張峰峰,周 可,謝鳳行,趙 瓊,趙玉潔
(天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心,天津 300192)
解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)及其代謝產(chǎn)物具有豐富的生物學(xué)活性和廣泛的抗致病菌功能,對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、鮑曼不動桿菌(Boottanun 等,2017)、黃曲霉(Wang等,2015)等均具有較強(qiáng)的抑制作用,在種植業(yè)中不僅可以促進(jìn)植物生長,還可防治黃瓜枯萎?。⊿hao等,2015)、葡萄霜霉?。℅uo 等,2017)等,在養(yǎng)殖業(yè)不僅可以作為飼料添加劑提高養(yǎng)殖生物生產(chǎn)性能(Ahmed等,2014),還可抑制消化道內(nèi)有害微生物,改善動物腸道健康(Selim等,2015),改善免疫功能,提高抗病能力(Reda 等,2015),另外,該菌株還可凈化養(yǎng)殖環(huán)境,防治水體富營養(yǎng)化,抑制藍(lán)藻水華(Yu 等,2015;李超等,2011),具有廣闊的應(yīng)用前景。
本實驗室從天津市西青區(qū)污染河溝污泥分離鑒定了一株解淀粉芽孢桿菌HN(Bacillus amyloliquefaciens HN),研究發(fā)現(xiàn)其在不同污染水體中對硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮以及化學(xué)需氧量(COD)等均有很好的去除效果 (Xie等,2013;謝鳳行等,2012),環(huán)境耐受能力強(qiáng),在較寬的溫度、pH及鹽濃度的范圍內(nèi)都能正常生長(謝鳳行等,2013),且其產(chǎn)胞外淀粉酶和蛋白酶能力均較強(qiáng)(謝鳳行等,2010、2009)。
為了中試生產(chǎn)需要對該菌株進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化,液體發(fā)酵活菌濃度最高可達(dá)41.7×108cfu/mL(謝鳳行等,2013)。然而液體發(fā)酵技術(shù),對設(shè)備要求高,生產(chǎn)工藝復(fù)雜,成本高,菌數(shù)低,易污染;而固體發(fā)酵采用的原料一般是廉價的農(nóng)副產(chǎn)品(如豆粕、麩皮等),產(chǎn)用的設(shè)備也較液體發(fā)酵簡單,無需處理大量污水,發(fā)酵產(chǎn)品經(jīng)烘干粉碎不需其他加工處理即可得到固體菌劑,生產(chǎn)成本大大低于液體發(fā)酵(杜英,2013),且固體發(fā)酵產(chǎn)品菌數(shù)、芽孢數(shù)(王卉等,2016;楊柳等,2013)和部分代謝產(chǎn)物含量(Prajapati等,2015;Zhu 等,2013)均高于液體發(fā)酵產(chǎn)品,使用效果更好,且固體發(fā)酵產(chǎn)品干燥后更易于長距離運輸,有利于菌劑更大范圍的推廣和應(yīng)用。為此,本研究對解淀粉芽孢桿菌HN固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件進(jìn)行試驗,以提高固體發(fā)酵產(chǎn)物活菌數(shù),為生產(chǎn)上進(jìn)行規(guī)模固體發(fā)酵高濃度菌劑提供技術(shù)支撐。
1.1 材料 供試菌種解淀粉芽孢桿菌HN(B.amyloliquefaciens HN)分離自天津市西青區(qū)某污染河溝污泥,由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心進(jìn)行鑒定,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏號CGMCC No.3261。
1.2 試驗方法 種子液制備:種子液的制備將30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h的斜面菌株接一環(huán)放入種子培養(yǎng)液中,置于30℃、150r/min下振蕩培養(yǎng)24h,制成含菌量為1.0×109cfu/mL的種子液。液體培養(yǎng)基成分為可溶性淀粉10g,蛋白胨10g,NaCl 3g,K2HPO41g,MgSO4·7H2O0.5g,CaCO31g,水1000mL。
固體發(fā)酵方法:每1000 mL直筒塑料瓶中裝100 g固體物料(以麩皮計)培養(yǎng)基,用封口膜封口,121℃滅菌20 min,冷卻至室溫,接入種子液,混勻后于25~30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),間時拍打,使其均勻生長,培養(yǎng)48 h。稱取10 g固體發(fā)酵物,90 mL無菌水稀釋后,150 r/min下振蕩30 min,涂板進(jìn)行菌落計數(shù),重復(fù)3次。各因素在前一因素的最佳水平下逐級優(yōu)化。
1.3 試驗設(shè)計
1.3.1 培養(yǎng)基物料對固體發(fā)酵的影響 選取價格低廉的工農(nóng)業(yè)廢棄物麩皮、玉米粉、豆粕、大豆粉等制備基質(zhì),對菌株進(jìn)行固體發(fā)酵,121℃滅菌30 min,冷卻后接入HN種子液,30℃ 培養(yǎng)48 h。涂板計數(shù)。
1.3.2 外加碳源、氮源、無機(jī)鹽對固體發(fā)酵的影響 為研究外加碳源對固體發(fā)酵的影響分別向固態(tài)基質(zhì)中添加0.2%的可溶性淀粉、乳糖、麥芽糖、葡萄糖和蔗糖;為研究外加氮源對固體發(fā)酵的影響分別向固態(tài)基質(zhì)中添加0.2%的蛋白胨、胰蛋白胨和酵母浸粉;為研究外加無機(jī)鹽對固體發(fā)酵的影響分別向固態(tài)基質(zhì)中添加0.02%的NaH2PO4·2H2O,KH2PO4、MnSO4·H2O、MgSO4·7H2O 和 FeSO4·7H2O,發(fā)酵條件按照30℃培養(yǎng)48 h,菌落計數(shù),重復(fù)3次。將不添加任何外加物質(zhì)作為空白對照,根據(jù)外源物質(zhì)的單因素篩選結(jié)果,選擇對固體發(fā)酵水平影響較大的可溶性淀粉、 蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O設(shè)計4因素3水平正交試驗。
1.3.3 料水質(zhì)量比對固體發(fā)酵的影響 料水優(yōu)化試驗調(diào)節(jié)培養(yǎng)基料水(水量包括接種的20 mL菌液) 質(zhì)量比為 1∶2、1∶1.5、1∶1.2、1∶1、1∶0.8、1∶0.6、1∶0.4、1∶0.2。
1.3.4 接種量對固體發(fā)酵的影響 接種量優(yōu)化試驗按照5%、10%、15%、20%和25%的接種量接種HN菌懸液;攪拌均勻,30℃培養(yǎng)48 h,菌落計數(shù),重復(fù)3次。
1.3.5 溫度對固體發(fā)酵的影響 溫度優(yōu)化試驗將發(fā)酵溫度設(shè)置為 20、25、28、33、37 ℃, 培養(yǎng) 48 h,菌落計數(shù),重復(fù)3次。
1.3.6 最佳培養(yǎng)條件下的生長曲線 時間優(yōu)化試驗分別將固體發(fā)酵物培養(yǎng) 0、6、12、18、24、30、36、42、48 h和 54 h,菌落計數(shù),重復(fù) 3次。
1.3.7 干燥方法對菌劑菌數(shù)的影響 使用不同的干燥溫度和干燥方法,測定固體菌劑含水量和活菌濃度變化。
1.3.8 固體菌劑的激活試驗 加入無菌水對菌劑進(jìn)行二次發(fā)酵,測定活菌濃度。
1.4 數(shù)據(jù)分析 試驗結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,運用軟件SPSS 19.0,經(jīng) One-way ANOVA分析,采用Duncan’s多重檢驗分析試驗結(jié)果的差異顯著性,P<0.05為差異顯著。
2.1 不同培養(yǎng)基物料對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響在固體發(fā)酵過程中,固體底物具有雙重功能,一方面底物可為微生物生長繁殖提供營養(yǎng)物質(zhì),另一方面是提供微生物的黏附的功能。固體底物的資源存量、價格和保存時間等是影響其選擇為固體發(fā)酵底物的關(guān)鍵因素,本試驗對HN菌數(shù)影響結(jié)果見圖1。隨著發(fā)酵物料的不同,各個處理固體發(fā)酵的菌數(shù)不同,其中以麩皮為底物的處理菌數(shù)最高,為 2.94×1010cfu/g,顯著高于其他處理(P < 0.05)??赡苁躯熎の锪媳容^膨松,在HN的生長過程中可提供適宜的好氧環(huán)境,同時可能該菌能夠較容易地破碎麩皮,并利用麩皮中的營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行繁殖,在以后的試驗中選取麩皮作為固體發(fā)酵底物。
2.2 外源添加物質(zhì)對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
圖1 不同固體物料對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.2.1 碳氮源對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響 碳源或氮源對菌數(shù)的影響見圖2。結(jié)果表明淀粉、乳糖、蔗糖等碳源的添加處理和對照未添加碳氮源相比,固體發(fā)酵菌數(shù)有顯著的提高(P<0.05),而添加葡萄糖處理的菌數(shù)和對照無顯著差異(P>0.05),而添加麥芽糖處理的菌數(shù)顯著低于對照(P<0.05)??紤]到添加碳源物質(zhì)的成本、溶解性和保存的特點,試驗最終選擇淀粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源。選擇的三種氮源添加處理和對照相比,添加蛋白胨和胰蛋白胨的處理菌數(shù)顯著高于對照(P<0.05),而酵母浸粉和對照相比,無顯著差異(P>0.05),而蛋白胨具有購買方便、價格較低、容易保存等特點,因此選擇其作為發(fā)酵培養(yǎng)基的基本氮源。
圖2 不同碳氮源添加對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.2.2 無機(jī)鹽對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響 無機(jī)鹽對菌數(shù)的影響見圖3。與對照相比,添加KH2PO4、MgSO4·7H2O的處理菌數(shù)顯著增加 (P<0.05),說明這兩種無機(jī)鹽對菌體生長具有較好的促進(jìn)作用,而添加 FeSO4·7H2O、NaH2PO4·2H2O兩種無機(jī)鹽處理的菌數(shù)和對照相比無顯著差異(P > 0.05),而添加 MnSO4·H2O 處理的菌數(shù)顯著低于對照,說明MnSO4對菌體的生長有顯著的抑制作用。因此,在HN固體發(fā)酵過程中選擇KH2PO4、MgSO4·7H2O 作為緩沖物和金屬鹽用于固體發(fā)酵。
圖3 不同無機(jī)鹽對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.2.3 外源物質(zhì)對HN固體發(fā)酵影響的正交試驗 由極差分析(表1)可知,影響HN固體發(fā)酵的主次因素為可溶性淀粉>蛋白胨>KH2PO4>Mg-SO4·7H2O。最佳水平組合為A2B2C3D3。因此,固體發(fā)酵最優(yōu)外源物質(zhì)組成為可溶性淀粉、蛋白胨、KH2PO4和MgSO4·7H2O,添加量分別為固體物料的0.2%、0.2%、0.1%、0.03%。由表2可知,可溶性淀粉對菌數(shù)的影響達(dá)到顯著水平 (P<0.05),在固體發(fā)酵過程中應(yīng)嚴(yán)格控制可溶性淀粉的使用量,而其他因素影響未達(dá)到顯著水平(P > 0.05)。
表1 固體發(fā)酵培養(yǎng)基外源物質(zhì)組分正交試驗結(jié)果
2.3 不同料水比對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響本試驗結(jié)果表明(圖4),隨著水分含量逐漸減小,菌數(shù)出現(xiàn)先升高后降低的趨勢,在料水比為1∶0.8的條件下,菌數(shù)最高,為3×1010cfu/g,顯著高于其他處理(P<0.05),說明培養(yǎng)基中的水分含量對固
表2 固體發(fā)酵培養(yǎng)基外源物質(zhì)組分正交試驗結(jié)果方差分析
體發(fā)酵菌數(shù)的影響特別明顯,而料水比1∶0.8的處理下,菌株的通氣和營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化達(dá)到最佳平衡,既可使固態(tài)基質(zhì)保持疏松,充分利用氧氣的流通和熱量的傳遞;又可為微生物生長提供營養(yǎng),繁殖產(chǎn)生大量菌體。因此,試驗選擇料水比1∶0.8的處理進(jìn)行固體發(fā)酵。
圖4 不同料水比對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.4 不同接種量對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響由圖5可知,本試驗中HN菌落數(shù)隨接種量的增加呈先升高后降低的趨勢,接種量為20%時,HN菌落數(shù)達(dá)到最大值。
圖5 不同接種量對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.5 不同培養(yǎng)溫度對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響由圖6可知,該菌株在20~37℃均能生長。當(dāng)溫度為28℃時,固體發(fā)酵菌數(shù)最多,為3.69×1010cfu/g,顯著高于其他溫度發(fā)酵物含菌量 (P< 0.05),說明28℃為該菌最適宜的固體發(fā)酵溫度。
圖6 不同溫度對HN固體發(fā)酵菌數(shù)的影響
2.6 HN在最優(yōu)條件下的生長曲線 在最優(yōu)培養(yǎng)基和最優(yōu)條件下,菌株HN在18 h進(jìn)入對數(shù)生長期,在 48 h 達(dá)到最大值 3.99×1010cfu/g(圖 7)。菌株HN主要通過菌體細(xì)胞繁殖消耗水體中的有害物質(zhì)從而達(dá)到凈化水質(zhì)的目的,因此,HN的固體發(fā)酵周期控制在48 h內(nèi)較為合理。
圖7 HN固體發(fā)酵生長曲線
2.7 不同干燥方法對固體菌劑含水量及活菌數(shù)的影響 由于芽孢桿菌具有較好的耐熱性能,所以,選擇50℃和60℃烘干以及室溫風(fēng)干三種干燥方式,測定不同干燥方式下菌劑含水量和菌濃度的變化。從表3可以看出,采用不同干燥方式,固體菌劑的含水量變化不同,其中在50℃和60℃烘干的條件下,菌劑含水量在24 h內(nèi)均降低至8%以下,而風(fēng)干方式下固體菌劑含水量60 h后降低至9%以下。說明在烘干條件下干燥菌劑較自然風(fēng)干條件下干燥菌劑的效率較高,可提高1倍以上。不同方式的干燥過程中菌數(shù)均有顯著的降低趨勢,到最終干燥結(jié)束(即含水量低于9%),測定在50℃和60℃烘干的條件下,活菌濃度分別為 24.35×108cfu/g 和 30.24×108cfu/g,而在自然風(fēng)干條件下,活菌濃度為49.67×108cfu/g,均顯著低于初始濃度3.8×1010cfu/g。說明干燥過程中由于水分的蒸發(fā)使活菌數(shù)減少較多,且烘干處理的活菌數(shù)顯著低于自然風(fēng)干處理的活菌數(shù) (P<0.05)。對不同干燥方式測定的含水量和菌數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),各個處理的含水量和菌數(shù)的相關(guān)性均達(dá)到極顯著相關(guān)(P<0.01),說明菌劑的活菌數(shù)受菌劑中含水量影響較大,在以后的菌劑生產(chǎn)和使用中要重點考慮水分對菌數(shù)的影響。對比三種干燥方法,如果考慮生產(chǎn)效率,則采用烘干的方法,要考慮菌數(shù)含量,則采取自然風(fēng)干的方法。
表3 干燥方式對HN固體發(fā)酵物含水量和活菌數(shù)的影響
2.8 固體菌劑的激活試驗 由于干燥后活菌數(shù)顯著降低,后期使用過程中如何提高活菌數(shù)成為需要解決的問題。取干燥后的菌劑,按照1∶0.8的料水比例,加入無菌水,28℃培養(yǎng),進(jìn)行激活發(fā)酵,定時進(jìn)行活菌數(shù)測定發(fā)現(xiàn)(圖8),菌劑的活菌數(shù)逐漸增加,在發(fā)酵48 h后,菌劑的活菌數(shù)達(dá)到3.72×1010cfu/g,和固體發(fā)酵菌劑干燥前水平相當(dāng),在以后的實際應(yīng)用中,可以指導(dǎo)用戶加入干凈水進(jìn)行二次發(fā)酵激活菌劑,從而提高菌劑的菌數(shù),增強(qiáng)使用效果。
圖8 干燥后菌劑的激活試驗
在固體發(fā)酵過程中,固體發(fā)酵基質(zhì)是主要的影響因素。王卉等(2016)則采用花生餅粉∶麩皮∶棉籽粕=53∶35∶12(m∶m∶m)作為基質(zhì)進(jìn)行解淀粉芽孢桿菌的固體發(fā)酵,最終活菌數(shù)最高為2.13×1010cfu/g;楊柳等(2013)研究結(jié)果也表明麩皮和豆粕為芽孢桿菌最適發(fā)酵基質(zhì),該發(fā)酵基質(zhì)被分解后不易結(jié)塊,孔隙率和通氣性較好,有利于菌株的生長繁殖。秦宇軒等(2017)選擇麩皮和豆粕的碳氮比為1∶2.8基礎(chǔ)上添加20%的稻谷殼,稻谷殼堅硬的外殼能夠?qū)虘B(tài)基質(zhì)起到有效的支撐作用,以此來增加固態(tài)基質(zhì)中空氣的流動性,從而促進(jìn)解淀粉芽孢桿菌的生長,菌數(shù)達(dá)1.68×1010cfu/g。本研究通過比較不同發(fā)酵基質(zhì)發(fā)現(xiàn)麩皮為最佳的發(fā)酵基質(zhì),菌數(shù)可達(dá) 2.94×1010cfu/g。
固體發(fā)酵物中的碳源和氮源是影響微生物生長繁殖和產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的另一個重要因素。一般常用的外加碳源有葡萄糖、淀粉、蔗糖、麥芽糖和甘油等。外加氮源主要有蛋白胨、豆粉、硫酸銨、硝酸銨和酵母浸粉等。碳氮源質(zhì)量比也非常重要,若碳源過多,菌株可能生長緩慢,易被雜菌污染而失效;氮源過多,微生物就會大量繁殖,不利于次級代謝產(chǎn)物的累積。本試驗最終采用可溶性淀粉作為外加碳源,蛋白胨作為外加氮源,最適濃度均為0.2%。無機(jī)離子在固體發(fā)酵過程中也起到重要作用,其能夠調(diào)節(jié)固體發(fā)酵基質(zhì)的酸堿平衡、維持滲透壓、構(gòu)成如蛋白質(zhì)等活性物質(zhì)的輔基或功能團(tuán)等,本試驗結(jié)果表明,KH2PO4、MgSO4·7H2O能夠顯著增加菌落總數(shù),有研究證明MgSO4·7H2O可促進(jìn)芽孢桿菌生長繁殖,增加酶類等物質(zhì)的分泌活性(Vimala 等,2015)。
料水質(zhì)量比主要通過影響固體發(fā)酵過程中的供氧量和孔隙度來決定固體發(fā)酵的水平,是決定固體發(fā)酵能否成功的重要因素(梁雪杰等,2013)。高料水質(zhì)量比時固態(tài)培養(yǎng)基水分含量過少,會影響溶氧能力和傳遞氧能力,從而限制菌落的生長;低料水質(zhì)量比可使固態(tài)培養(yǎng)基凝結(jié)成塊,導(dǎo)致多孔性、溶氧量和散熱性降低而影響發(fā)酵水平,增加雜菌污染的機(jī)率和干燥成本。本試驗料水質(zhì)量比最終采用1∶0.8,一方面可使固態(tài)基質(zhì)保持疏松,充分利用氧氣的流通和熱量的傳遞;另一方面可為微生物生長提供營養(yǎng)。
固體發(fā)酵通常采用菌懸液作為種子培養(yǎng)基,以液固2相的發(fā)酵方式進(jìn)行,需要合適的接種量。本試驗經(jīng)過優(yōu)化選取20%的接種量,因為接種量較小會延長發(fā)酵周期,成本增大,且會增加雜菌污染機(jī)率,影響發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量(梁雪杰等,2013);接種量過大會加速固體發(fā)酵培養(yǎng)基的消耗,使基質(zhì)中溶氧不足或營養(yǎng)物質(zhì)過度消耗,不利于菌落數(shù)的增加,且菌株產(chǎn)生的次級代謝物會抑制菌落的繁殖,降低菌株固體發(fā)酵的數(shù)量(孫鎮(zhèn)平等,2014)。
固體發(fā)酵的培養(yǎng)溫度是影響菌體生長的重要環(huán)境條件,在液體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn)HN的最適生長溫度為37℃(謝鳳行等,2013)。本試驗結(jié)果表明,HN的最適發(fā)酵溫度為28℃,究其原因,可能是固體發(fā)酵過程中散熱較液體發(fā)酵慢,菌體自身發(fā)酵產(chǎn)生熱量可促進(jìn)菌體的生長,如果固體發(fā)酵環(huán)境溫度過高,則會影響菌體的生長。
固體發(fā)酵的時間一般是3~7 d,發(fā)酵時間對微生物繁殖有著重要的影響。發(fā)酵周期短,基質(zhì)營養(yǎng)利用不充分,造成浪費;周期過長,菌體自溶,影響活力,本試驗發(fā)現(xiàn)HN固體發(fā)酵48 h菌數(shù)達(dá)到最高值,而后再繼續(xù)發(fā)酵導(dǎo)致固體培養(yǎng)基中氨化嚴(yán)重,物料變黑,氣味刺鼻,嚴(yán)重影響了菌劑的品質(zhì)。
本研究通過優(yōu)化解淀粉芽孢桿菌HN的固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,確定了最佳固體培養(yǎng)基質(zhì)為麩皮;外源物最優(yōu)添加量(百分比按固態(tài)基質(zhì)質(zhì)量為基準(zhǔn))為可溶性淀粉0.2%,蛋白胨0.2%,KH2PO40.1%,MgSO4·7H2O 0.03%,溫度 28 ℃,料水比為1∶0.8,進(jìn)行 48 h的發(fā)酵,解淀粉芽孢桿菌的菌數(shù)可達(dá)3.99×1010cfu/g以上。
固體發(fā)酵后菌劑的干燥過程也是菌劑生產(chǎn)中最重要的環(huán)節(jié),發(fā)酵產(chǎn)品菌數(shù)較高,干燥效果直接關(guān)系最后菌劑的使用效果。其中菌劑的水分含量是首要的測定指標(biāo),過高則達(dá)不到產(chǎn)品要求,菌劑易發(fā)生霉變,過低則導(dǎo)致菌劑活菌數(shù)過低,影響使用效果。參考NYT 2131-2012《飼料添加劑 枯草芽孢桿菌》菌劑標(biāo)準(zhǔn),水分含量達(dá)到9%以下方為合格菌劑,因此,本研究采用三種干燥方法對菌劑的水分進(jìn)行去除,在測定含水量使其達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的同時測定菌劑中的活菌數(shù),結(jié)果表明,隨著含水量的減少,菌劑活菌數(shù)也相應(yīng)減少。最終在含水量達(dá)到9%以下時活菌數(shù)減少80%以上。其中,自然風(fēng)干處理的活菌數(shù)顯著高于烘干兩個處理的活菌數(shù),但烘干處理對水分的蒸發(fā)效率顯著高于自然風(fēng)干處理。在以后的規(guī)模生產(chǎn)中,要考慮生產(chǎn)效率和活菌含量平衡的同時,降低成本,尋找出一個更可靠的干燥方法。
二次發(fā)酵激活是很多固體菌劑使用過程中遇到的問題,由于芽孢桿菌芽孢的休眠特性,在菌劑使用前,進(jìn)行適當(dāng)?shù)募せ畎l(fā)酵,可以提高活菌數(shù),降低芽孢休眠對使用效果的影響,從本研究中二次發(fā)酵效果表明,激活對菌劑活菌數(shù)的提升具有顯著的效果,在以后的實際應(yīng)用中應(yīng)適當(dāng)?shù)耐茝V應(yīng)用。
本研究均為實驗室內(nèi)控制條件下進(jìn)行的小規(guī)模發(fā)酵試驗,和生產(chǎn)中的規(guī)模發(fā)酵效果可能會有所差異(Zhu等,2014),因此本研究僅為大規(guī)模生產(chǎn)的固體發(fā)酵條件提供了基礎(chǔ)參考,還需進(jìn)一步的進(jìn)行規(guī)模驗證。