李小進(jìn)

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

參股芪口服液（暫命名）是由人參、西洋參、絞股藍(lán)、黃芪、甘草提取物、調(diào)味劑低聚果糖和穩(wěn)定劑海藻酸鈉制成的具有提高人體免疫力的中藥復(fù)方保健食品。人參作為藥食兩用的強(qiáng)壯滋補(bǔ)藥，具有補(bǔ)氣固脫、生津安神益智等功效；西洋參補(bǔ)而不燥；絞股藍(lán)與人參功效相似；黃芪具有補(bǔ)中益氣的功效。四味合用，補(bǔ)中益氣功效加強(qiáng)。甘草既可以滋補(bǔ)脾胃，又可以調(diào)和諸藥。

現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，人參能提高機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，消除自由基，延緩大腦衰老，改善大腦功能［1］；黃芪對(duì)免疫功能有雙向調(diào)節(jié)作用［2］；西洋參總皂苷可活化巨噬細(xì)胞，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能［3］；絞股藍(lán)中含有136種絞股藍(lán)皂苷，已確定其中6種絞股藍(lán)皂苷結(jié)構(gòu)與人參皂苷結(jié)構(gòu)完全相同［4］；甘草免疫調(diào)節(jié)作用體現(xiàn)在其具有激活小鼠淋巴細(xì)胞增殖的作用，選擇性增強(qiáng)輔助性T淋巴細(xì)胞的增殖力與活性，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子的生成與分泌［5］。本研究比較高速離心方法和水醇法處理傳統(tǒng)方法提取的總皂苷含量，探索研制參股芪口服液的最佳提取工藝。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1200 series）；ELSD檢測(cè)器（Agilent 3300）；高速離心機(jī)（型號(hào)LYNX 6000），Thermo公司。

1.2 試劑與材料

人參、西洋參、絞股藍(lán)、黃芪、甘草飲片均購(gòu)自山西省中醫(yī)院藥房，低聚果糖、海藻酸鈉均購(gòu)自山西國(guó)藥集團(tuán)；所用試劑乙腈為色譜純，磷酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 配方與產(chǎn)品

按照5 d配方量設(shè)計(jì)配方：人參80 g，西洋參100 g，絞股藍(lán) 250 g，黃芪 200 g，甘草 60 g，低聚果糖70 g，海藻酸鈉2 g。經(jīng)水煮等工藝，制成1 000 mL成品，按10 mL/支規(guī)格灌裝。

2.2 供試品溶液的制備

取口服液5只，合并口服液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)即得。

2.3 含量測(cè)定

參照藥典方法［6］以人參皂苷為含量指標(biāo)測(cè)定提取液總皂苷含量。

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 采用高效液相色譜儀（Angilent 1200 series），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B）以不同比例混合為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫20℃，流速1 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，理論塔板數(shù)按人參皂苷Re計(jì)算不低于1 500。

2.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取人參皂昔Re對(duì)照品0.501 mg，加流動(dòng)相（乙腈-0.1%磷酸溶液，20∶80）配制成濃度為 0.501 mg/mL 的對(duì)照品溶液，精密吸取 1 mL，2 mL，4 mL，6 mL，8 mL，10 mL 置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為：Y=170.34 X+1.18，r=0.999 8，人參皂苷 Re 在 l～10.000 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線(xiàn)性關(guān)系考察

2.3.3 精密度考察 精密吸取人參皂苷對(duì)照品溶液（0.501 mg／mL）5 mL置于10 mL量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，重復(fù)5次進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果RSD為1.15%（n＝5），表明儀器精密度良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度考察

2.3.4 重復(fù)性考察 精密吸取同一批口服液樣品溶液20 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算結(jié)果，平均值0.45%，RSD=1.93%，表明重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 重復(fù)性考察結(jié)果

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批口服液樣品5只，分別加入1.00 mL混和標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，水浴鍋加熱至10 mL以下，置10 mL量瓶中補(bǔ)足體積，進(jìn)樣20 μL，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 加樣回收率

2.4 提取方法

按照傳統(tǒng)提取煎煮的方法，按配方稱(chēng)量飲片，提取2次，第1次煎煮前浸泡4 h，分別加入12倍和10倍量的去離子水，每次煎煮均用1 h時(shí)間，合并提取液，濃縮至700 mL左右，即可。

2.4.1 高速離心工藝流程 上述提取濃縮液分別加入低聚果糖和海藻酸鈉并充分?jǐn)嚢瑁洳?、靜置24 h，調(diào)節(jié)pH值，高速離心，加入去離子水至1 000 mL，分裝、灌封、滅菌，即得。

2.4.2 水醇法工藝流程 上述提取濃縮液繼續(xù)濃縮至400 mL，放冷，加入乙醇1 100 mL充分?jǐn)嚢?，放?4 h過(guò)濾，回收乙醇并濃縮至700 mL左右，加入去離子水至1 000 mL，分裝、灌封、滅菌，即得。

2.5 樣品含量測(cè)定

2種工藝生產(chǎn)的樣品各3批（樣品I為高速離心工藝生產(chǎn)：20160701、20160702、20170703；樣品II 為 水 醇 法 工 藝 生 產(chǎn) ：20160704、20160705、20160706），分別取溶液 20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算含量。含量測(cè)定結(jié)果表明，高速離心方法處理提取液保留了更多的總皂苷。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 供試品含量測(cè)定

2.6 樣品比較

2.6.1 外觀觀察 色澤：樣品I為深黃棕色，樣品Ⅱ?yàn)闇\黃棕色。澄清度：樣品I、Ⅱ澄清，均無(wú)沉淀。有效成分含量：樣品I中所含總皂苷量明顯高于樣品Ⅱ。

2.6.2 留樣觀察 分別取上述各批號(hào)的藥液放置12個(gè)月，觀察其變化。色澤：基本無(wú)變化，樣品I為深黃棕色，樣品Ⅱ?yàn)闇\黃棕色。澄明度：樣品I、Ⅱ澄清，均無(wú)沉淀。有效成分含量：樣品I中所含總皂苷量明顯高于樣品Ⅱ。原料成本及生產(chǎn)周期：高速離心法比水醇法節(jié)省了大量乙醇、蒸餾水等，降低了原料成本，縮短了生產(chǎn)周期。

3 討論

本產(chǎn)品中有效成分主要為以人參皂苷Re為代表的總皂苷及多糖，以總皂苷含量為指標(biāo)作為衡量產(chǎn)品的定量指標(biāo)。結(jié)果表明，水醇法制備參股芪口服液工藝成本較高，有效成分損失較大。高速離心法是一種物理的分離法，它除去的是水不溶的固體雜質(zhì)，有效地保留了絕大部可溶性有效成分，從而節(jié)省了大量物料和能源，降低了產(chǎn)品的成本。因此高速離心法簡(jiǎn)便可行，適宜工業(yè)化生產(chǎn)，值得進(jìn)一步推廣。