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1.內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000

蝸牛為巴蝸?？苿游锿桶臀伵radybaenasimiLarisFerussac 的貝殼。夏、秋二季捕捉，置沸水中略煮，去肉，洗凈，曬干。蝸牛，蒙古文名音譯“布熱-好日海”[ 1]，別名音譯“東日阿”?！稛o誤蒙藥鑒》記：“‘東日阿’…《晶鬘》中云：‘從狀如盾、扁而旋繞的殼中出，硬殼馱于背后。尿液中炮制用?！?《醫(yī)典》中云：‘蝸牛殺蟲，利水腫’”[2]。蒙古文別名“東日阿”意譯為像似海螺，系前人依據(jù)動物形狀命名。性咸、涼，味甘。具有消水腫，利尿，殺蟲，清瘟疫功效。用于水腫，腎熱，膀胱熱，尿閉，尿路結(jié)石，協(xié)日疫，黃水瘡，腸寄生蟲。本品1986年載入《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》[ 1]，該標(biāo)準(zhǔn)僅就其【性狀】做了規(guī)定外，缺少其它有效的質(zhì)量控制方法及指標(biāo)。通過實(shí)驗(yàn)研究，為蝸牛建立穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確的檢查、含量測定方法，填補(bǔ)該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下空白項(xiàng)。合理控制質(zhì)量，保證其用藥安全及療效提供可靠的依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材 蝸牛來源：X1(批號：160626，河北安國)；X2(批號：20161106，山東)；X3(批號：170101，廣西)；X4(批號：170102，安徽)；X5(批號：20170208，山東)；X6(批號：20170307，河北保定)； X7(批號：20170219，湖南)，經(jīng)鑒定為同型巴蝸BradybaenasimiLarisFerussac 的貝殼。見圖1。

1.2 儀器 滴定管(50 mL)，磁力攪拌器，BS224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，T-1200N型馬弗爐(鄭州天縱)，DL-1型電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。

1.3 試藥 乙二胺四醋酸二鈉；碳酸鈣；鹽酸；氫氧化鉀；氨溶液；氯化銨以上均為分析純；基準(zhǔn)氧化鋅；甲基紅；鈣黃綠素；鉻黑T。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別 本品屬動物殼類藥材，主含碳酸鈣。故照 《中國藥典》 2015年版四部(通則0301)[ 3]相關(guān)方法對其進(jìn)行了一般鑒別試驗(yàn)。

2.1.1 鈣鹽鑒別 取鉑絲用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯磚紅色。結(jié)果見圖 2，7批藥材鈣鹽的火焰鑒別反應(yīng)，均呈陽性。

2.1.2 沉淀鑒別 取本品粉末0.5 g，加稀鹽酸5 mL，即產(chǎn)生大量氣泡，濾過，濾液加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸。結(jié)果見圖3～7。7批藥材鈣鹽的沉淀鑒別反應(yīng)，均呈陽性。

2.1.3 碳酸鹽鑒別 取本品粉末0.5 g，加稀鹽酸5 mL即泡沸，產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w，導(dǎo)入氫氧化鈣試液5 mL中，即生成白色沉淀。結(jié)果見圖8，7批藥材的碳酸鹽鑒別反應(yīng)，均呈陽性。

2.2 灰分檢查 照《中國藥典》2015年版四部(通則2302)[ 3 ]灰分測定法，對7批樣品的總灰分及酸不溶性灰分進(jìn)行了考察測定。

2.2.1 總灰分測定取供試品2 g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(精準(zhǔn)至0.01 g)，緩緩熾熱，至完全碳化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品總灰分的含量(%)。結(jié)果見表3。本品含碳酸鈣達(dá)90%以上，此熾灼條件下不分解，故測定結(jié)果減失重量均較少。該項(xiàng)檢查不收入標(biāo)準(zhǔn)草案正文。

2.2.2 酸不溶性灰分測定 取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約20 mL、用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品酸不溶性灰分的含量(%)。注意避免燃燒。結(jié)果見表1。本品殼內(nèi)易聚集泥沙，影響藥材質(zhì)量，故應(yīng)控制其酸不溶性灰分。蝸牛酸不溶性灰分測定結(jié)果表明，7批樣品中酸不溶性灰分平均值為7.51%，6批樣品酸不溶性灰分均低于9.0%，測定值中僅有一例大于9.0%，故本品酸不溶性灰分不得過9.0%。

表1 蝸?？偦曳旨八岵蝗苄曰曳值臏y定結(jié)果 (%)

2.3 重金屬 照重金屬檢查法《中國藥典》2015年版四部(通則0821第一法)[ 3 ]對本品進(jìn)行了檢查。

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備 稱取硝酸鉛0.1599 g，置1000 mL量瓶中，加硝酸5 mL與水50 mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液10 mL，置100 mL量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL相當(dāng)于10 μg的Pb)。本液現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品0.50 g，2份，分別置25 mL納氏比色管中，一份(乙管)加水5 mL，混合均勻，加稀鹽酸4 mL，煮沸5 min，放冷，濾過，濾器用少量水洗滌，合并洗液與濾液,加酚酞指示液1滴，并滴加適量的氨試液至溶液顯淡紅色，加稀醋酸2 mL與水制成25 mL，加維生素C 0.5 g，溶解后既得；另一份(丙管)加水5 mL，混合均勻，加稀鹽酸4 mL，煮沸5 min，放冷，濾過，濾器用少量水洗滌，合并洗液與濾液,加酚酞指示液1滴，并滴加適量的氨試液至溶液顯淡紅色，加稀醋酸2 mL，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.00 mL(20 ug)與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2 mL后，加水制成25 mL，加維生素C 0.5 g，溶解后既得。

2.3.3 檢查方法 取25 mL納氏比色管一支(甲管)，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2 mL與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2 mL后，加水稀釋成25 mL，加維生素C 0.5 g。作為對照品溶液。取甲管對照品溶液與供試品溶液乙管，丙管，分別加硫代乙酰胺試液各2 mL，搖勻，放置2 min，照《中國藥典》2015年版四部(通則0821第一法)[ 4]依法操作，比較檢查，結(jié)果見表2。7批供試品溶液的顏色都淺于10 μg標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的顏色，重金屬含量均少于百萬分之二十。本品重金屬含量不過20 mg/kg。

表2 蝸牛重金屬檢查結(jié)果

2.4 含量測定

2.4.1 滴定液的制備 取乙二胺四醋酸二鈉19 g，加適量的水使溶解成1000 mL，搖勻。取于約800℃灼燒至恒重的基準(zhǔn)氧化鋅0.1220 g，精密稱定，加稀鹽酸3 mL使溶解，加水25 mL，加0. 025%甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨試液至溶液顯微黃色，加水25 mL與氨-氯化銨緩沖液(pH 10.0 )10 mL，再加鉻黑T指示劑少量，用本液滴定至溶液由紫色變?yōu)榧兯{(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正(空白消耗量為0.05 mL)。 每1 mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 moL/L )相當(dāng)于4. 069 mg的氧化鋅。根據(jù)本液的消耗量與氧化鋅的取用量，算出本液的濃度，即得。本試驗(yàn)用乙二胺四醋酸二鈉滴定液的濃度為0.0501 moL/L。其校正因子F為1.002。

2.4.2 測定方法 取本品細(xì)粉約0.15 g，精密稱定，置錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，加熱使溶解，加水20 mL與甲基紅指示液1滴，滴加10%氫氧化鉀溶液至溶液顯黃色，繼續(xù)多加10 mL，加鈣黃綠素指示劑少量，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 moL/L)滴定至溶液黃綠色熒光消失而顯橙色。每1 mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 moL/L)相當(dāng)于5.004 mg的碳酸鈣(CaCO3)。

2.4.3 線性與范圍 取碳酸鈣0.100 g、0.125 g、0.150 g、0.175 g、0.200 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”項(xiàng)下方法，自“加稀鹽酸10 mL”起依法操作，以樣品量(x)對乙二胺四醋酸二鈉滴定液(EDTA 0.05 moL/L)的消耗體積(y)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=197.53x+0.4664，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。表明碳酸鈣的取樣量在0.1～0.2 g范圍內(nèi)，與乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05 moL/L)的消耗體積具有良好的線性關(guān)系。

2.4.4 精密度試驗(yàn) 取碳酸鈣0.15 g，精密稱定，置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”項(xiàng)下方法，自“加稀鹽酸10 mL”起依法操作，連續(xù)測定6次，并計(jì)算含碳酸鈣測得率。碳酸鈣的測得率為100.92%，RSD為0.18%。結(jié)果表明該試驗(yàn)精密度良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取樣品X4(批號170102)0.15 g，照“2.4.2測定方法” 分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時間段依法測定，其結(jié)果平均含量為91.36%、RSD為0.21%。表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取樣品X4(安徽，批號170102)0.15 g，6份，精密稱定，分別照“2.4.2測定方法”依法測定，其結(jié)果重復(fù)性良好，平均含量為92.22%、RSD為0.16%。

2.4.7 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品X4(安徽，批號170102)0.075 g，9份，精密稱定，各置錐形瓶中，分三組按標(biāo)準(zhǔn)品加入量-樣品中含量0.5∶1、1∶1、1.5∶1的要求分別依次精密加入碳酸鈣，照“2.4.2測定方法”項(xiàng)下方法，自“加稀鹽酸10 mL”起依法操作，平行測定3次，其CaCO3的總平均回收率為100.51%、RSD為0.20%。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.8 樣品測定 取蝸牛樣品細(xì)粉0.15 g，精密稱定，各置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”，自“加稀鹽酸10 mL”起依法操作，測定并計(jì)算含量。蝸牛平均含量為92.07%，RSD為0.31%。結(jié)果見表4。

表4 蝸牛及制蝸牛樣品測定結(jié)果

樣品批號n蝸牛含量 /%平均值 /%RSD/%692.5292.680.14X7190.85湖南291.0220170219391.20491.06591.60691.4491.190.31平均含量92.070.31

3 討論

蝸牛主含碳酸鈣，所以參照《中國藥典》2015年版一部載石決明【含量測定】項(xiàng)下方法，研究建立了采用乙二胺四醋酸二鈉配位滴定法對其碳酸鈣(CaCO3)含量進(jìn)行測定的方法。

蝸牛7批樣品碳酸鈣的平均含量約為92.07%，其含量范圍為91.69%～92.45%，各批間含量較接近(RSD=0.31%)。故取其下限，暫定蝸牛含碳酸鈣(CaCO3)不得少于90.0%。

制蝸牛7批樣品碳酸鈣的平均含量約為95.44%，其含量范圍為95.04%～95.84%。各批間含量較接近(RSD=0.40%)。故取其下限，暫定制蝸牛含碳酸鈣(CaCO3)不得少于94.0%。