覃美相，粟勝勇，母 葉，蔣香玉，黃小珍，黃 梅，蔡慧倩

（1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)院 南寧 530001；2. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 南寧 530023）

抑郁癥是由多種原因引起的，以情緒持續(xù)低落、興趣下降或煩躁不安等心境及情感性障礙為主要癥狀的一組臨床癥候群[1]。其發(fā)病率高，僅次于心臟病[2-4]。研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥的發(fā)病與海馬神經(jīng)受損密切相關(guān)，其最主要致病機(jī)制之一是炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激[5-7]。絲裂原活化蛋白酶（MAPKs）是介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)的重要信號(hào)通路，參與生物活動(dòng)的生理病理過程，細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）屬于MAPK 家族中的一員，是重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一，其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有生長、分化、增殖及抑制凋亡的調(diào)節(jié)作用，并在行為和認(rèn)知方面如學(xué)習(xí)、記憶等起關(guān)鍵作用[8,9]；核因子E2 相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）是抗氧化系統(tǒng)及免疫炎癥反應(yīng)中最重要的共同轉(zhuǎn)錄因子[10,11]，Nrf2信號(hào)通路系細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激最重要的防御環(huán)節(jié)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激即可激活Nrf2，引發(fā)于其調(diào)控下抗氧化物及相關(guān)酶類的大量表達(dá)，從而抵御氧化應(yīng)激，避免細(xì)胞損傷凋亡[12]。

彭希等[13]研究發(fā)現(xiàn)，提高大鼠腦內(nèi)ERK 信號(hào)通路關(guān)鍵分子的功能和表達(dá)，可以有效地改善大鼠抑郁行為。Senthil 等[14]報(bào)道稱ERK1/2 磷酸化可以激活Nrf2和轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-1，誘導(dǎo)多種下游基因如血紅素氧合酶-1 表達(dá)，避免神經(jīng)元凋亡。目前關(guān)于ERKNrf2 信號(hào)通路對(duì)抑郁癥的神經(jīng)保護(hù)作用的研究缺乏，故本實(shí)驗(yàn)旨在構(gòu)建抑郁癥大鼠模型，通過與空白組、麥粒灸組、氟西汀組對(duì)照，觀察大鼠Open-Field 行為學(xué)、糖水偏愛、體質(zhì)量改變情況，運(yùn)用透射電鏡觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)，WB 檢測海馬中P-ERK、Nrf2蛋白的變化，探討基于ERK-Nrf2 信號(hào)通路“通督調(diào)氣法”麥粒灸對(duì)抑郁癥模型大鼠海馬神經(jīng)元的影響，以揭示麥粒灸治療抑郁癥的可能作用機(jī)制，為臨床麥粒灸治療抑郁癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

SD 大鼠32 只，SPF 級(jí)，體重250±20 g，雌雄各半，動(dòng)物來源：廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK 桂2003-0001）。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，按隨機(jī)數(shù)字表將性別、質(zhì)量分層，隨機(jī)分為4組：空白組、模型組、麥粒灸組、氟西汀組，每組8只。實(shí)驗(yàn)遵照《關(guān)于善待動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》，并嚴(yán)格遵守生物安全制度及相關(guān)規(guī)章。

1.2 造模方法

所有大鼠購買放置實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房后，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，使其機(jī)體恢復(fù)正常代謝水平，稱重記錄；適應(yīng)性飼養(yǎng)后對(duì)其進(jìn)行初始Open-Field 行為學(xué)測定、糖水偏愛試驗(yàn)及體質(zhì)量測量，記錄留檔。

1.2.1 造模方法

參考文獻(xiàn)[15]造模方法并做相應(yīng)改進(jìn)，采用孤養(yǎng)結(jié)合長期不可預(yù)見性溫和刺激模型（CUMS），予模型組、麥粒灸組、氟西汀組3組大鼠21 d不同的應(yīng)激，包括冰水游泳（4℃，5 min），24 h 禁水、禁食，1 min 夾尾，搖晃（1 次·s-1，15 min），晝夜顛倒，束縛（5 min·次-1）等刺激，每種刺激各進(jìn)行3 次，相鄰2 d 采用的刺激方式不同。空白對(duì)照組：自由攝食飼養(yǎng)，不接受任何刺激。

1.2.2 模型評(píng)價(jià)

參照文獻(xiàn)[16]對(duì)抑郁癥模型的評(píng)價(jià)：大鼠接受21 d慢性綜合應(yīng)激后進(jìn)行Open-Field 行為學(xué)測定、糖水消耗量實(shí)驗(yàn)及體質(zhì)量測量，各項(xiàng)分值均下降，并表現(xiàn)出精神運(yùn)動(dòng)遲鈍、興趣下降或喪失、快感缺乏等特征時(shí)，提示造模成功。

1.3 干預(yù)方法及療程

1.3.1 空白組

在相同環(huán)境下正常飼養(yǎng)，不予任何處理。

1.3.2 模型組

共接受21 天CUMS 造模后繼續(xù)孤養(yǎng)，不給予任何治療。

1.3.3 麥粒灸組

參照大鼠穴位圖譜[17]選取百會(huì)、大椎、至陽、合谷（雙）、太沖（雙）穴，每日上午9：00 進(jìn)行麥粒灸治療。治療操作：用電動(dòng)刀片將穴區(qū)皮膚刮凈，穴區(qū)皮膚涂少許石蠟油，將直徑約0.2 cm，高約0.2 cm 的圓錐形艾炷置于大鼠穴位皮膚上點(diǎn)燃施灸，灸至以大鼠出現(xiàn)掙扎、撕叫、逃避等行為時(shí)用鑷子將艾炷取下，此為1壯，每穴每日6壯，連續(xù)治療10 d。

1.3.4 氟西汀組

每日上午9：00 給予氟西汀藥物治療。操作：按1.8 mg·kg-1劑量用生理鹽水調(diào)配氟西汀，使用灌胃針灌胃給藥，每日1次，連續(xù)干預(yù)治療10 d。

1.4 主要試劑及儀器

1.4.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑

Anti-Phospho-ERK1 (T202) + ERK2 (T185)Antibody（廠家：博士德生物，貨號(hào)：BM5446）；Anti-Nrf2(NFE2L2) Antibody（廠家：博士德生物，貨號(hào)：PB9290）；山羊抗兔的二抗（廠家：北京博奧森，貨號(hào)：ZB2301）等。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器

電泳儀（廠家：北京六一，儀器型號(hào)：DYCZ-24DN）；半干轉(zhuǎn)膜儀（廠家：日本ATTO，型號(hào)：WSE-4040））；稱量天平：（廠家：Sartorius 公司，型號(hào)：BP310P）；低溫離心機(jī)：（廠 家：eppendorf，型號(hào)：Centrifuge 5417R）UVP凝膠成像系統(tǒng)：（廠家：thermo公司，型號(hào)：CA91786 U.S.A UVP GDS-8000 System）等。

1.5 療效性指標(biāo)評(píng)價(jià)

1.5.1 階段評(píng)分變化

造模前、造模后、接受10 d 干預(yù)治療后分別進(jìn)行3次Open-Field 行為學(xué)測定、糖水消耗量實(shí)驗(yàn)及體質(zhì)量測量，對(duì)比3個(gè)階段的評(píng)分變化。

①敞箱測試得分反映大鼠活動(dòng)度及對(duì)周圍事物的興趣高低。Open-Field 行為評(píng)分實(shí)驗(yàn)記分方法：以大鼠穿越底面格數(shù)為水平活動(dòng)得分，大鼠四只腳均在同一格子內(nèi)為一格，穿越1 格記1 分，如大鼠沿線直走，以每10 cm 為1 分；以大鼠直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分，雙足離開底面為標(biāo)志（兩前爪騰空或攀附墻壁1次記1分）。兩項(xiàng)之和為敞箱實(shí)驗(yàn)總得分。

②糖水消耗試驗(yàn)反映大鼠對(duì)獎(jiǎng)賞的快感反應(yīng)。糖水消耗量實(shí)驗(yàn)：大鼠進(jìn)行1%蔗糖水?dāng)z取實(shí)驗(yàn)，第一個(gè)24 h，每籠同時(shí)放置2個(gè)均裝有1%蔗糖水水瓶；隨后的24 h，放置裝有同等容量1%蔗糖水、純凈水各1 瓶，記錄各個(gè)消耗量；1%蔗糖水消耗量：禁食禁水24 h后，測定1 h大鼠飲用1%蔗糖水和純凈水的量，以計(jì)算糖水偏愛度（糖水偏愛=糖水消耗量/總液體消耗×100%）。

③體質(zhì)量測量結(jié)果反映其體重增長趨勢。體重測量：分別用電子秤測量各大鼠體重，記錄比較各組大鼠體重增減趨勢。

1.5.2 主要檢測方法

通過透射電鏡觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)；WB 檢測海馬組織中p-ERK、Nrf2 的蛋白水平，以觀察ERKNrf2信號(hào)通路的活化情況。

1.6 標(biāo)本采集及檢測方法

1.6.1 標(biāo)本采集

各組大鼠共32 只，干預(yù)結(jié)束后禁食12 h，以脫臼法處死后。分組快速取出大鼠腦組織，并迅速分離出海馬組織。取部分海馬組織，放入2%戊二醛中固定，作為電鏡標(biāo)本，放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ａ硪徊糠执笫蠛ｑR組織，用生理鹽水沖洗分裝后迅速置入液氮中保存，而后將標(biāo)本置于-80℃冰箱保存，待提取其蛋白，用于WB檢測。

1.6.2 透射電子顯微鏡檢測

電鏡標(biāo)本制作：①固定：用PBS 漂洗4 次，停留15 min，再用1%鋨酸固定1 h。②脫水：梯度丙酮脫水。③滲透：100%丙酮：環(huán)氧樹脂（1:1）滲透放入恒溫箱（60℃）聚合12 h；③切片：半薄切片，染色，在光鏡下觀察，選定區(qū)域，修塊，進(jìn)行超薄切片。染色：20K醋酸鈾染色15 min，檸檬酸鉛染色5 min，晾干；④透射電鏡觀測及拍照，觀察大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化。

1.6.3 蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測

p-ERK、Nrf2 的蛋白水平檢測：①組織研磨及蛋白提取：取30-100 mg組織用液氮進(jìn)行研磨，加入裂解液，冰上裂解1 h，4℃，13000 r·min-1，離心10 min，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中。②蛋白濃度測定及樣本制備：用考馬斯亮藍(lán)試劑盒測定樣本蛋白濃度，并記錄；將樣品加入相應(yīng)4*loading buffer，100℃煮沸10 min，12000 rpm 離心1 min，準(zhǔn)備上樣。③SDS-PAGE 電泳：按照目的蛋白分子量大小調(diào)配不同濃度的SDS-PAGE膠，其操作步驟如下：制作10%SDS-PAGE凝膠電泳分離膠10 mL；制作5%SDS-PAGE凝膠電泳成層膠5 mL；上樣：等膠凝固好后，拔去梳子，電泳緩沖液清洗上樣孔，將準(zhǔn)備好的樣品上樣。電泳：起初，恒壓80 V，30 min之后恒壓調(diào)至120 V，持續(xù)1 h。④免疫印跡：電泳操作結(jié)束后，從玻板上卸下PAGE 膠，裝配轉(zhuǎn)膜三明治，恒流，300 mA轉(zhuǎn)60 min，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。⑤免疫發(fā)光：封閉：用含5%脫脂奶粉的PBST 溶液室溫封閉膜2 h；孵育一抗：一抗孵育過夜；洗膜：用TBST洗膜3 次：每次5 min；孵育二抗：用封閉液稀釋各蛋白一抗對(duì)應(yīng)的二抗。室溫下孵育膜1 h。洗膜：用TBST 洗膜3 次：每次5 min；X 光顯影：在暗室中將膜置于平鋪好的保鮮膜上，按照同等比例混合A液和B液，將混合液均勻滴加于膜上，等待反應(yīng)60 s。吸水紙上瀝干膜上多余的ECL 底物反應(yīng)液，置于平板上，鋪上保鮮膜，用保鮮膜包裹PVDF 膜，此時(shí)注意避免產(chǎn)生氣泡，放入暗盒中，而后放上適當(dāng)大小的X 光片，關(guān)閉暗盒，曝光。取出X 光片，放入顯影液中，待條帶顯好后取出，在清水中漂洗一下，放入定影液中定影。取出X 光片，晾干，拍照。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用

采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± S）表示，組間均數(shù)的兩兩比較采用t檢驗(yàn)；多個(gè)樣本間的比較采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 麥粒灸對(duì)抑郁癥模型Open-Field 行為學(xué)（敞箱試驗(yàn)）影響

表1 結(jié)果顯示，造模前，空白組、模型組、麥粒灸組、氟西汀組各大鼠的敞箱試驗(yàn)總得分差異無顯著性意義（P＞0.05）；造模后，與空白組比較，模型組、麥粒灸組及氟西汀組各大鼠的敞箱試驗(yàn)總得分均明顯下降（P＜0.05）；治療后，麥粒灸組、氟西汀組各大鼠的敞箱試驗(yàn)總得分對(duì)比模型組均明顯升高（P＜0.05）；麥粒灸組與氟西汀組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各組大鼠敞箱試驗(yàn)總得分的比較（± s，n = 8）

表1 各組大鼠敞箱試驗(yàn)總得分的比較（± s，n = 8）

注：Δ表示與造模前比較，P ＜0.05；#表示與空白組比較，P ＜0.05;*表示與模型組比較，P ＜0.05；a表示與氟西汀組比較，P ＞0.05.

干預(yù)后/分60.00±2.67 25.75±3.77#50.00±5.15*a 54.88±3.68*分組空白組模型組麥粒灸組氟西汀組造模前/分63.50±3.34 60.38±1.41 61.50±2.83 61.50±3.34造模后/分50.13±5.49 44.88±3.29Δ 42.75±2.96Δ 38.25±3.73Δ

2.2 麥粒灸對(duì)抑郁癥模型大鼠糖水偏愛度的影響

表2 結(jié)果顯示，造模前，空白組、模型組、麥粒灸組、氟西汀組各大鼠的糖水偏愛度差異無顯著性意義（P＞0.05）；造模后，與空白組比較，模型組、麥粒灸組及氟西汀組各大鼠的糖水偏愛度明顯下降（P＜0.05）。治療后，麥粒灸組、氟西汀組各大鼠的糖水偏愛度對(duì)比模型組均明顯升高（P＜0.05）；麥粒灸組與氟西汀比較無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 各組大鼠糖水偏愛度的比較（± s，n = 8）

表2 各組大鼠糖水偏愛度的比較（± s，n = 8）

注：Δ表示與造模前比較，P ＜0.05；#表示與空白組比較，P ＜0.05;*表示與模型組比較，P ＜0.05；a表示與氟西汀組比較，P ＞0.05.

干預(yù)后/%76.77±2.10 41.20±8.00#67.39±5.85*a 69.67±3.79*分組空白組模型組麥粒灸組氟西汀組造模前/%68.16±4.10 69.45±2.09 66.44±3.33 68.73±2.62造模后/%71.61±4.43 55.50±4.40Δ 51.78±7.00Δ 55.15±5.75Δ

2.3 麥粒灸對(duì)抑郁模型大鼠體質(zhì)重的影響

表3 結(jié)果顯示，造模前，空白組、模型組、麥粒灸組、氟西汀組各大鼠的體質(zhì)重差異無顯著性意義（P＞0.05）；造模后，空白組大鼠體質(zhì)重顯著高于其他三組(P＜0.05)。治療后，與模型組比較，麥粒灸組、氟西汀組大鼠體質(zhì)重均明顯升高（P＜0.05）；麥粒灸組與氟西汀比較無顯著性差異（P＞0.05）。

表3 各組大鼠體質(zhì)量測量的比較（± s，n = 8）

表3 各組大鼠體質(zhì)量測量的比較（± s，n = 8）

注：b表示造模后與模型組、麥粒灸組、氟西汀組比較，P ＜0.05;#表示與空白組比較，P＜0.05；*表示與模型組比較，P ＜0.05；a表示與氟西汀組比較，P ＞0.05.

干預(yù)后/g 359.88±27.71 279.13±24.67#347.25±35.07*a 320.00±30.15*分組空白組模型組麥粒灸組氟西汀組造模前/g 234.00±18.97 244.50±2.39 245.13±22.20 246.25±27.21造模后/g 339.25±18.82b 292.25±31.98 299.50±28.06 301.25±34.03

2.4 干預(yù)后抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化

透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)（圖1），空白組:海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞核結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)細(xì)胞核呈橢圓形，核膜清晰完整，核仁位于核中間，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，未見線粒體腫脹壞死。模型組：海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞核異常，可見神經(jīng)元細(xì)胞腫脹，核內(nèi)核仁完全溶解消失，可見細(xì)胞胞漿疏松，胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少。麥粒灸組：海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞核輕度異常，神經(jīng)細(xì)胞核呈橢圓形，核膜不清晰，染色質(zhì)散在分布于核膜上，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，未見線粒體腫脹壞死。氟西汀組：海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞核輕度異常，神經(jīng)細(xì)胞核呈橢圓形，核膜不清晰，可見核仁完全溶解，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，未見線粒體腫脹壞死。

圖1 各組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)變化

2.5 干預(yù)后抑郁模型大鼠P-ERK、Nrf2蛋白表達(dá)情況

與空白組比較，模型組P-ERK、Nrf2 蛋白表達(dá)明顯下降（P＜0.05）；與模型組比較，麥粒灸組、氟西汀組p-ERK、Nrf2蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）；麥粒灸組與氟西汀組比較P-ERK、Nrf2 蛋白表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）（圖2，表4，）。

圖2

表4 各組大鼠P-ERK蛋白含量的比較（± s，n = 8）

表4 各組大鼠P-ERK蛋白含量的比較（± s，n = 8）

注：Δ與空白組比較，P ＜0.05；*與模型組比較，P ＜0.05；#與氟西汀組比較，P ＞0.05.

分組空白組模型組麥粒灸組氟西汀組例數(shù)/n 8 8 8 8 P-ERK 1.875±0.339 0.668±0.265Δ 1.460±0.221*#1.218±0.180*Nrf2 2.505±0.153 0.395±0.117Δ 1.157±0.274*#0.914±0.741*

3 討論

抑郁癥歸屬于中醫(yī)“郁證”、“百合病”等范疇，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為憂思等情志過極為本病的主要原因，情志抑郁使氣機(jī)不暢，氣機(jī)疏泄失常，陽氣舒發(fā)不利，清陽不展系發(fā)為本病的關(guān)鍵。百會(huì)乃足太陽、手足少陽、督脈、足厥陰肝經(jīng)之交會(huì)穴，屬督脈，乃經(jīng)脈交會(huì)之最，刺激此穴，具有溫經(jīng)，升陽固脫，安神健腦，清熱開竅等作用；《素問·骨空論篇》曰：“督脈者，起于少腹以下骨中央……上額交顛上，入絡(luò)腦?！本娜“贂?huì)可通調(diào)督脈，調(diào)動(dòng)機(jī)體陽氣生發(fā)，疏通肝經(jīng)之氣；《甲乙經(jīng)》述“大椎……三陽督脈之會(huì)。”灸取大椎能溫陽推動(dòng)陽氣生化運(yùn)轉(zhuǎn)；至陽，至，有至極之意，穴屬督脈，位于背部，當(dāng)?shù)谄咦抵拢矫}為陽經(jīng)，背亦屬陽，七乃陽數(shù)，三陽為極，結(jié)合艾灸溫通之性，可升提一身之陽氣；太沖為足厥陰肝經(jīng)原穴，屬陰主血，主“胸脅支滿, ……終日不得太息”，合谷乃手陽明大腸經(jīng)之原穴，屬陽主氣，兩穴相配，可氣血、臟腑同調(diào)；諸穴合用意有“通督調(diào)氣”之旨，治可疏肝理氣，調(diào)養(yǎng)心神，協(xié)調(diào)臟腑，鼓動(dòng)氣機(jī)，宣發(fā)陽氣，調(diào)節(jié)情志。

慢性應(yīng)激能夠激活免疫系統(tǒng)，刺激產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，系誘發(fā)抑郁癥發(fā)生的重要因素[18]。而心理應(yīng)激是抑郁癥發(fā)生或復(fù)發(fā)的另一危險(xiǎn)誘因，其可激活交感神經(jīng)系統(tǒng)釋放兒茶酚胺，進(jìn)而使大腦耗氧量增加；激活HPA 軸大量釋放的糖皮質(zhì)激素激活免疫應(yīng)答與炎性反應(yīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子增多，且細(xì)胞因子與炎癥細(xì)胞相互作用可引起自由基的產(chǎn)生增加[19-20]。MAPK 通路是生物體內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)之一，參與細(xì)胞生長、發(fā)育、分化、凋亡及細(xì)胞間的功能同步等多種生理反應(yīng)。而ERK 屬于MAPK 的一員，其可通過直接或間接活化作用，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活[21]。MAPK 激活可促進(jìn)ERK 發(fā)生磷酸化從而激活下游轉(zhuǎn)錄因子，Nrf2 轉(zhuǎn)錄因子是細(xì)胞抗氧化還原的核心環(huán)節(jié)，在氧化應(yīng)激反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，可驅(qū)動(dòng)自由基陽離子通道發(fā)揮內(nèi)源性穩(wěn)態(tài)，在抑制炎癥、避免細(xì)胞凋亡、保護(hù)神經(jīng)等方面起著重要的作用[22,23],而提高ERK1/2活性可有效減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡[24]。

研究發(fā)現(xiàn)[25]，ERK 信號(hào)通路能被抗抑郁藥及情緒穩(wěn)定劑激活，對(duì)大腦中神經(jīng)產(chǎn)生、突觸可塑性起調(diào)節(jié)作用，也有報(bào)道指出，氟西汀治療能促進(jìn)大鼠內(nèi)側(cè)前額葉皮質(zhì)邊緣下區(qū)ERK1/2 的活化，對(duì)恐懼記憶具有促消退的作用[26]。既往研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀干預(yù)治療，能減少肺炎球菌性腦膜炎大鼠海馬凋亡比例，相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，氟西汀可抑制抑郁大鼠海馬凋亡信號(hào)，上調(diào)細(xì)胞存活信號(hào)通路mTOR及下游靶分子磷酸化水平及突觸重塑相關(guān)蛋白的表達(dá)，下調(diào)自噬蛋白對(duì)突觸重塑的降解作用，從而起到抗抑郁作用[27,28]。表明氟西汀對(duì)不同的神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有不同的調(diào)控作用，本研究結(jié)果顯示：氟西汀干預(yù)治療后，大鼠的活動(dòng)度、對(duì)周圍事物的興趣、對(duì)獎(jiǎng)賞的快感升高等，均表明其抑郁癥狀改善，這可能與ERK磷酸化水平P-ERK蛋白表達(dá)升高，激活下游轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)Nrf2蛋白表達(dá)，改善海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而起到抗抑郁作用的協(xié)同效應(yīng)有關(guān)。

研究表明，灸法治療抑郁癥可提高患者的生活質(zhì)量[29-31]。相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，灸法可通過增加腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，從而改善抑郁癥大鼠的記憶力[32]。亦有報(bào)道指出，ERK1/2 磷酸化可以激活Nrf2，誘導(dǎo)多種下游基因表達(dá)，從而避免神經(jīng)元凋亡[33]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：治療后，與空白組比較，模型組行為學(xué)評(píng)分、糖水偏愛度、體質(zhì)量顯著下降（P＜0.05），海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整、胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量減少（P＜0.05），p-ERK、Nrf2 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；與模型組比較，麥粒灸組及氟西汀組行為學(xué)評(píng)分、糖水偏愛度、體質(zhì)量顯著上升（P＜0.05），海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)改善、胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量增多（P＜0.05），p-ERK、Nrf2蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05）；與氟西汀組比較，麥粒灸組行為學(xué)評(píng)分、糖水偏愛度、體質(zhì)量、海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)及胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量無顯著差異（P ＞0.05）。表明麥粒灸可有效改善抑郁癥大鼠的抑郁癥狀，其作用機(jī)制可能與通過上調(diào)海馬組織ERK 的磷酸化水平P-ERK，促進(jìn)誘導(dǎo)Nrf2 蛋白表達(dá)上升，抑制炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激，減少細(xì)胞凋亡，修復(fù)神經(jīng)損傷來發(fā)揮抗抑郁作用有關(guān)。

綜上分析，“通督調(diào)氣法”麥粒灸治療具有明顯的抗抑郁作用，其作用機(jī)制可能與通過上調(diào)大鼠海馬組織ERK 的磷酸化水平P-ERK，促進(jìn)誘導(dǎo)Nrf2 蛋白表達(dá)上升，激活神經(jīng)元的生物學(xué)效應(yīng)，抑制炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激而發(fā)揮抗抑郁作用有關(guān)。而對(duì)比氟西汀治療，麥粒灸治療具有安全、經(jīng)濟(jì)、無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，值得臨床推廣運(yùn)用。