2017年10月，對云南永仁縣的三鎮(zhèn)四鄉(xiāng)(永定鎮(zhèn)、中和鎮(zhèn)、宜就鎮(zhèn)、猛虎鄉(xiāng)、維的鄉(xiāng)、蓮池鄉(xiāng)、永興傣族鄉(xiāng))的20個地塊進行了不同生長時期的病害調(diào)查。

1.2 調(diào)查方法

按照“Z”字形5點取樣，各樣點取樣調(diào)查10株，記載各種病害的發(fā)病率及發(fā)病癥狀，采集病株以進行室內(nèi)分離培養(yǎng)、形態(tài)鑒定[6]。

1.3 病原鑒定

對采集的標本描述其發(fā)病癥狀，鏡檢病原形態(tài)，測定孢子大小。對標本病害部位進行常規(guī)的組織分離培養(yǎng)、病原菌純化，依照柯赫式法則檢測菌株對植物的致病性，肉眼觀察病原菌平板培養(yǎng)的形態(tài)特征，顯微鏡下觀察菌絲、產(chǎn)孢結(jié)構、孢子大小等特點，參照相關文獻進行鑒定[7-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 油橄欖根腐病

(1)癥狀 油橄欖根腐病在植物整個生長期內(nèi)均可造成危害，主要在根部組織發(fā)生。發(fā)病初期，病菌侵入根部皮層，形成層變褐。隨病情發(fā)展，腐爛由根部向根頸蔓延，腐爛處變深褐色，形成層壞死，染病皮層與木質(zhì)部容易剝離。最后，木質(zhì)部腐爛變黑，皮層有霉臭味。病株葉片失水，黃綠色或淡黃色，易萎蔫、反卷、脫落，嚴重時枝上常僅剩幾片黃葉。隨著病情發(fā)展植株表現(xiàn)出生長發(fā)育緩慢、樹勢衰弱、全株性枯萎，嚴重的整株枯死。如圖1-a可見，病根樣品橫切面的韌皮部及木質(zhì)部呈黑褐色。

(2)病原 如圖1-b，菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，菌絲絨毛狀，粉紅色，氣生菌絲發(fā)達。如圖1-c、1-d，菌株在PDA上30℃培養(yǎng)7d，產(chǎn)生小型分生孢子、大型分生孢子和厚垣孢子3種類型的孢子。小型分生孢子無色，單胞，卵圓形、腎臟形等，長假頭狀著生，大小為5-12μm×2-3.5μm；大型分生孢子無色，多胞，鐮刀形，略彎曲，兩端細胞稍尖，大小為19.6-39.4μm×3.5-5.0μm；厚垣孢子淡黃色，近球形，表面光滑，壁厚，間生或頂生，單生或串生。依據(jù)上述病原菌的培養(yǎng)性狀，以及觀察到的形態(tài)學特征，參照相關文獻對該屬真菌分類的描述，初步鑒定該病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)。

圖1 油橄欖根腐病癥狀及病原形態(tài)特征

(3)分布及發(fā)病程度 根腐病病菌越冬場所是土壤和帶菌的根，以菌絲或孢子存在。主要通過雨水或澆水傳播，自然情況下，病菌最先通過侵染幼嫩新根進入根部。在永仁，感病油橄欖根在6月上旬出現(xiàn)癥狀，7-8月為發(fā)病盛期，田間可持續(xù)為害至9月。高溫多雨、低洼、積水、土壤粘性重、透氣性差的地塊發(fā)病嚴重。在永定鎮(zhèn)、宜就鎮(zhèn)、中和鎮(zhèn)、猛虎鄉(xiāng)、蓮池鄉(xiāng)重度發(fā)生，在維的鄉(xiāng)和永興傣族鄉(xiāng)中度發(fā)生。

2.2 油橄欖枝枯病

(1)癥狀 油橄欖枝枯病主要在其一、二年生幼枝發(fā)生嚴重。發(fā)病初期，病原從修剪口或自然傷口處侵入，開始病皮產(chǎn)生水漬狀灰褐色病斑，病斑逐漸擴展，后變紅褐色至深灰色。枝梢開始干枯，除去外部皮層，維管束組織變淺褐色。病害后期，枝干的病斑上可見密集埋生的小黑點。病部逐漸萎蔫、干縮，不能正常抽芽，嚴重時整個枯死。如圖2-a可見，樣品橫切面韌皮部褐變，枝條枯萎。

圖2 油橄欖枝枯病癥狀及病原形態(tài)特征

(2)病原 如圖2-b、2-c，菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，菌絲絨毛狀，白色，基物表面肉色，基物不變色。

如圖2-d、2-e，產(chǎn)生大型分生孢子和小型分生孢子，無厚垣孢子。大型分生孢子鐮刀形，彎曲度較大，頂部細胞楔形，基胞足跟明顯，3-5分隔，多為4分隔，大小為21.52-45.94μm×2.81-4.92μm；小型分生孢子數(shù)量多，多為1分隔，大小為6.74-19.06μm×2.46-3.46μm；單瓶梗和復瓶梗產(chǎn)孢，有性階段未見。根據(jù)上述病原菌的培養(yǎng)性狀和形態(tài)學特征，參照真菌分類相關文獻的描述，初步鑒定病原菌為鐮狀鐮刀菌(Fusariumfusarioides)。

(3)分布及發(fā)病程度 油橄欖枝枯病病菌以菌絲體或孢子在病枝等感病組織中越冬，來年條件適宜時，借助雨水和空氣進行短距離傳播，主要通過自然傷口或修剪口進入枝干組織。在永仁，枝枯病于3-12月間均可發(fā)病，4-5月是高發(fā)期。在永定鎮(zhèn)、宜就鎮(zhèn)、中和鎮(zhèn)零星發(fā)生，危害較輕。

2.3 油橄欖炭疽病

(1)癥狀 如圖3-a、3-b，果實上病斑初發(fā)生為褐色小點，而后凹陷呈輪紋狀擴大，病斑擴大超過果實的一半后，果實發(fā)生皺縮而變干，病斑中央呈灰色，陰雨天病斑上出現(xiàn)桔紅色分生孢子堆。在果面出現(xiàn)淡褐色至紅褐色小斑，擴展后變褐至黑褐色圓斑，凹陷，邊緣清晰，剖切后可見病斑下面果肉變褐呈錐形向果心腐爛，病斑表面常出現(xiàn)輪紋狀排列的黑色小粒。潮濕條件下出現(xiàn)肉紅色粘狀的分生孢子團。

圖3 油橄欖炭疽病癥狀及病原形態(tài)特征

(2)病原 如圖3-c、3-d，菌株的菌落在PDA培養(yǎng)基上最開始是白色的，菌絲中部由白色變淺棕色，氣生菌絲發(fā)達，背面有深褐色同心輪紋。

如圖3-e、3-f，接種病果后出現(xiàn)黑色菌核和剛毛，剛毛淺棕色到深棕色，中間分3-5節(jié)，分生孢子梗無色，不分枝或僅在基部分枝。分生孢子13.5-22.3μm×5.5-7.5μm，單孢，圓柱狀，光滑，無色，直或稍微彎曲，兩端頓圓。根據(jù)上述病原菌的培養(yǎng)性狀和形態(tài)學特征，參照真菌分類相關文獻的描述，初步鑒定病原菌為盤長孢狀刺盤孢(Colletotrichumgloeosporioides)。

(3)病害循環(huán)及發(fā)病情況 油橄欖炭疽病，在永仁4月份開始發(fā)病。病原菌以分生孢子盤或菌絲體的形式在落果、落葉等舊病組織中越冬，在春季陰雨天形成分生孢子，通過昆蟲或雨水飛濺傳播，通過皮孔或傷口穿過角質(zhì)層侵染果實。6月份果實開始發(fā)病，8、9月份病果出現(xiàn)典型癥狀。較多降雨次數(shù)和較大空氣濕度有助于病害的蔓延。在永仁永定鎮(zhèn)、宜就鎮(zhèn)和蓮池鄉(xiāng)中度發(fā)生，在中和鎮(zhèn)、猛虎鄉(xiāng)、維的鄉(xiāng)和永興傣族鄉(xiāng)輕度發(fā)生。

2.4 油橄欖褐斑病

(1)癥狀 多發(fā)生于4月下旬至5月上旬，主要危害葉片。病株葉片背面先產(chǎn)生零星黑色小點，以后逐漸擴大，成圓形或不規(guī)則形的黑色病斑，有輪紋，周邊有黃綠色暈圈(如圖4-a、4-b)。病斑直徑0.5-6mm，嚴重時病斑可聯(lián)合成大片，在葉片正面則呈現(xiàn)煙煤狀的大黑斑。受害葉片呈卷曲或扭曲狀，易脫落。若常陰雨天，空氣潮濕，病葉背面可見白色斑點，且含黑霉。若新梢發(fā)病，病斑呈淺褐色，凹陷。

(2)病原 如圖4-c、4-d，在PDA上30℃培養(yǎng)7d菌落青綠色，表面具灰白色絨狀菌絲，背面具同心輪紋。

顯微形態(tài)如圖4-e、4-f，分生孢子梗單生，直或略彎，淡褐色，分隔，分枝或不分枝，分生孢子多單生，褐色，多數(shù)為倒棒形，少數(shù)為卵形或近橢圓形，孢身大小為22.5-40.8μm×8.0-13.5μm。具2-4個橫隔膜，1-5個縱(斜)隔膜，隔膜處縊縮。喙或假喙呈柱狀，淺褐色，有隔膜。根據(jù)菌株的形態(tài)特征，結(jié)合致病性測定，參照相關文獻對鏈格孢種的特征描述，初步確認該菌為鏈格孢(Alternariaalternata)。

圖4 油橄欖褐斑病癥狀及病原形態(tài)特征

(3)病害循環(huán)及發(fā)病情況 油橄欖褐斑病病菌以分生孢子器或菌絲體隨枯落的病葉在地表及土壤中越冬。第二年氣溫、濕度等條件適宜時，分生孢子器吸水釋放分生孢子，通過葉背氣孔侵入幼嫩新葉組織，進行初侵染。孢子借風雨傳播，進行再侵染。多雨、種植密度大的地塊，發(fā)病嚴重；在永仁，該病主要發(fā)生在炎熱的8-9月。在永定鎮(zhèn)、宜就鎮(zhèn)和維的鄉(xiāng)等鄉(xiāng)鎮(zhèn)地塊上中度發(fā)生。

3 結(jié)論與討論

永仁縣位于云南省中北部，屬于“金沙江干熱河谷區(qū)域”，加之起伏的地形，形成了具有寒溫帶、溫帶、暖溫帶、南亞熱帶、中亞熱帶、北亞熱帶的立體氣候[11]。多樣的氣候類型適宜油橄欖的生長，而同時，也有利于多種病原菌在其中定殖擴散。對永仁縣油橄欖病害種類進行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)4種病害發(fā)生較普遍，分別是油橄欖根腐病、油橄欖枝枯病、油橄欖炭疽病以及油橄欖褐斑病，其中油橄欖根腐病和油橄欖炭疽病的危害較嚴重，在永仁縣的各鄉(xiāng)鎮(zhèn)油橄欖林地中均有不同程度的發(fā)生。楊蘭英于2007年對云南省油橄欖病害進行調(diào)查，也同樣發(fā)現(xiàn)了以上4種病害[12]。

經(jīng)過形態(tài)鑒定，初步確定油橄欖根腐病病原為尖孢鐮刀菌，油橄欖枝枯病病原為鐮狀鐮刀菌，油橄欖炭疽病病原為盤長孢狀刺盤孢，油橄欖褐斑病病原為鏈格孢。其中，尖孢鐮刀菌已被報道能引起煙草[13]、三七[14]等農(nóng)作物發(fā)生根腐病。而鐮狀鐮刀菌在油橄欖上引發(fā)枯枝病還是第一次報道。孫志東等已經(jīng)報道過刺盤孢屬真菌能夠引發(fā)油橄欖果實炭疽病[15]。鏈格孢屬真菌引起油橄欖褐斑病這一結(jié)果也與任志勇等報道的一致[16]。

調(diào)查中，油橄欖根腐病在永仁地區(qū)發(fā)生普遍且危害較嚴重，因此防治根腐病是油橄欖種植中需要格外注意的。第一，在選擇種植地和土壤時，應選擇有一定坡度，光照充足的地塊，土壤以透水良好，中性偏堿為佳，若土壤偏酸性，應先施入適量石灰進行改良；第二，栽種前應注意在積水地塊開挖排水溝，并且用硫酸亞鐵對土壤進行消毒；第三，栽種苗木時應選擇健康無病的苗木進行移栽，并在移栽前用甲基硫菌靈可濕性粉劑(70%，1 000倍液)或多菌靈可濕性粉劑(25%，500倍液)浸泡苗木5-10min，定殖時不應埋得過深；第四，苗木定植后，注意合理灌溉，另外可定期在根部周圍增施腐熟的有機肥和草木灰，預防根腐病的發(fā)生；最后，當發(fā)現(xiàn)苗木感染根腐病時，若病情較輕，應先將染病根部用利刀削除，然后用抗菌素或硫酸銅液消毒傷口，再于根部土壤澆灑藥液；若病情較重，應及時挖除燒毀，清除病原，防止病害蔓延[17]。