陳 亮 林永鍇 張曉艷 王 英 劉 晃 劉興章**

1. 南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞廣濟(jì)醫(yī)院（廣東東莞 523690）；2. 廣東省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所

環(huán)境污染的惡化和社會壓力的增加，很大程度上對人類的繁衍產(chǎn)生了不可低估的影響，尤其是對妊娠結(jié)局的影響和干擾，更是值得生殖醫(yī)學(xué)工作者關(guān)注的焦點(diǎn)。有學(xué)者[1,2]認(rèn)為男性精子的核成熟度與精子的體外受精能力密切相關(guān)，可以影響輔助生殖包括夫精人工授精（AIH）、體外受精（IVF）、卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射（ICSI）的妊娠結(jié)局；也有學(xué)者[3]認(rèn)為女性ICSI的受精率和妊娠率與精子核成熟度沒有任何關(guān)系，輔助生殖結(jié)局不受影響。精子的細(xì)胞核是保持精子遺傳物質(zhì)的重要構(gòu)成部分，它是否會影響妊娠結(jié)局尚有待于更多的論證和觀察。筆者分析了108例配偶妊娠的男性不育患者的臨床資料，觀察了正常生育者和異常妊娠者之間的精子參數(shù)以及精子核成熟度的差異，分析了精子核成熟度與妊娠結(jié)局之間的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

資料與方法

一、一般資料

所有研究對象均來源于我院生殖?？崎T診，因不孕不育而進(jìn)行輔助生殖助孕，其中行宮腔內(nèi)人工授精（IUI）助孕81例，體外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕27例，其配偶在我院確診為早孕，均簽署知情同意書，能配合全身體格檢查，生殖器發(fā)育正常；能按照WHO第五版《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》[4]的規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)收集精液標(biāo)本；愿意配合并接受相關(guān)檢查和隨訪。并排除染色體核型異常及Y染色體微缺失等遺傳性疾病；排除先天性疾病及全身系統(tǒng)性疾病史；排除生殖道感染、傳染性疾病史；排除睪丸外傷、隱睪等手術(shù)史；排除長期藥物、毒性物質(zhì)接觸史。

二、分組方法

根據(jù)12個(gè)月的隨訪結(jié)果分為正常生育組和異常妊娠組，其中正常生育組74人，以正常生育小孩為標(biāo)準(zhǔn)。異常妊娠組34人，以未正常生育小孩為標(biāo)準(zhǔn)，其中包含配偶生化妊娠、早期流產(chǎn)、晚期終止妊娠等。

三、檢測方法

（一）精子常規(guī)分析

參照WHO第五版《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》[4]標(biāo)準(zhǔn)，采用手淫法收集研究對象禁欲2～7d后的新鮮精液樣本，置于37℃恒溫水浴箱，待精液完全液化后應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀（CASA）在雙人核對下進(jìn)行精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率等指標(biāo)的檢測。

（二）精子形態(tài)學(xué)分析

參照WHO第五版《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》[4]標(biāo)準(zhǔn)，采用改良巴氏染色法進(jìn)行精子染色，在雙人核對制度下由2位實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人員進(jìn)行閱片，每片計(jì)數(shù)200個(gè)精子，計(jì)算正常形態(tài)精子百分率。

（三）精子成熟度檢測

由專人負(fù)責(zé)采用苯胺藍(lán)染色分析法進(jìn)行精子核成熟度的分析，具體操作步驟參照精子成熟度檢測試劑盒（深圳博銳德生物醫(yī)學(xué)工程有限公司）。

四、隨訪方法

有專人進(jìn)行跟蹤隨訪，從婦科確診其配偶妊娠后開始定期隨訪，于其配偶妊娠1個(gè)月內(nèi)、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月進(jìn)行定期隨訪，記錄其配偶身體健康指標(biāo)及胚胎發(fā)育情況。

五、統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所得計(jì)量數(shù)據(jù)用均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、一般人口學(xué)特征比較

108例配偶受孕的不育癥患者中，正常生育74人，異常妊娠（包括生化妊娠、早期流產(chǎn)、晚期引產(chǎn)等）34例，兩組對象在年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、配偶年齡、配偶BMI等一般人口學(xué)指標(biāo)無差異，具有可比性，結(jié)果見表1。

表1 兩組一般人口學(xué)特征比較（±s）

表1 兩組一般人口學(xué)特征比較（±s）

組別 樣本量(N) 年齡(歲) BMI(kg/m2) 配偶年齡(歲) 配偶BMI(kg/m2)正常生育組 74 33.42±5.54 23.15±1.86 31.95±5.42 21.56±1.69異常妊娠組 34 33.26±4.29 23.52±1.34 30.91±3.89 21.50±1.31 t-0.142 -1.024 0.992 0.185 P-0.887 0.308 0.324 0.854

二、兩組精子參數(shù)比較

兩組間精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率、正常形態(tài)精子百分率無明顯差異（P＞0.05），正常生育組精子核成熟度顯著高于異常妊娠組（P＜0.01），精子核成熟度與妊娠結(jié)局呈正相關(guān)（r=0.413,P=0.000），結(jié)果見表2、表3。

表2 兩組精子參數(shù)比較（±s）

表2 兩組精子參數(shù)比較（±s）

組別 樣本量(N) 精子濃度(×106/mL) 前向運(yùn)動精子(%) 正常形態(tài)精子(%) 精子核成熟度(%)正常生育組 74 43.45±35.73 43.86±17.28 2.80±0.89 0.40±0.10異常妊娠組 34 44.62±30.10 44.41±15.05 2.97±0.82 0.29±0.11 t--0.165 -0.157 -0.957 -4.564 P-0.869 0.875 0.341 0.000

表3 精子核成熟度與妊娠結(jié)局的相關(guān)性分析結(jié)果

討 論

精子核的成熟是評估其穩(wěn)定程度的標(biāo)志，尤其是保障精子所攜帶的生物遺傳物質(zhì)能夠得到延續(xù)的重要手段。當(dāng)精子核內(nèi)的染色物質(zhì)包裝不完善時(shí)候，精子的生物學(xué)特性比如精子數(shù)量、活動能力、精子頂體功能、精子形態(tài)以及DNA碎片等都會受到一定的影響[5,6]。Mantas等[7]利用TUNEL法檢測精子DNA碎片率時(shí)候發(fā)現(xiàn)，精子DNA碎片指數(shù)高的患者，其精子核的成熟度顯著低于對照組。Piomboni等[8]通過透射電子顯微鏡將精子的核放大到數(shù)萬倍后發(fā)現(xiàn)，發(fā)育差的精子，其核內(nèi)染色質(zhì)的致密程度顯著低于發(fā)育良好的精子。因此，精子的核成熟程度對于精子的生物學(xué)特性有著一定的影響。

Bareh等[9]發(fā)現(xiàn)精子的DNA碎片數(shù)量與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)密切相關(guān)，它是導(dǎo)致女性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的一個(gè)重要因素。劉瑜等[10]在孕早期自發(fā)性流產(chǎn)與胚胎停育男性因素的病例對照研究中發(fā)現(xiàn)，精子的核成熟程度是影響女性早期自發(fā)性流產(chǎn)與胚胎停育的一個(gè)重要因素，在對女性妊娠結(jié)局的預(yù)測和評估時(shí)，建議檢測男方的精子核成熟度，以了解男方精子的DNA損傷情況。我們通過對比研究也發(fā)現(xiàn)，108例研究對象的妊娠配偶，在排除了女方年齡、BMI等干擾因素后，正常生育組與異常妊娠組在精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率、正常形態(tài)精子百分率等方面都沒有差異，但異常妊娠組的精子核成熟度卻顯著低于正常生育組，這可能是導(dǎo)致異常妊娠組胚胎發(fā)育不良的一個(gè)因素，值得我們作進(jìn)一步大量本、多中心的觀察和研究。

Soderlund等[11]研究表明，精子核成熟度低的男性精子在與卵子結(jié)合形成受精卵后，仍然會干擾受精卵的著床和早期發(fā)育。Henkel等[12]發(fā)現(xiàn)，精子核成熟度甚至?xí)绊懩遗咂诘呐咛グl(fā)育，而導(dǎo)致囊胚停育。白文俊等[13]在重視妊娠失敗中的男性因素評估中表明，男性精子核成熟度對于妊娠失敗的影響不可忽視。杜江平等[14]應(yīng)用枸杞子、淫羊藿聯(lián)合維生素C、維生素E和精氨酸對少弱畸形精子癥綜合治療后發(fā)現(xiàn)，精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)得到明顯改善，精子核成熟度有顯著提高。王霞等[15]應(yīng)用尿卵泡刺激素聯(lián)合人絨毛膜促性腺激素治療也能夠使精子核成熟度增加。我們通過雙變量相關(guān)分析表明，精子核成熟度與妊娠結(jié)局呈正相關(guān)（r=0.413,P=0.000），因此，在評估和預(yù)測女方妊娠結(jié)局時(shí)，我們也建議有必要了解和分析男方精子核成熟度的高低，當(dāng)發(fā)現(xiàn)男方精子核成熟度偏低的狀態(tài)下配偶出現(xiàn)意外或者計(jì)劃懷孕時(shí)，有必要進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋Ｌブ委煟员Ｕ吓咛グl(fā)育的質(zhì)量。育齡期男性在備育前最好進(jìn)行精子核成熟度的檢測，當(dāng)發(fā)現(xiàn)精子核成熟度低下，可以應(yīng)用抗氧化劑、中醫(yī)中藥等有效手段進(jìn)行改善，以保證配偶受孕后胚胎的優(yōu)質(zhì)。