吳曉燕，唐 琨，尚春燕

（1.四川省樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 樂山 614000； 2.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 樂山 614000）

復(fù)方銀翹氨敏膠囊（曾用名：雙撲維C銀翹膠囊、維C銀翹膠囊）為常見抗感冒藥，是由對(duì)乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、維生素C及銀翹浸膏等組方的中西藥復(fù)方制劑，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)（第四冊(cè)）》［1］，但僅對(duì)維生素C和對(duì)乙酰氨基酚的含量進(jìn)行了測(cè)定，對(duì)處方中具有較強(qiáng)抗組胺作用的馬來酸氯苯那敏并未規(guī)定明確的測(cè)定方法。本研究中采用高效液相色譜法對(duì)該品種中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度［2-7］進(jìn)行了測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，Agilent OpenLAB色譜工作站，二極管陣列檢測(cè)器（美國安捷倫科技有限公司）；XS205 DualRange型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

馬來酸氯苯那敏對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 100047-2015-07，按 C16H19ClN2·C4H4O4計(jì)，含量為99.7%）；復(fù)方銀翹氨敏膠囊（委托企業(yè)，四川彩虹制藥有限公司，受托企業(yè)，四川恩威制藥有限公司，批號(hào)為 170311，170501，170314）；甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、三乙胺為分析純，試驗(yàn)用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜條件：Waters XTerra RP18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：A 相為甲醇，B 相為 0.02 mol／L 磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（100∶0.1），梯度洗脫（0～5min，A 相15%→15%；5～15 min，A 相 15%→75%；15～25 min，A 相 75→15% ）；檢測(cè)波長(zhǎng)：262 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品11.82 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取復(fù)方銀翹氨敏膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取適量（約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏1.13 mg），精密稱定，置50 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液20 mL，超聲處理10 min，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液（供含量測(cè)定用）。另取本品1粒，置50mL容量瓶中，加30%甲醇溶液20mL，超聲處理10 min，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液（供含量均勻度檢查用）。

陰性對(duì)照品溶液：按處方配制不含馬來酸氯苯那敏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制，即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品溶液、供試品溶液（含量測(cè)定用）和陰性對(duì)照品溶液各10 μL，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。詳見圖1。

線性關(guān)系考察：取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品11.44 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為 456.23 μg／mL 的對(duì)照品貯備液。精密量取上述對(duì)照品貯備液適量，以30%甲醇溶液為溶劑，分別制成質(zhì)量濃度為4.56，18.25，45.62，68.43，91.24，114.06 μg ／mL 的溶液，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（以氯苯那敏計(jì)，下同，Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y ＝13.933 X-0.506 2，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在4.56～114.06 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為170311的復(fù)方銀翹氨敏膠囊，照2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別精密量取各溶液10 μL，每份進(jìn)樣2次，記錄色譜圖。結(jié)果馬來酸氯苯那敏平均含量為標(biāo)示量的102.34%，RSD為1.30%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取前述質(zhì)量濃度為45.62μg／mL的對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD為0.18%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號(hào)為170311的樣品，依法制備供試品溶液，室溫放置，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.20% （n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取批號(hào)為170311且已知含量的樣品適量（約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏0.6 mg），精密稱定，分別置6個(gè)50 mL容量瓶中，分別精密加入線性關(guān)系考察項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1 mL，依法制備供試品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

2.4 樣品測(cè)定

含量測(cè)定：取3種批號(hào)的復(fù)方銀翹氨敏膠囊各3 份，依法制備供試品溶液，精密量取 10 μL，照 2.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算標(biāo)示含量。結(jié)果3批樣品中馬來酸氯苯那敏的平均標(biāo)示含量分別為102.61%，104.20%，103.84%（n ＝3）。

表1 馬來酸氯苯那敏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

含量均勻度測(cè)定：取3種批號(hào)的樣品各10粒，依法制備供試品溶液，精密量取各10 μL，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰峰面積（以氯苯那敏計(jì)），按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2，符合2015年版《中國藥典（二部）》通則0941含量均勻度項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定（A+2.2 S≤L，L ＝ 15.0）。

表2 樣品含量均勻度測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)及流動(dòng)相選擇

根據(jù)對(duì)照品溶液紫外光譜圖分析，馬來酸氯苯那敏在215 nm和262 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，同時(shí)參考2015年版《中國藥典（二部）》馬來酸氯苯那敏含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件［8］，最終選擇262 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。比較流動(dòng)相 B分別為 0.02 mol／L磷酸二氫鉀溶液或0.02 mol／L 磷酸二氫鉀溶液 -三乙胺（100 ∶0.1）對(duì)色譜峰的影響。結(jié)果當(dāng)流動(dòng)相B為后者時(shí)，氯苯那敏峰形有明顯提高，且基線平穩(wěn)。

3.2 洗脫方式選擇

比較了等度洗脫和梯度洗脫的分離效能。當(dāng)采用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（30∶70）等度洗脫時(shí)，氯苯那敏峰與其他相鄰成分峰不能達(dá)到有效分離，而在梯度洗脫程序下，氯苯那敏峰分離度好，且保留時(shí)間在20 min內(nèi)，故采用梯度洗脫方法更適宜。

3.3 定量峰選擇

在研究中的色譜條件下，馬來酸氯苯那敏出現(xiàn)馬來酸與氯苯那敏2個(gè)峰［9-12］，但馬來酸出峰時(shí)間早，易與溶劑峰和維生素C色譜峰重疊，且氯苯那敏為有效成分，故選擇氯苯那敏峰進(jìn)行定量。