趙佳琦，文勇立*，安雅靜，李子謙，齊沛森，李 強(qiáng)，扎 升，亡 頭，侯定超

（1.西南民族大學(xué)青藏高原研究院，四川成都 610041；2.四川省畜牧總站，四川成都 610041；3.金川縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心，四川金川 624100）

霉菌毒素是由霉菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，廣泛存在于發(fā)霉飼料原料（如玉米及秸稈、白酒糟）中，常見有黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEA）等。霉菌毒素導(dǎo)致動物肝功能損傷、生產(chǎn)性能下降等，并在機(jī)體內(nèi)積累、富集、放大，經(jīng)食物鏈危及人類健康[1]。由于反芻動物對霉菌毒素的耐受性高于單胃動物，往往未引起人們重視，但若其攝入被霉菌毒素污染的飼料，會使瘤胃微生態(tài)紊亂，抑制瘤胃發(fā)酵性能，影響血清生化指標(biāo)，進(jìn)而危害消化、繁殖等功能[2-3]。防治霉菌毒素污染的常用方法是在飼料中添加吸附劑[4]，其中，酵母細(xì)胞壁提取物（YCW）和蒙脫石（MMT）應(yīng)用廣泛。YCW主要成分為β-葡聚糖和甘露寡糖，可吸附、降解霉菌毒素，改善瘤胃菌群結(jié)構(gòu)[5]。MMT屬水合鋁硅酸鹽類（HSCAS）吸附劑，能夠與霉菌毒素結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物[6]。這2種吸附劑可減輕霉菌毒素對禽、豬生長及肝細(xì)胞的危害，降低血清轉(zhuǎn)氨酶濃度，提高飼料轉(zhuǎn)化率[7-8]。目前關(guān)于以上2種吸附劑的相關(guān)研究一般針對家禽或單胃動物，涉及牦牛等反芻動物的研究鮮見報道[9]，且忽略多種吸附劑混合使用。

牦牛是青藏高原地區(qū)重要的生產(chǎn)生活資料、經(jīng)濟(jì)發(fā)展支柱。為提高生產(chǎn)水平，部分地區(qū)將天然放牧轉(zhuǎn)變?yōu)樯犸暋肷犸曫B(yǎng)殖，其飼料投入品不可避免受到霉菌毒素污染。因此，本試驗旨在研究2種吸附劑對牦牛體重及血清生化指標(biāo)的影響，為相關(guān)研究及生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 MMT（＞95%，赤峰和明生化工有限公司）、YCW（甘露寡糖≥20%，β-葡聚糖30%～40%，安琪酵母股份有限公司）。

1.2 試驗設(shè)計 試驗于2018年4月11日—5月21日在四川省阿壩藏族羌族自治州金川縣慶寧牦牛養(yǎng)殖場進(jìn)行，預(yù)試期、正試期各20 d，預(yù)試期測定牦牛的體重和日采食量（干物質(zhì)基礎(chǔ)，下同），選取體重和采食量差異較?。?biāo)準(zhǔn)偏差在5%以內(nèi)）、健康、發(fā)育良好的牦牛32頭，雄性，年齡3.5歲。日糧精粗比為1:3.6（主要有玉米秸稈、玉米、白酒糟；主要營養(yǎng)成分為干物質(zhì)83.94%、粗蛋白質(zhì)12.55%、粗脂肪2.37%、粗纖維97.12%[10]），每天飼喂2次（06:00和18:00），自由采食和飲水，每次飼喂前先將吸附劑摻于部分飼料中混勻，待采食完全后再投喂剩余飼料。經(jīng)測定，平均體重、采食量分別為（288.25±12.04）kg和（9.00±0.31）kg。采用兩因素多水平隨機(jī)試驗設(shè)計，參考產(chǎn)品說明書及文獻(xiàn)[11]，MMT 4水平（占日糧干物質(zhì)比例，下同）分別為0（對照）、0.1%、0.2%、0.4%，YCW 4水平分別為0（對照）、0.2%、0.4%、0.6%，MMT各水平與YCW各水平交叉組合形成4×4共16個組合，設(shè)1組重復(fù)，共計牦牛32頭。試驗分組見表1。

表1 試驗分組

1.3 樣品采集 血樣采集：于結(jié)束試驗第2天，頸靜脈采血10 mL，4 000 r/min離心15 min，取血清，冷凍保存。

飼料樣品采集：采用《飼草產(chǎn)品抽樣技術(shù)規(guī)程》（NY/T 2129-2012）采集3種飼料樣品，于預(yù)試期前4 d，每天在06:00和18:00飼喂前每種飼料各采集2個樣品（100 g/個），避免雜質(zhì)和微生物污染，置塑料袋，冷藏。

1.4 測定指標(biāo)與方法 牦牛增重量：分別在正試前1 d和結(jié)束試驗第2天空腹稱重，后者與前者之差為增重量。

日采食量：預(yù)試期連續(xù)3 d，逐日測定并記錄每頭牦牛每天的喂料量和剩料量，二者之差為采食量。依照《飼料中水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)含量的測定》（GB/T 6435-2006）將風(fēng)干飼料換算為干物質(zhì)含量。

飼料AFB1含量：采用《飼料中AFB1的測定 酶聯(lián)免疫吸附法》（GB/T 17480-2008）及微波消解儀（CEM MARS6，美國 Py NN Inc.）、酶聯(lián)免疫檢測儀（Bio-Tek ELX808，中國，寶特科技有限公司）、AFB1酶聯(lián)免疫試劑盒（中國，百奧森科技有限公司；含AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，以色列，F(xiàn)ERMENTEK公司），測定玉米粉、白酒糟和玉米秸稈樣品中AFB1含量。

血清生化指標(biāo)：采用全自動生化分析儀（日立7600）測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶（GGT）和總膽汁酸（TBA）。

1.5 統(tǒng)計分析 根據(jù)文獻(xiàn)[12]介紹的方法，采用SPSS 22.0進(jìn)行多變量方差分析，并估計單因子效應(yīng)及交互效應(yīng)，采用LSD法進(jìn)行水平間多重比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中AFB1含量 由表2可知，與《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078-2017）中霉菌毒素限量比較，玉米粉的AFB1含量平均值在安全范圍內(nèi)，但玉米秸稈和白酒糟AFB1含量存在部分超標(biāo)現(xiàn)象。

表 2 飼糧中 AFB1 含量 μg/kg

2.2 2種吸附劑對牦牛增重及血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，3種處理中MMT組和混合組（MMT+YCW）對增重及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）等7個血清生化指標(biāo)的總體影響達(dá)到極顯著水平（P＜0.01），而YCW組對各變量總體影響不顯著（P＞0.05）。以上說明，飼料中添加MMT或混合添加2種吸附劑對牦牛增重及血清生化指標(biāo)具有影響。

方差分析顯示，MMT組對增重及ALT的影響極顯著（P＜0.01）；YCW僅對ALT作用顯著（P＜0.05）；混合組對增重及ALT的影響顯著（P＜0.05），說明飼料中單獨添加MMT或YCW或同時添加2種吸附劑均對牦牛增重量及ALT具有影響。

2.3 MMT對牦牛增重及血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，M0.1%組增重量顯著高于M0組和M0.2%組（P＜0.05），M0.2% 組 低 于 對 照 組（P＞0.05） 和M0.4%組（P＜0.05），M0.4%組高于M0組（P＞0.05），表明，MMT添加量為0.1%時，具有提高增重的作用。M0.1%組ALT濃度顯著低于M0組、M0.2%組、M0.4%組（P＜0.01），M0.2%組高于M0組（P＞0.05），M0.4%組 高 于 M0組、M0.2%組（P＞0.05）， 提 示MMT添加量大于0.1%時，對牦牛肝功能可能存在不利影響。AST濃度大小順序為M0.2%組＜M0.4%組＜M0.1%組＜M0組（P＞0.05），LDH和TBA濃度大小順序為M0.2%組＜M0.1%組＜M0.4%組＜M0組（P＞0.05）， 以 及 ALB濃 度 M0.2% 組 ＜M0.4% 組＜M0組 ＜M0.1%組（P＞0.05）。表明，當(dāng) MMT添加量達(dá)到0.2%時AST、LDH和TBA濃度最低，之后升高；而ALB濃度變化相反，添加量0.2%時最高，之后降低，但由于差異不顯著，結(jié)果有待于進(jìn)一步驗證。此外，M0.1%組、M0.2%組、M0.4%組中ALP和GGT濃度隨著MMT添加量的升高而逐漸下降（P＞0.05）。

2.4 YCW對增重及血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，各組中增重量大小順序為Y0.2%組＞Y0.6%組＞Y0.4%組＞Y0（P＞0.05），表明，YCW添加量為0.2%時，促進(jìn)牦牛生長。Y0.4%組中ALT濃度顯著低于其他3組（P＜0.05），其他3組差異不顯著（P＞0.05），表明日糧中添加YCW能有效降低ALT濃度，且當(dāng)添加量為0.4%時ALT濃度最低，添加量達(dá)到0.6%時ALT濃度升高。各組中ALB濃度大小順序為Y0.2%組＞Y0組 ＞Y0.6% 組 ＞Y0.4% 組（P＞0.05），LDH和 TBA濃度大小順序均為Y0.4%組＜Y0.6%組＜Y0.2%組＜Y0組（P＞0.05）?？梢?，在YCW添加量為0.2%時ALB濃度最高，添加量為0.4%時LDH和TBA濃度最低（P＞0.05），但由于結(jié)果差異不顯著，尚有待進(jìn)一步驗證。與Y0組相比，3個YCW組ALP濃度均有所升高（P＞0.05）。Y0.2%組、Y0.4%組、Y0.6%組AST和GGT濃度隨YCW添加量的升高呈下降趨勢（P＞0.05），與MMT對GGT影響的變化規(guī)律一致。

2.5 混合組對牦牛增重及血清生化指標(biāo)的交互效應(yīng)分析鑒于前述混合組（MMT+YCW）對增重量及ALT濃度的影響差異顯著（P＜0.05），而對其余指標(biāo)影響差異均不顯著（P＞0.05）。因此，僅對增重量及ALT進(jìn)行分析，由表3可知，各混合組比較，Y0.2%+M0.1%組的增重量均值最大（71.50 kg），其次為Y0.4%+M0.1%（61.00 kg）。這表明以MMT為0.1%、YCW為0.2%混合使用時牦牛體重增長較大；各混合組中，Y0.4%+M0.1%組ALT濃度最低（9.0 IU/L），其次為Y0.6%+M0.1%組（15.50 IU/L）。這表明以MMT為0.1%、YCW為0.4%混合使用時血清ALT濃度較低。

3 討 論

3.1 MMT和YCW對牦牛增重及血液生化指標(biāo)的影響本試驗在日糧中添加MMT，牦牛增重量顯著提高，這與Norouzian等[13]在羔羊日糧中添加HSCAS類吸附劑的結(jié)果一致。且本試驗所用的飼料中，玉米秸稈和白酒糟均存在霉菌毒素污染的現(xiàn)象，表明牦牛增重顯著提高是MMT對霉菌毒素吸附作用的結(jié)果[14]。當(dāng)MMT添加量為0.1%時，增重量最大，之后顯著下降，這一變化與王黎文等[11]、Grabherr等[15]研究奶牛飼糧中MMT添加量對日均采食量影響的規(guī)律一致?？梢姡^高劑量MMT不利于牦牛增重，究其原因，目前認(rèn)為可能有3點：其一，MMT具有較大的膨脹性[14]，吸水膨脹形成觸變凝膠體，阻礙食糜在瘤胃中的消化作用，產(chǎn)生“飽感”；其二，MMT可能影響飼料適口性，從而影響采食[16]；其三，MMT可能對飼料中氨基酸、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)有非選擇性吸附的特點，從而影響動物對營養(yǎng)成分的吸收[17]。本試驗中，當(dāng)MMT添加量達(dá)0.4%時，出現(xiàn)牦牛增重量上升的現(xiàn)象，有待進(jìn)一步研究。本試驗中添加YCW牦牛增重量有升高趨勢，與Young等[18]、Tao等[19]對肉牛及荷斯坦?fàn)倥Ｈ赵鲋氐南嚓P(guān)研究結(jié)果一致，但由于結(jié)果差異不顯著，尚需進(jìn)一步驗證。

ALT和AST是反映肝功能是否正常的重要指標(biāo)。霉菌毒素可損害肝臟功能，使血清中ALT、AST、LDH等濃度升高[20]，而HSCAS類物質(zhì)可減輕霉菌毒素對畜禽肝臟、腎臟等的損傷。本試驗中ALT濃度在MMT添加量為0.1%時最低，之后隨著MMT添加量的增加而升高，且該處理組的ALT濃度顯著低于對照組，AST濃度也有所降低，該趨勢與張建剛等[21]研究結(jié)果吻合，因此，本試驗推薦MMT添加劑量不超過0.1%，但該推薦劑量低于上述研究對奶牛日糧中添加0.5%MMT的推薦劑量[21]，可能與牦牛體重小、采食量小以及基礎(chǔ)日糧、霉菌毒素感染等不同情況有關(guān)。

YCW能提高動物的非特異性免疫功能，降低血清中ALT和AST水平[3,22]。Swamy等[23]將葡甘露聚糖添加到被霉菌毒素污染的飼料發(fā)現(xiàn)，可改善肉雞血清酶的異常情況。王兆鈞[24]也發(fā)現(xiàn)β-葡聚糖可緩解霉菌毒素對動物機(jī)體的不良影響。但上述文獻(xiàn)均未指出吸附劑的有效添加量。本試驗中在YCW添加量為0.4%時，ALT濃度顯著低于對照組，因此，將該劑量作為推薦劑量。

表3 MMT和YCW對牦牛增重及血清生化指標(biāo)的影響

LDH、GGT、TBA也能反映肝臟的健康狀況。本試驗添加2種吸附劑后，上述3個指標(biāo)的濃度均有下降趨勢。ALB能反映動物營養(yǎng)狀況和免疫水平[25]。本試驗單獨添加2種吸附劑均使ALB濃度有所上升，這與Devegowda等[26]的研究結(jié)果一致。以上說明2種吸附劑能夠維持ALB濃度，從而促進(jìn)機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的代謝。

3.2 2種吸附劑混合使用的效果 本試驗2種吸附劑混合使用顯著提高牦牛增重量，降低血清ALT濃度，這一結(jié)果與呂明斌等[16]、陳光明等[27]對肉雞的相關(guān)研究吻合。但就檢索文獻(xiàn)看，未見二者配合使用時的推薦劑量，本試驗Y0.2%+M0.1%組的牦牛增重量最大，且其ALT濃度低于對照組，由此說明該劑量吸附劑不僅可顯著提高增重量，還有效保護(hù)肝臟的正常生理功能，可作為推薦使用劑量。此外，混合使用吸附劑時增重量的最大值大于2種吸附劑單獨使用時的最大值，混合使用吸附劑時ALT濃度最小值也小于2種吸附劑單獨使用時的最小值，可見，兩者混合使用較單獨使用任意一種吸附劑的作用效果更好，這也與陳光明等[25]的試驗結(jié)果一致。張彩霞等[28]針對體外吸附試驗也指出MMT與YCW配合使用較單一吸附劑的作用效果顯著。這是由于MMT僅適于吸附帶有極性基團(tuán)的霉菌霉素，而不易吸附極性不強(qiáng)的霉菌毒素[29]，但YCW中β-葡聚糖恰好彌補(bǔ)了MMT的這一缺陷。β-葡聚糖呈非常穩(wěn)定的螺旋結(jié)構(gòu)，可通過氫鍵和范德華力與多種霉菌毒素相互作用[5]。而YCW中甘露寡糖（MOS）成分還起到免疫增強(qiáng)劑的作用，MOS不但能促進(jìn)有益菌增殖，還能吸附病原菌，改善腸道微生態(tài)，增強(qiáng)動物非特異性免疫，提高動物抵抗力[30]。因此，2種吸附劑功能互補(bǔ)，使作用效果更顯著。

4 結(jié) 論

適量添加MMT或YCW或混合使用2種吸附劑能促進(jìn)牦牛體重增長，保護(hù)肝功能，且混合使用較單獨使用，效果更優(yōu)。牦牛日糧中MMT適宜添加量為0.1%，YCW為0.4%。推薦以MMT為0.1%、YCW為0.2%聯(lián)合使用，可顯著增加牦牛增重量，并具有保護(hù)肝功能的作用。