曹獻芹 郭珊 李冰

近年來，生殖器皰疹的發(fā)生率明顯上升，流行病學研究提示，生殖器皰疹的發(fā)病率平均維持在636～584/萬人[1]。臨床上生殖器皰疹的發(fā)生能夠導致生殖道黏膜上皮及肛周組織的損傷，嚴重影響患者的生活質量[2]。

在探討生殖器皰疹感染機制的過程中發(fā)現(xiàn)，免疫功能紊亂或炎癥損傷，均可能提高生殖器皰疹的發(fā)生風險，導致生殖道黏膜組織損害程度的增加[3]。自然殺傷（NK）細胞數(shù)量的上調，能夠維持患者體內淋巴細胞的免疫活性，提高其對病原體的吞噬和清除作用；γ 干擾素（IFN-γ）是調控自身淋巴細胞免疫狀態(tài)的指標，IFN-γ 的上升能夠提高患者體內T淋巴細胞的活性，促進樹突狀細胞的抗原提呈功能的上升[4]；可溶性人類白細胞抗原G（sHLA-G）是重要的趨化因子，sHLA-G 的上升能夠通過激活體內的趨化因子，促進炎癥細胞對生殖道黏膜的浸潤，進而促進病情的進展[5]。為了揭示NK 細胞數(shù)量變化，sHLA-G、IFN-γ 的表達與生殖器皰疹的關系，從而為臨床上病情評估或者早期血清學診斷提供參考，本次研究選取2016年10月～2017年8月在我院接受治療的生殖器皰疹患者為研究對象，探討不同指標的表達情況及其診斷學價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2016年10月～2017年8月在我院接受治療的生殖器皰疹患者為研究對象。納入標準：①年齡≥18 歲；②經相關檢查確診為生殖器皰疹者[6]；③無其他免疫系統(tǒng)疾病者。排除標準：①不愿參與本項研究者；②近期合并感染性疾病者。共納入40 例，男24 例，女16 例，年齡29～55歲，平均（42.65±3.19）歲，其中初次發(fā)病者30 例，復發(fā)者10 例。對照組納入排除標準：①年齡≥18歲；②無嚴重基礎疾病者；③近期未發(fā)生感染性疾病，共納入40 例，男20 例，女20 例，年齡25～58 歲，平均（42.71±4.02）歲。兩組研究對象年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本項研究經醫(yī)院倫理委員會評審通過，且所有研究對象均知情同意。

1.2 檢測方法NK細胞檢測：清晨采集空腹靜脈血，按照10 000r/min 的離心速度進行分離，加入5ml 抗凝劑，加入淋巴細胞分離液，按照密度梯度離心法分離淋巴細胞，ARMI 1640 溶液洗滌3 次。采用流式細胞儀雙標法進行CD40+淋巴細胞的檢測。相關標記操作在5ml 抗凝管中進行，100μl 全血與CD3-PE、CD16+、CD56-FITC 抗體室溫反應25min，采用紅細胞裂解液optiLYse C 溶血素溶解紅細胞，PBS 液體洗滌3 遍，每次5min，生理鹽水重新懸浮細胞，上機檢測。FACS calibur 流式細胞儀購自美國BD 公司，流式細胞抗體購自羅氏檢測公司。

采集患者入院后的靜脈血，離心后收集上清液，采用免疫發(fā)光法檢測sHLA-G、IFN-γ 水平，檢測儀器為美國Bio-Bad 全自動酶標儀，配套試劑盒購自羅氏檢測公司；采用全自動生化法檢測IL-4、IL-8、IL-12、TNF-α 值，配套試劑盒購自南京碧云天生物檢測公司。

1.3 評價指標觀察兩組患者NK 細胞數(shù)量變化及sHLA-G、IFN-γ、炎癥因子水平的差異，探討聯(lián)合檢測輔助診斷生殖器皰疹的價值。

1.4 統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5 軟件進行分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標準差表示。兩組研究對象NK 細胞數(shù)量變化及sHLA-G、IFN-γ、炎癥因子水平的比較采用t檢驗進行分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者NK 細胞表達水平及sHLA-G、IFN-γ水平的比較觀察組患者NK 數(shù)量和IFN-γ 水平低于對照組，sHLA-G 水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者NK 細胞表達水平及sHLA-G、IFN-γ 水平的比較

2.2 初次發(fā)病和復發(fā)組患者NK 細胞數(shù)量變化及sHLA-G、IFN-γ水平的比較復發(fā)組患者NK 數(shù)量和IFN-γ水平低于初次發(fā)病組，sHLA-G 水平高于初次發(fā)病組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 初次發(fā)病和復發(fā)組患者NK 數(shù)量變化及sHLA-G、IFN-γ 水平的比較

2.3 兩組研究對象炎癥因子水平的比較觀察組患者的IL-4、IL-8、IL-12、TNF-α 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者炎癥因子水平的比較（pg/ml）

2.4 初次發(fā)病和復發(fā)組患者炎癥因子水平的比較復發(fā)組患者的IL-4、IL-8、IL-12、TNF-α 水平均高于初次發(fā)病組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 NK 細胞、sHLA-G、IFN-γ、炎癥因子水平聯(lián)合檢測輔助診斷生殖器皰疹的價值NK 細胞、sHLA-G、IFN-γ、炎癥因子水平聯(lián)合檢測對生殖器皰疹診斷的靈敏度和特異度高于單項檢測。 見表5。

表4 初次發(fā)病和復發(fā)組患者炎癥因子水平的比較（pg/ml）

表5 NK 細胞、sHLA-G、IFN-γ、炎癥因子水平聯(lián)合檢測輔助診斷生殖器皰疹比較（%）

3 討論

單純皰疹病毒的感染能夠顯著提高生殖器皰疹的發(fā)生率，導致患者生殖器黏膜的損害甚至累及其他器官。特別是在具有T 淋巴細胞免疫功能抑制的患者中，生殖器皰疹的發(fā)生風險更高，臨床轉歸更差。生殖器皰疹的發(fā)生不僅能夠導致局部皮膚黏膜的損害，同時還能夠增加遠期惡性上皮性惡性腫瘤的發(fā)生風險[7]?，F(xiàn)階段臨床上主要通過抗病毒等方式治療生殖器皰疹，但治療后的病情緩解率仍然較低，遠期的復發(fā)率仍較高[8]。臨床上生殖器皰疹治療后的總體有效率不足54%，治療后6 個月內復發(fā)率卻超過15%以上[9]。為此本研究通過對血清學免疫功能指標的分析，探討其輔助診斷生殖器皰疹價值。

NK 細胞是患者體內T 淋巴細胞的重要組成成分，能夠通過對于自身吞噬功能及病原體清除功能的調控，提高機體對于單純皰疹病毒的免疫能力。NK 下降導致的T 淋巴細胞功能缺陷，能夠為病毒入侵、整合及擴增等提供條件，從而促進了生殖器皰疹黏膜上皮細胞的病變過程[10]；IFN-γ濃度的維持不僅能夠影響炎癥因子的分泌和釋放，同時還能夠提高樹突狀細胞的功能，提高樹突狀細胞的抗原提呈功能，提高下游CD3+、CD4+T 淋巴細胞的活性，維持患者體內的細胞免疫功能；sHLA-G 是趨化因子家族成員，其羧基末端結構上包含的多個可結合的脯氨酸結構，能夠誘導下游補體成分或者炎癥因子如腫瘤壞死因子的上調，增加生殖器黏膜的炎癥性損傷程度[11]。部分研究者揭示了NK 細胞在生殖器皰疹患者中的數(shù)量變化，認為NK 細胞數(shù)量的減少能夠促進疾病的發(fā)生和臨床治療預后的惡化[12]。

在本次研究中，相關指標的分析可見，NK 細胞的數(shù)量、IFN-γ 的表達水平在生殖器皰疹患者中明顯下降，低于對照組人群，差異較為明顯，提示了NK 細胞數(shù)量減少、IFN-γ 的表達缺失可能是促進生殖器皰疹發(fā)生的原因之一，而sHLA-G 的表達濃度明顯上升，提示sHLA-G 誘導的趨化因子或者炎癥因子的富集可能在促進生殖器皰疹的發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用[13]。葛幫友等[10]研究也發(fā)現(xiàn)，生殖器皰疹患者NK 細胞的數(shù)量可平均下降30%以上，特別是在病程較長、生殖器黏膜損傷較為明顯的患者中，NK 細胞數(shù)量的下降更為明顯。在復發(fā)組患者中，NK 細胞及IFN-γ 的下降或者sHLA-G 的上升幅度更為明顯，提示了相關指標可能在生殖器皰疹的復發(fā)過程中發(fā)揮了重要調控作用，這主要由于NK 細胞、IFN-γ 的下降能夠導致殘留皰疹病毒顆粒DNA 的擴增及再次激活，而sHLA-G 誘導的局部炎癥性微環(huán)境能夠促進殘留單純皰疹病毒的擴散等因素有關。同時作者通過回顧分析不同的文獻，考慮與下列幾個方面的病理改變有關[14，15]：①NK 細胞數(shù)量的減少導致體內T 淋巴細胞吞噬分解單純皰疹病毒顆粒的能力下降，皰疹病毒顆粒浸潤導致黏膜上皮細胞的損傷程度明顯增加，從而促進了疾病的復發(fā)；②sHLA-G誘導的下游炎癥性信號通路MAPK 的激活，顯著促進了中性粒細胞對于生殖器黏膜的損傷過程，加劇了上皮細胞間質的炎癥損傷，最終促進疾病復發(fā)；③IFN-γ 的表達下降使得機體免疫功能下降，對病毒的殺滅不足，導致病毒載量的增加和病情的反復。IL-4、IL-8、IL-12、TNF-α 是體內的炎癥性指標，在病例組及復發(fā)性患者中，IL-4、IL-8、IL-12、TNF-α 的表達濃度均顯著上升，特別是復發(fā)組患者中的上升更為明顯，提示炎癥性反應是促進患者病情進展和復發(fā)的重要風險因素。而最后診斷學方面的研究可見，NK 細胞、sHLA-G、IFN-γ 等在單獨輔助診斷生殖器皰疹方面均具有一定的價值，而聯(lián)合不同指標后可以進一步提高靈敏度。

綜上所述，生殖器皰疹患者的NK 細胞數(shù)量和IFN-γ 水平較低，sHLA-G 和炎癥因子水平較高，可在結合臨床表現(xiàn)的基礎上，輔助用于疾病診斷。