王閃閃，黃文忠，高雪梅，曾廣智，陶春瑤，崔 笛，朱 鴻，張 再，李干鵬，蔣孟圓

(1. 云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國(guó)家民族事務(wù)委員會(huì)-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500；2. 昆明學(xué)院 化學(xué)科學(xué)與技術(shù)系，云南 昆明 650500)

粉花山扁豆(CassianodosaBuch.-Ham.ex Boxb)，又稱(chēng)節(jié)果決明、塔槐，為豆科(Leguminosae)蘇木亞科決明屬(CassiaL.)植物[1].我國(guó)云南的西雙版納、廣東、廣西等地有栽培，印度、緬甸、柬埔寨、泰國(guó)南部及越南南部也廣泛分布，夏威夷群島引種作行道樹(shù).據(jù)文獻(xiàn)[2]報(bào)道粉花山扁豆的果實(shí)，能解痘毒.國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)決明屬植物進(jìn)行過(guò)一些研究，主要報(bào)道有色酮類(lèi)、黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、甾體類(lèi)、生物堿類(lèi)等化學(xué)成分，但對(duì)粉花山扁豆植物的化學(xué)成分鮮有報(bào)道[3-6].為充分利用我國(guó)豐富的資源提供科學(xué)依據(jù)，進(jìn)一步尋找新的活性天然產(chǎn)物，本文對(duì)粉花山扁豆的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定1個(gè)新的黃酮類(lèi)化合物，命名為山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-異丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(1)，以及4個(gè)已知化合物.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

Bruker AM-400超導(dǎo)核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；VG Antospec-3000質(zhì)譜儀(英國(guó)VG公司)；旋光儀Jasco DIP-1000(日本Spectroscopic公司)；Perkin Elmer spectrum100 FT-IR紅外光譜儀(美國(guó)Perkin Elmer公司)；Agilent 1100高效液相色譜儀，色譜柱為Zorbax SB-C18柱(21.2 mm×25 cm).100～200、200～300目硅膠和GF254硅膠板，青島海洋化工廠產(chǎn)品；工業(yè)級(jí)：二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯，云南祥瑞化玻教儀研發(fā)有限公司；分析純：甲醇，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司；薄層色譜法顯色，顯色劑為5%H2SO4乙醇顯色劑，噴灑后適當(dāng)加熱即可；純凈水，娃哈哈飲用純凈水.

實(shí)驗(yàn)用決明屬植物粉花山扁豆2015年10月采于云南省西雙版納州，經(jīng)中科院西雙版納植物園馬宏鑒定為豆科蘇木亞科決明屬植物粉花山扁豆CassianodosaBuch.-Ham.ex Boxb.的莖葉.

1.2 提取與分離

取曬干的粉花山扁豆莖葉12 kg，粉碎過(guò)0.441 mm 篩，然后用體積分?jǐn)?shù)90%乙醇水溶液室溫下提取3次，每次用量為20 L，室溫浸泡、超聲3次(每次4 min)，過(guò)濾，減壓濃縮，得到浸膏2.7 kg，經(jīng)硅膠柱柱色譜粗分，用不同體積分?jǐn)?shù)的二氯甲烷-甲醇流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，得到6個(gè)極性段A～F(20∶1,9∶1,8∶2,7∶3,6∶4和1∶1)，B部分(V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=9∶1,18.9 g)經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=(30∶1、20∶1、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、1∶1)梯度洗脫，分成7個(gè)部分，B1～B7.B3部分(V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=6∶4，55 mg)用HPLC進(jìn)一步分離.采用Agilent Zorbax SB-C18反相色譜柱(22 mm×250 mm，5 μm)，以40%甲醇水溶液為流動(dòng)相，流速為 3 mL/min，分別得到化合物1(5.8 mg)、2(6.7 mg)、3(8.2 mg)、4(7.2 mg)、5(4.3 mg).

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1淡黃色無(wú)定形粉末.HR-ESI-MS顯示其準(zhǔn)分子離子峰為m/z471.4408[M-H]-，(計(jì)算值471.440 4)，結(jié)合13C NMR譜數(shù)據(jù)確定分子式為C24H24O10，不飽和度為13.紅外光譜顯示該化合物含羥基(3 425 cm-1)、羰基(1 656 cm-1)及苯基(1 609和1 507 cm-1)等官能團(tuán).根據(jù)其紫外光譜在265、345 nm有最大吸收,推測(cè)化合物1為黃酮類(lèi)化合物[7]，化合物1的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)歸屬，見(jiàn)表1.在黃酮的A環(huán)處存在2處單峰信號(hào)[δH6.33(1H,s,H-8)和6.15(1H,s,H-6)]以及由H-2′/H-6′和H-3′/H-5′的對(duì)稱(chēng)性推導(dǎo)出B環(huán)[δH7.75(2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′)和6.88(2H,d,J=8.0 Hz,H-3′,5′)]為1個(gè)苯環(huán)A2X2自旋系統(tǒng)[7],此外，通過(guò)化學(xué)位移為5.66(1H,s,H-1″)和0.73(3H,d,J=4.0 Hz,H-9′′)的質(zhì)子信號(hào)以及HMBC譜(圖1)中，δ5.66(H-1″)的糖端基氫信號(hào)與δ135.5(C-3)的碳信號(hào)遠(yuǎn)程相關(guān)，提示黃酮3位連有1個(gè)α-鼠李吡喃糖.化合物1的13C NMR譜(表1)顯示存在24個(gè)碳信號(hào)(其中2組為對(duì)稱(chēng)碳，δC132.1和δC116.7處的C-2′/C-6′和C-3′/C-5′)，24個(gè)碳信號(hào)包括15個(gè)黃酮骨架上的碳，鼠李吡喃糖上的6個(gè)碳和二氧異丙基上的3個(gè)碳[δC110.5(s,C-6″),26.7(q,C-7″),28.5(q,C-8″).通過(guò)查閱文獻(xiàn)[7]，對(duì)比相關(guān)數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)化合物1與已知化合物quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside最為相似，其不同在于鼠李吡喃糖的化學(xué)位移變化以及額外的二氧異丙基信號(hào).在1H NMR光譜中，H-5″的化學(xué)位移從3.99升高到4.47(Δ+0.48)和H-4″的化學(xué)位移從3.52升高到3.90(Δ+0.38).13C NMR譜中，C-1″的化學(xué)位移從102.3降低至99.8(Δ-2.5)和C-3″的化學(xué)位移從71.6升到74.8(Δ+3.2)，C-4″化學(xué)位移從71.1升高到79.6(Δ+8.5)以及C-5″化學(xué)位移從70.8升高為77.3(Δ+6.5)；在HMBC譜(圖1)中，δ3.90(H-4″)，δ4.47(H-5″)，δ1.33(H-7″)，δ1.40(H-8″)的氫信號(hào)與δ110.5(C-6″)的碳信號(hào)有相關(guān)，提示鼠李吡喃糖的4″和5″位連有1個(gè)二氧異丙叉基.綜上所述可推斷化合物的結(jié)構(gòu)，確定化合物1為山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-異丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷].

表1 化合物1的 1H NMR和 13 C NMR數(shù)據(jù)(400/100 MHz,CD3OD)

化合物1[α]22.3D=-129.1(c=0.11,MeOH);UVλMeOH max(nm):345(3.76),265(3.91);IRνKBr max(cm-1):3 425,1 656,1 609,1 507,1 450,1 361,1 176,1 086,839.

化合物2黃色針晶(甲醇).ESI-MS(m/z):433.1[M+H]+,分子式為C21H20O10.1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:7.71(2H,ss,2′-H,6′-H),6.88(2H,ss,3′-H,5′-H),6.32(1H,d,J=2.1 Hz,6-H),6.14(1H,d,J=2.0 Hz,8-H),5.33(1H,d,J=1.5Hz,1″-H),4.19(1H,dd,J=3.2,1.7 Hz,2″-H),3.67(1H,m,3″-H),3.28(2H,m,4″-H,5″-H),0.87(3H,d,J=5.6Hz,6″-H),13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:179.4(C-4),165.5(C-2),162.9(C-4′),161.3(C-9),159.1(C-7),158.3(C-5),136.2(C-6),132.0(C-2′,C-6′),122.6(C-1′),116.5(C-3′,C-5′),105.9(C-10),103.4(C-1′′),99.9(C-8),94.9(C-3),73.2(C-5″),72.1(C-4″),72.0(C-3″),71.9(C-2″),17.7(C-6″).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[8]一致，故鑒定化合物2為山奈酚-3-O-β-D-吡喃鼠李糖苷,結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2.

化合物3黃色針晶(吡啶).ESI-MS(m/z)303.2[M+H]+,分子式為C15H10O7.1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:6.75(1H,d,J=2.5 Hz,8-H),6.79(1H,d,J=2.1 Hz,6-H),7.4(1H,dd,J=8.4,2.7 Hz,5′-H),8.10(1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,6′-H),8.66(1H,d,J=2.2 Hz,2′-H),13C NMR(100 MHz,C5D5N)δ:177.75(C-4),165.97(C-7),162.88(C-5),157.88(C-9),148.17(C-3′),147.56(C-2),138.38(C-3),121.48(C-6′),117.11(C-2′,C-5′),104.89(C-10),99.65(C-6),94.73(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9]，故鑒定化合物3為3,5,7,3′,4′-五羥基黃酮,結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2.

化合物4黃色粉末(甲醇).ESI-MS(m/z):287.1[M+H]+,分子式為C15H10O6.1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.21(1H,s,8-H),6.42(1H,s,3-H),6.94(2H,d,J=8.0 Hz,3′,5′-H),8.12(2H,d,J=8.0 Hz,2′,6′-H).13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:177.6(C-4),165.7(C-2),162.7(C-4′),160.7(C-9),158.4(C-7),148.2(C-5),137.3(C-6),130.8(C-2′,C-6′),123.9(C-1′),116.5(C-3′,C-5′),104.7(C-10),99.4(C-8),94.6(C-3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[10]一致，故鑒定化合物4為高山黃芩素,結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2.

化合物5黃色針晶(吡啶).ESI-MS(m/z):287.1[M+H]+,分子式為C15H10O6.1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:8.28(1H,d,J=1.4 Hz,H-8),7.94(1H,s,H-6),7.89(1H,dd,J=1.6,1.2Hz,H-2′),7.67(1H,d,J=8.0 Hz,H-6),7.29(1H,H-3,H-5′).13C NMR(100 MHz,C5D5N)δ:183.1(C-4),166.1(C-7),165.2(C-2),163.4(C-9),158.8(C-5),152.0(C-4′),148.1(C-3′),123.2(C-1′),119.8(C-6′),117.2(C-5′),114.9(C-2′),105.3(C-10),104.3(C-3),100.2(C-6),95.1(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[11]一致，故鑒定化合物5為5,7,3′,4′-四羥基黃酮,結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖2.

3 結(jié)語(yǔ)

對(duì)粉花山扁豆莖葉體積分?jǐn)?shù)90%乙醇提取物V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=9∶1部分進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到5個(gè)黃酮類(lèi)化合物，包括1個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的黃酮類(lèi)化合物(1)，以及4個(gè)已知的黃酮類(lèi)化合物(2～5).根據(jù)化合物的理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)及查閱相關(guān)文獻(xiàn)，分別將其鑒定為山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-異丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(1),山奈酚-3-O-β-D-吡喃鼠李糖(2),3,5,7,3′,4′-五羥基黃酮(3),高山黃芩素(4),5,7,3′,4′-四羥基黃酮(5).蘇木亞科決明屬(CassiaL.)植物在抗炎、抗病毒等方面也顯示出較大的藥用潛力，在以后的工作中，將對(duì)所分離的化合物進(jìn)行相關(guān)藥理活性篩選力爭(zhēng)從該屬植物中分離鑒定出更多具有藥理活性的化合物.