羅 凱，張 騰1，＊＊，陳 瑜1，＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 上海 200437；2.上海市中醫(yī)藥研究院中西醫(yī)結(jié)合臨床研究所 上海 200437）

根據(jù)2019 年3 月發(fā)布的《中國心血管病報(bào)告2018》顯示，近十年來，我國心血管病死亡率一直位居各類疾病首位，并且發(fā)病率呈現(xiàn)不斷上升趨勢[1]。作為多種心血管疾病形成過程中共同病理表型之一的心肌細(xì)胞肥大也越來越多的受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。心肌細(xì)胞肥大是心肌細(xì)胞對各種內(nèi)外因素誘導(dǎo)的生物學(xué)壓力增加所作出的反應(yīng)，其特點(diǎn)是心肌細(xì)胞體積增大，直徑增寬，長度增加，肌節(jié)數(shù)量增多，并且與心肌肥厚和心衰的發(fā)生密切相關(guān)[2]。三七是五加科植物三七的干燥根和根莖，味甘、性溫、微苦，最早明確記載于《本草綱目》之中，迄今有數(shù)百年的臨床應(yīng)用歷史。《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》記載：“三七，善化瘀血，又善止血妄行，病愈后不致瘀血留于經(jīng)絡(luò)?！比呔哂谢鲋寡⒒钛ㄍ吹墓π?。PNS 是中藥三七最主要活性成分之一，具有抗炎、抗凝、抗氧化、抗凋亡、抗心律失常、減少心肌耗氧量等多種藥理活性，其相關(guān)制劑臨床廣泛應(yīng)用于心血管疾病的防治[3，4]。近年來，有研究報(bào)道PNS 能夠顯著降低心肌損傷小鼠的心肌細(xì)胞橫截面積，提示PNS 可能具有抑制心肌細(xì)胞肥大，抗心肌肥厚的效應(yīng)[5，6]，然而有關(guān)其作用機(jī)制尚未見深入的研究報(bào)道。亦有報(bào)道，心肌細(xì)胞肥大與能量代謝紊亂關(guān)系密切[7]。因此，本實(shí)驗(yàn)從能量代謝途徑發(fā)掘并探索PNS 抑制心肌細(xì)胞肥大效應(yīng)可能的分子機(jī)制，以期為其臨床應(yīng)用和推廣提供扎實(shí)的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物、試劑

新生1-3 天C57BL/6J 乳鼠(由購自斯萊克動物有限公司的成年C57BL/6J 小鼠繁育所得)；小鼠心肌細(xì)胞分離試劑盒（Thermo Scientific）；三七總皂苷（純度≥98%）（上海泛亞生物醫(yī)藥集團(tuán)）；異丙腎上腺素（純度≥99%）（東京化成工業(yè)株式會社）；羅丹明-鬼筆環(huán)肽染料（Thermo Scientific）；ATP檢測試劑盒（碧云天生物科技公司）；miRNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Qiagen）；5xPrime Script RT Master Mix（TaKaRa）；SYBR GREEN（Roche）；PPAR-δ一 抗（Thermo Scientific，PA1-823A）；PPAR-δ二抗（Thermo Scientific，SH253595）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

熒光化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀（美國UVP 公司）；多功能酶標(biāo)儀（BioTek 公司）；倒置熒光顯微鏡（Leica，DM6000B）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)（Roche）；細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo Scientific）；微量紫外分光光度計(jì)（Shimadzu）。

1.3 細(xì)胞分離及模型制備

新生1-3 天C57BL/6J 乳鼠，75%的醫(yī)用酒精皮膚消毒，沿左側(cè)肋弓下緣將肋弓與胸腔分離，使心臟暴露于體外，用鑷子迅速離斷心臟，于HBSS 緩沖液中（不含Ca2+、Mg2+）將心臟殘血浸滌干凈并剪碎，每個心臟置于備有木瓜蛋白酶200 μL和嗜熱菌蛋白酶10 μL混合液的EP 管中，37℃震蕩消化30 min，3000 rcf 常溫離心3 min，去上清液留心肌細(xì)胞沉淀物，每管加入HBSS緩沖液1 mL將沉淀吹打均勻，室溫放置5 min終止消化反應(yīng)，2000 rcf 常溫離心3 min，去上清留沉淀，每管加入含1%青鏈霉素和10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基1 mL 將沉淀吹打均勻，將各個EP 管中含有心肌細(xì)胞的培養(yǎng)基置于50 mL 離心管中混勻，調(diào)整細(xì)胞濃度為5 × 105/mL，接種至12 孔培養(yǎng)板，1000 μL/孔，37℃條件下置于5%二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育。待心肌細(xì)胞貼壁（約24 h）后，將上清連同沒有貼壁的心肌細(xì)胞吸出，重新加入DMEM 培養(yǎng)基繼續(xù)孵育。利用ISO（10 μmol/L）在二氧化培養(yǎng)箱5%CO2，37℃環(huán)境中培養(yǎng)孵育72 h，制備心肌細(xì)胞肥大模型。

1.4 分組給藥

將心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4 組：①正常組:加入等體積的生理鹽水溶液；②模型組：等體積生理鹽水+ISO 10 μmol/L；③PNS 低劑量組:PNS 50 mg/L+ISO 10 μmol/L；④PNS 高劑量組:PNS 200 mg/L+ISO 10 μmol/L。PNS 干預(yù)后30 min 給予ISO，在二氧化培養(yǎng)箱5%CO2，37℃環(huán)境中培養(yǎng)孵育72 h。

1.5 心肌細(xì)胞病理染色及橫截面積計(jì)算

心肌細(xì)胞孵育72 h 后吸去培養(yǎng)基，用PBS 清洗細(xì)胞10 min× 2 次，1% Triton 200 μL 透明化浸泡3 min，PBS清洗細(xì)胞10 min×2次，10%BSA 200 μL孵育20 min，5 μg/mL羅丹明-鬼筆環(huán)肽200 μL室溫避光孵育20 min，PBS 清洗細(xì)胞10 min × 2 次，0.1 mg/mL DAPI 200 μL溶液室溫孵育1 min，對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，400 倍熒光顯微鏡下觀察拍攝細(xì)胞形態(tài)。每孔觀察5 個視野，每個視野測5-10 個細(xì)胞，應(yīng)用image J 軟件計(jì)算心肌細(xì)胞橫截面積，取其平均值。

1.6 總RNA抽取及miRNA、基因表達(dá)分析

心肌細(xì)胞孵育72 h后吸去培養(yǎng)基，9%生理鹽水清洗，每孔分別加入500 μL Trizol 吹打，室溫放置5 min；離心取上清，加入氯仿100 μL，溫和振蕩室溫放置20min；離心取上清，加入異丙醇250 μL，振蕩混勻室溫放置15 min；離心棄上清，RNA 沉于管底加入75%乙醇500 μL，振蕩混勻室溫放置5 min；離心棄上清，室溫晾干10 min，每管加入DEPC 水50 μL 溶解，完成總RNA 提取。計(jì)算總RNA 濃度，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA。利用SYBG法進(jìn)行Real-Time PCR 檢測。

各引物如表1和表2所示。

表1 用于mRNA表達(dá)分析的引物

1.7 心肌細(xì)胞ATP水平分析

心肌細(xì)胞孵育72 h 后吸去培養(yǎng)基，9%生理鹽水清洗，4℃環(huán)境按150 μL/孔加ATP 細(xì)胞裂解液，4℃離心取上清（即ATP 樣品），按照20 μL/孔，將樣品加入檢測孔中，利用多功能酶標(biāo)儀檢測樣品中ATP 濃度，利用BCA 法測定樣品中蛋白濃度，計(jì)算樣品單位心肌細(xì)胞ATP 含量=樣品ATP 濃度/樣品蛋白含量，計(jì)算各組單位心肌細(xì)胞所含ATP的相對比值。

1.8 蛋白提取及表達(dá)水平分析

心肌細(xì)胞孵育72 h 后吸去培養(yǎng)基，9%生理鹽水清洗，裂解心肌細(xì)胞，收集上清，BCA 法測蛋白濃度，配SDS 凝膠，每個凝膠孔加入蛋白樣品20 μg 進(jìn)行電泳分離，80 V電泳約25 min，120 V電泳約80 min，切取目的條帶所在的凝膠進(jìn)行濕式電轉(zhuǎn)膜，30 mA 持續(xù)轉(zhuǎn)膜約12 h，將轉(zhuǎn)膜后的印跡膜用TBST緩沖液洗膜10 min×2次，10%牛血清球蛋白封閉2 h，一抗（1:500,PA1-823A）4℃孵育過夜，TBST 緩沖液洗膜10 min ×2 次，二抗（1:5000，SH253595）室溫孵育2 h，TBST 緩沖液洗膜10 min×2 次，DAB法顯色、成像，Launch visionworksLS分析軟件分析測定PPAR-δ與β-actin 的灰度值，取PPAR-δ/β-actin比值為蛋白水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，結(jié)果取P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PNS對ISO誘導(dǎo)的原代心肌細(xì)胞肥大具有顯著直接抑制效應(yīng)

羅丹明-鬼筆環(huán)肽可以特異性的識別心肌細(xì)胞內(nèi)的肌動蛋白微絲，對心肌細(xì)胞進(jìn)行染色在熒光顯微鏡下可呈現(xiàn)紅色，以示意心肌細(xì)胞輪廓；心肌細(xì)胞核因DAPI 染色可呈現(xiàn)為藍(lán)色，代表心肌細(xì)胞數(shù)量。如圖1所示，400 倍鏡下，正常組心肌細(xì)胞體積較小，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形或小梭形；模型組心肌細(xì)胞體積增大，最短徑增寬，長度增加，心肌細(xì)胞輪廓呈現(xiàn)為大梭形、長方形；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞體積不同程度變小。

表2 用于miRNA表達(dá)分析的引物

圖1 心肌細(xì)胞羅丹明-鬼筆環(huán)肽染色（× 400）

表3 心肌細(xì)胞橫截面積（mean ± SEM）

應(yīng)用image J軟件計(jì)算心肌細(xì)胞橫截面積。如表3所示，與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞橫截面積顯著增大（P＜0.05）；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞橫截面積顯著減小（P＜0.05）。

2.2 PNS顯著下調(diào)心肌細(xì)胞肥大相關(guān)因子mRNA表達(dá)

圖2 心肌細(xì)胞BNP mRNA表達(dá)水平

如圖2 所示，Real-Time PCR 分析結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞BNP mRNA 表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞BNP mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05）。

2.3 PNS顯著升高心肌細(xì)胞ATP水平

如圖3所示，與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞ATP水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞ATP水平顯著升高（P＜0.05）。

2.4 PNS 顯著上調(diào)心肌細(xì)胞脂肪酸β 氧化相關(guān)因子mRNA表達(dá)

如圖4 所示，Real-Time PCR 分析結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞PPAR-δ、MCAD、LCAD mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，PNS低劑量組心肌細(xì)胞MCAD、LCAD mRNA 表達(dá)水平顯著上調(diào)，PNS 高劑量組心肌細(xì)胞PPAR-δ、MCAD、LCAD mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）。

2.5 PNS顯著上調(diào)心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平

如圖5 所示，Western blotting 分析結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平顯著下調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平顯著上調(diào)（P＜0.05）。

2.6 PNS顯著下調(diào)心肌細(xì)胞miRNA-199a表達(dá)

如圖6 所示，Real-Time PCR 分析結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組心肌細(xì)胞miRNA-199a 表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，PNS 低、高劑量組心肌細(xì)胞miRNA-199a表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05）。

3 討論

祖國醫(yī)學(xué)中并無與心肌細(xì)胞肥大直接對應(yīng)的中醫(yī)病名，但根據(jù)其病因病機(jī)和臨床表現(xiàn)可將其歸屬于中醫(yī)的心悸、怔忡、胸痹等范疇，其病機(jī)多樣，瘀血阻滯是發(fā)病的重要環(huán)節(jié)之一?；诓∫虿C(jī)及臨床特點(diǎn)，后世醫(yī)家在總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，對這類疾病往往采用不同的治療方式，其中“活血化瘀”是常用的治法之一。無論是古方還是現(xiàn)代臨床用藥，三七都是活血化瘀治法中重要的組成部分，PNS 是三七中最主要也是研究最多的活性成分之一[8]。

圖4 心肌細(xì)胞MCAD、LCAD、PPAR-δ mRNA表達(dá)水平

體內(nèi)心肌細(xì)胞發(fā)生肥大的過程中，一方面心臟在感受壓力和容量負(fù)荷增加等不良刺激后會直接誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生肥大；另一方面心臟感受不良刺激后處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，激活ROS 系統(tǒng)，促使炎癥細(xì)胞釋放大量炎性因子作用于心肌細(xì)胞肥大相關(guān)受體，導(dǎo)致炎癥周圍心肌細(xì)胞發(fā)生肥大，炎癥因子也可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，使心肌發(fā)生纖維化，進(jìn)而激活心肌細(xì)胞肥大相關(guān)受體，加快心肌細(xì)胞肥大進(jìn)程[9，10]。在前期實(shí)驗(yàn)研究中觀察到，PNS 能夠顯著降低心肌損傷小鼠的心肌細(xì)胞橫截面積，提示PNS 可能具有抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)。心肌組織主要由心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞組成，并且病理狀態(tài)下心肌內(nèi)富含各種炎癥細(xì)胞，基于心肌細(xì)胞肥大發(fā)生的分子學(xué)機(jī)制，單純的小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)并不能系統(tǒng)準(zhǔn)確的闡述PNS 是否具有直接抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)。對此，本實(shí)驗(yàn)基于PNS 在小鼠體內(nèi)抑制心肌細(xì)胞肥大有效的前提下，對原代心肌細(xì)胞進(jìn)行分離，將心肌組織中絕大多數(shù)的成纖維細(xì)胞、炎癥細(xì)胞進(jìn)行消化剔除，最大比例的保留原代心肌細(xì)胞后，在成功復(fù)制原代心肌細(xì)胞肥大模型基礎(chǔ)上，繼續(xù)探討PNS 是否具有直接抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予不同劑量的PNS 后，ISO 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞橫截面積顯著減小，心肌細(xì)胞肥大相關(guān)因子BNP 的mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)。提示PNS 具有顯著直接抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)。

生理狀態(tài)下，心肌細(xì)胞活動所需要的能量60%-90%來自脂肪酸β氧化，10%-40%來自葡萄糖有氧氧化，少量來自酮體、氨基酸分解[11]。病理狀態(tài)下，心肌細(xì)胞內(nèi)能量底物由脂肪酸向葡萄糖轉(zhuǎn)換，脂肪酸β氧化減少，糖酵解增加[12]。糖酵解雖然能夠在短時(shí)間內(nèi)迅速提供能量，暫時(shí)滿足心肌細(xì)胞對能量的需求，但是這種產(chǎn)能方式產(chǎn)能效率低下。由于糖酵解過程中會產(chǎn)生大量乳酸，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，ATP 此時(shí)大多用于維持內(nèi)環(huán)境中Na+、Ca2+等離子的轉(zhuǎn)運(yùn)，用于心肌細(xì)胞收縮的供能減少，導(dǎo)致心臟效率下降，發(fā)生心肌細(xì)胞肥大、心肌肥厚[2]。ATP 又稱三磷酸腺苷，是機(jī)體的直接供能物質(zhì)，ATP 發(fā)生水解時(shí)，形成ADP 并釋放一個磷酸根，同時(shí)釋放能量。脂肪酸、葡萄糖、蛋白質(zhì)給機(jī)體供能，都要通過代謝轉(zhuǎn)化成為ATP實(shí)現(xiàn)[13]。因此ATP 可以直接反映心肌細(xì)胞最終的能量生成。有研究報(bào)道[14]，心肌細(xì)胞肥大發(fā)生時(shí)伴有ATP 生成減少，提示心肌細(xì)胞肥大可能與能量代謝異常存在密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)在PNS 具有顯著直接抑制心肌細(xì)肥大效應(yīng)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步對心肌細(xì)胞能量代謝進(jìn)行探索。實(shí)驗(yàn)通過對原代心肌細(xì)胞中ATP 含量進(jìn)行測定，以此反映心肌細(xì)胞能量代謝情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ISO 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞在肥大過程中ATP 水平顯著降低；給予不同劑量的PNS 后，ATP 水平顯著升高。提示PNS 可能通過改善心肌細(xì)胞能量代謝，發(fā)揮抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)。

圖5 心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平

圖6 心肌細(xì)胞miRNA-199a表達(dá)水平

正常狀態(tài)下，甘油三酯可以在胞質(zhì)內(nèi)分解為甘油和脂肪酸。中鏈和長鏈脂肪酸需要轉(zhuǎn)化為脂酰COA，在肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I催化下與肉堿結(jié)合形成脂酰肉堿才能轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體內(nèi)，進(jìn)行脂肪酸β氧化，生成大量ATP[15]。心臟病理狀態(tài)下，心肌細(xì)胞及線粒體內(nèi)的酶活性和代謝發(fā)生顯著變化，影響脂酰COA 由胞質(zhì)向線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)速率，使參與脂肪酸β氧化的底物水平下降，導(dǎo)致ATP 生成減少，產(chǎn)能降低。LCAD 和MCAD 是肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I 重要組成部分，二者分別協(xié)助長鏈脂肪酸和中鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體，在脂肪酸β氧化過程中發(fā)揮著重要作用[16]。有研究報(bào)道心肌細(xì)胞肥大過程中，LCAD 和MCAD 活性降低,造成線粒體外膜上的肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I 表達(dá)下降，影響脂酰COA 與肉堿結(jié)合形成脂酰肉堿，使脂酰COA 由胞質(zhì)向線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)速率降低，線粒體攝取脂酰COA 功能出現(xiàn)障礙[17]。實(shí)驗(yàn)采用Real-Time PCR 分析心肌細(xì)胞中LCAD、MCAD的mRNA 表達(dá)。結(jié)果顯示，ISO 誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大過程中，心肌細(xì)胞中LCAD、MCAD 的mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)；給予不同劑量PNS 后心肌細(xì)胞中LCAD、MCAD 的mRNA 表達(dá)水平顯著上調(diào)。提示PNS可能通過上調(diào)LCAD、MCAD 的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸代謝，增加心肌細(xì)胞能量生成。

PPAR-δ是心肌細(xì)胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子之一，可以激活與脂肪酸攝取、氧化相關(guān)的多種基因的表達(dá)，與心肌細(xì)胞脂肪酸代謝密切相關(guān)[15]。有研究報(bào)道在心肌細(xì)胞脂肪酸代謝過程中，PPAR-δ可能通過調(diào)控其下游靶基因LCAD 和MCAD 的活性,影響脂肪酸β氧化[18]。實(shí)驗(yàn)采用Real-Time PCR 分析心肌細(xì)胞中PPAR-δ的mRNA 表達(dá)。結(jié)果顯示，ISO誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大過程中，心肌細(xì)胞中PPAR-δ的mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)；給予不同劑量PNS 后，心肌細(xì)胞中PPAR-δ的mRNA 表達(dá)水平出現(xiàn)不同程度上調(diào)，其中以PNS 高劑量組為顯著上調(diào)。由于PPAR-δ在脂肪酸代謝過程中，可能與微小RNA（microRNA,miRNA）存在密切聯(lián)系，實(shí)驗(yàn)采用Western Blotting 進(jìn)一步分析PPAR-δ蛋白水平。結(jié)果顯示，ISO 誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大過程中，心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平顯著下調(diào)；給予不同劑量PNS 后，心肌細(xì)胞PPAR-δ蛋白水平顯著上調(diào)。提示PNS 可能通過上調(diào)PPAR-δ促進(jìn)LCAD、MCAD 的表達(dá)。

MiRNA 屬于非編碼微小RNA，作用于靶基因mRNA 分子3’端非編碼區(qū)域，通過負(fù)性調(diào)控或直接降解mRNA，參與蛋白合成和表達(dá)，影響生物活動的進(jìn)程[19]。研究報(bào)道心臟超負(fù)荷和缺氧狀態(tài)下可能存在miRNA-199a 表達(dá)水平的上調(diào)，進(jìn)而抑制PPAR-δ活化，限制細(xì)胞內(nèi)脂肪酸β氧化速率，影響能量代謝，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大[20]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ISO 誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大過程中，心肌細(xì)胞miRNA-199a 表達(dá)水平顯著上調(diào)；給予不同劑量PNS 后，miRNA-199a 表達(dá)水平顯著下調(diào)。提示PNS 下調(diào)心肌細(xì)胞miRNA-199a 的表達(dá)，上調(diào)其靶基因PPAR-δ的表達(dá)，可能是PNS 改善心肌能量代謝，增強(qiáng)脂肪酸β氧化的作用機(jī)制之一。

綜上所述PNS 具有顯著直接抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)；PNS 干預(yù)MiR-199a/PPAR-δ調(diào)控、改善心肌能量代謝可能是其抑制心肌細(xì)胞肥大的作用機(jī)制之一。PNS改善能量代謝抑制心肌細(xì)胞肥大過程中是否涉及葡萄糖有氧氧化、糖酵解等其他能量代謝途徑尚需要進(jìn)一步探索研究。這將為改善心肌肥厚、防治心衰提供新的視點(diǎn)和思路。