劉猛

摘要：目的：建立一種嬰兒配方奶粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯（OPO）的氣相色譜檢測方法。方法：用正己烷溶解樣品，通過耐高溫毛細管柱分離，再用氣相色譜儀FID檢測器檢測，內(nèi)標法定量。結(jié)果：樣品加標回收率在85%～95%，相對標準偏差在3%以內(nèi)，本方法的檢出限為0.8 ug/mL。結(jié)論：本方法操作簡便，檢出限低，重復性好，適用于嬰兒配方奶粉中OPO含量的測定。

關鍵詞：1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯；嬰兒配方奶粉

1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯（以下簡稱OPO）作為一種營養(yǎng)強化劑被中國衛(wèi)生部第13號公告[1]批準可用于嬰兒配方奶粉中。因此近年來，OPO成為各個嬰兒配方奶粉廠商常規(guī)添加物質(zhì)進而來模仿母乳的營養(yǎng)成分。結(jié)構(gòu)油脂OPO不僅具有改善嬰兒營養(yǎng)吸收的功能性，而且對完善骨骼強化及胃腸成熟等方面也有作用[2]。因此，檢測嬰兒配方奶粉中結(jié)構(gòu)油脂的含量就成為一個重要的課題。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

1.儀器

美國PE公司Clarus 580 氣相色譜儀，配有FID 檢測器；毛細柱：DB-1 HT 30 m ×0.25mm×0.10 um；德國蓋玻離心機；德國IKA漩渦振蕩器；德國 IKA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；梅特勒萬分之一天平；水浴鍋。

2.試劑

OPO標準品，純度≥99%，Sigma；內(nèi)標物-十七烷酸甘油三酯，純度≥99%，Sigma；正己烷，色譜純，DIKMA公司；乙醚、石油醚、無水乙醇，分析純，天津科密歐公司。

3.標準溶液的配制

稱量34.5 mg內(nèi)標物和4.9 mg OPO標準品于10 mL容量瓶中，分別用正己烷定容。內(nèi)標溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

4.實驗樣品

市售嬰兒配方奶粉 （配方中不含有 OPO）。

（二）試驗方法

1.儀器條件

進樣口溫度：320℃；柱溫箱：起始溫度300℃，保持1 min，以20℃/min的速率升至380℃保持10 min；檢測器溫度：370℃；載氣：高純氮，1.3 mL/min；空氣：450 mL/min；氫氣：45 mL/min；進樣量：1.0 uL；分流流量：20 mL/min。

2.樣品處理

（1）含淀粉的試樣：將固體樣品充分混勻，準確稱取1000.0 mg，精確到0.1mg，然后放置于毛氏抽脂瓶內(nèi)。向瓶中加入100 mg的淀粉酶（酶活力 1.5U/mg）并混勻。將適量去離子水加熱至45℃，取8-10 ml加入抽脂瓶中，搖勻。蓋緊瓶蓋并放入55℃水浴鍋中加熱2小時，于每10 min取出一次并搖勻。檢驗淀粉是否水解完全：向瓶中加入兩滴100 mmol/L的碘溶液，若未顯示藍色，說明水解完全。如若出現(xiàn)藍色，則要將抽脂瓶放回水浴鍋中繼續(xù)加熱，直至藍色消失，淀粉水解完全后再取出抽脂瓶冷卻。

（2）脂肪的提取：向抽脂瓶中加入氨水3.0 ml，混合均勻。將抽脂瓶放在60℃恒溫水浴鍋中反應15-20 min，然后取出冷卻到室溫。然后向瓶中加入乙醇 10 ml和剛果紅溶液一滴，混勻后加入乙醚 25 ml，將瓶塞蓋緊，放在振蕩器上1 min。接著加入石油醚 25 ml，再震1 min，于4000 r/min離心分層。將上清放在100 ml雞心瓶，這是第一次提取。然后對剩下的樣品重復上述提取步驟，得到的上清與第一次得到的合并。將雞心瓶置于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或氮吹儀上，除去溶劑，保留的殘渣即為脂肪。用10 mL正己烷溶解，得到樣品制備液備用。

3.標準品測定

分別吸取100 uL 1.1.3中的內(nèi)標和 900 uL 1.1.3中的OPO標準溶液于2 ml進樣瓶中，混勻。瓶內(nèi)內(nèi)標物終濃度為345 ug/mL，OPO終濃度為 441 ug/mL。標準品上機檢測，根據(jù)公式 1 計算響應因子Fi。

4.樣品測試

準確移取樣品制備液1 mL，再移取3.45 mg/mL的內(nèi)標1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容混勻，以備GC檢測。

5.回收率與精密度測定

分別在3份同一樣品中加入OPO標準品 10，20，40 mg，按照步驟處理，每個水平作三個平行，以峰面積為定量基準，計算方法回收率，并在同一水平計算其精密度。

6.檢出限測定

將1.2.3中配制的含OPO標準溶液注入GC檢測，以信噪比等于3來計算檢出限。

二、結(jié)果

（一）響應因子

通過下面公式計算OPO的響應因子。

經(jīng)過計算被測奶粉中OPO的含量為4.46%，根據(jù)衛(wèi)生部第13號公告要求，一段嬰兒配方奶粉中OPO的加入量應在3.2—9.6%。所以被測一段嬰兒配方奶粉中OPO的加入量是合乎要求的。

（三）回收率與精密度

在市售奶粉樣品中，依據(jù)1.2.5步驟考察回收率和精密度，由表1結(jié)果可以看出，加標回收率在85%～95%，相對標準偏差在3%以內(nèi)，滿足定量要求。

（四）方法檢出限

根據(jù)1.2.6計算可知，OPO的檢出限為0.8 ug/mL。

三、討論

通過以上結(jié)果可知，OPO（以C52計）通過高溫色譜柱可有效分離；用FID檢測器檢測，具有良好的重現(xiàn)性及回收率。檢測結(jié)果表明市售嬰兒配方奶粉中opo含量符合衛(wèi)生部第 13 號公告要求。綜上所述，該方法滿足奶粉生產(chǎn)企業(yè)對嬰兒配方奶粉產(chǎn)品中結(jié)構(gòu)油脂質(zhì)量的監(jiān)督及檢驗。

參考文獻：

[1]2008年中華人民共和國衛(wèi)生部第13號公告.

[2]王素雅，李國亮.構(gòu)造脂質(zhì)及脂肪酶促合成研究進展[J].中國油脂，2002，02.