吉登軍 顧非 李云龍 李亞洲 寧元率 王怡超 曹欣地 柳文韜

[摘要] 目的 觀察背部經(jīng)脈手法對對氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠的行為學(xué)影響。 方法 運用SPSS 18.0 for Windows軟件生成隨機數(shù)字表，隨機函數(shù)為Rvuiform，種子號1234。將30只雄性清潔級SD失眠大鼠按隨機數(shù)字表分為背部經(jīng)脈手法組（A組）、空白對照組（B組）、藥物治療組（C組），每組10只。分別于PCPA藥物造模前、造模后、治療7 d后這3個時間點采集大鼠行為學(xué)數(shù)據(jù)，包括曠場實驗（水平運動和垂直運動水平的運動總數(shù)）、力竭游泳實驗、鼠尾懸吊實驗數(shù)據(jù)的變化。 結(jié)果 治療前三組大鼠力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)、絕望時間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。治療后B組力竭時間及絕望時間均較治療前降低（P < 0.05）;A組和C組治療前后力竭時間及絕望時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。與B組比較，A組和C組力竭時間均增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）;A組與C組力竭時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。治療后三組掙扎次數(shù)均較治療前減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 PCPA失眠大鼠存在行為學(xué)異常，可用于推拿治療失眠的基礎(chǔ)實驗研究;行為學(xué)上，背部經(jīng)脈手法和安定均可明顯減緩失眠大鼠的運動能力、心肺功能和對新環(huán)境的探索能力的下降，是推拿手法改善失眠的客觀體現(xiàn)。

[關(guān)鍵詞] 背部經(jīng)脈手法;失眠;對氯苯丙氨酸;動物實驗;行為學(xué)

[中圖分類號] R24? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）01（a）-0012-04

隨著社會高速發(fā)展及生活壓力急劇增加，失眠的發(fā)病率快速升高。長期失眠不僅會對身體健康造成嚴重損害，也會給患者帶來巨大的精神壓力，嚴重影響患者生活質(zhì)量。推拿作為治療失眠的有效非藥物療法之一，近年來在大健康的背景下被愈加關(guān)注。曹仁發(fā)教授在推拿治療失眠項目研究工作中指出，雖然推拿治療失眠有較好的療效，但其作用機制卻僅限于用傳統(tǒng)中醫(yī)理論去解釋，缺乏現(xiàn)代醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究方面的有力證據(jù)，需進一步深入推拿作用機制的研究。本研究旨在通過觀察背部經(jīng)脈手法對對氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠的行為學(xué)影響，驗證背部經(jīng)脈對失眠大鼠模型的有效性，為推拿手法的基礎(chǔ)研究提供一定的支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物? 清潔級雄性SD大鼠30只，體重230～280 g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（滬）2017-005。飼養(yǎng)環(huán)境：室內(nèi)采光按照白晝循環(huán)模式，室溫20～25℃，定時喂食，自由飲水，預(yù)養(yǎng)7 d，適應(yīng)實驗室環(huán)境。運用SPSS 18.0 for Windows軟件生成隨機數(shù)字表，隨機函數(shù)為Rvuiform，種子號1234，將30只大鼠按隨機數(shù)字表法分為背部經(jīng)脈手法組（A組）、空白對照組（B組）、藥物治療組（C組），每組10只。三組大鼠造模前體重分別為A組（255.30±9.59）g、B組（253.95±8.55）g、C組（249.55±12.48）g。造模前三組大鼠體重比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F = 0.845，P = 0.440），具有可比性。

1.1.2 儀器? 4×4敞箱（80 cm×80 cm×40 cm）、泳池（120 cm×80 cm×75 cm）、秒表。

1.2 PCPA失眠大鼠模型造模

使用醫(yī)用生理鹽水將PCPA（美國SIGMA公司，批號：SHBD9164V）配制成濃度為45 mg/mL的懸浮液備用。于每日上午8∶00～8∶15腹腔注射PCPA混懸液（注射量按1 mL/100 g每只大鼠體重計算），每日1次，連續(xù)注射2 d。于第2次腹腔注射28～30 h后，觀察大鼠，當(dāng)其出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白天活動不停，整體觀察與造模前明顯不同時，表明失眠大鼠造模成功。

1.3 治療方法

A組：予背部經(jīng)脈手法治療，手法治療時間5 min，每天1次，連續(xù)7 d。背部經(jīng)脈手法治療具體操作：將大鼠固定于固定器中，用壓力指套從大鼠頭側(cè)枕后部為起始，沿后背正中刺激經(jīng)脈并向尾部移動，直至尾根部為止，注意讀取壓力指套的壓力值，使得整個操作過程中的壓力保持在5～8 N，刺激量為5 min/（只·d），連續(xù)7 d。

B組：予同A組相同時間（5 min）及相同強度的束縛，不加其他干預(yù)，每天1次，連續(xù)7 d。

C組：干預(yù)第1天開始后，用含有安定藥物的飲水投喂治療。同時予同A組相同時間（5 min）及相同強度的束縛，每天1次，連續(xù)7 d。給藥方法：將安定（通用名：地西泮，上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號：14160601，10 mg/粒）按成人催眠劑量10 mg/d，用人和鼠給藥劑量體表面積折算公式計算出應(yīng)給予大鼠藥劑量為0.92 mg/kg，用飲用水稀釋，每天投喂含藥物的飲用水。

1.4 實驗方案

1.4.1 力竭游泳實驗? 事先將泳池的水深調(diào)為50 cm，水溫調(diào)為（28±1）℃。將大鼠放入泳池當(dāng)中，并開始計時。當(dāng)大鼠頭部沉入水中10 s內(nèi)不能浮出水面時，將其撈出，并記下時間。

1.4.2 曠場實驗? 將大鼠放入4×4敞箱（周壁和底為黑色，底用紅色膠帶劃分為面積相等的16個矩形）中央，并開始計時。在安靜環(huán)境中，記錄3 min內(nèi)大鼠水平運動數(shù)據(jù)（四爪均進入方格可記數(shù)）及垂直運動數(shù)據(jù)（兩前爪騰空或攀附箱壁可記數(shù)，洗臉不算）。實驗結(jié)束后取出大鼠，并清理干凈，以便進行后續(xù)相關(guān)實驗。

1.4.3 鼠尾懸吊實驗? 一手捏在大鼠尾端1 cm處，并將大鼠拎起到距離地面1 m左右處，并用秒表開始1 min倒計時。觀察1 min內(nèi)的大鼠倒掛時向上翻轉(zhuǎn)的掙扎總次數(shù)，并用另一秒表記錄大鼠靜止不動狀態(tài)的總時間（絕望時間）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（x±s）表示。曠場實驗、力竭實驗、鼠尾懸吊實驗中治療前后組間比較為多組隨機樣本比較，資料符合方差齊性，服從正態(tài)性，采用單因素方差分析，進一步行組間兩兩比較時，采用LSD-t檢驗;治療前后各組組內(nèi)比較時，為配對樣本比較，資料服從正態(tài)性，采用配對t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組造模前后力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)、絕望時間比較

方差分析結(jié)果顯示，造模前及造模后三組力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)、絕望時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。與造模前比較，三組造模后力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)均降低，絕望時間均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 三組治療前后力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)、絕望時間及各項指標(biāo)差值比較

方差分析結(jié)果顯示，治療前三組力竭時間、曠場運動總數(shù)、掙扎次數(shù)、絕望時間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。治療后三組力竭時間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F = 7.401，P < 0.05）;進一步兩兩比較，與B組比較，A組和C組力竭時間均增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）;A組與C組力竭時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。治療后B組力竭時間短于治療前（P < 0.05），A組和C組組內(nèi)治療前后力竭時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。三組治療前后曠場運動總數(shù)組內(nèi)、組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。與治療前比較，治療后三組掙扎次數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表4。與治療前比較，治療后B組絕望時間降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）;A組和C組組內(nèi)治療前后絕望時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表5。方差分析結(jié)果顯示，三組治療前后力竭時間差值、曠場運動總數(shù)差值、掙扎次數(shù)差值、絕望時間差值比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。但兩兩比較結(jié)果顯示，與B組比較，A組力竭時間差值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），其他各組兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表6。

3 討論

失眠，中醫(yī)稱之為不寐，《難經(jīng)·四十六難》“血氣衰，肌肉不滑，榮衛(wèi)之道澀，故晝?nèi)詹荒芫?，夜不得寐也”，闡釋了失眠與氣血肌肉的關(guān)系，提出肌肉不滑是失眠的原因之一。目前PCPA藥物造模是國外較為公認的失眠模型，利用藥物抑制大鼠大腦相應(yīng)神經(jīng)遞質(zhì)合成，造成睡眠晝夜節(jié)律消失，致使大鼠失眠[1]。造模后大鼠可出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白天活動不停，整體觀察狀態(tài)有血氣不調(diào)、榮衛(wèi)澀滯之象[2]，符合本研究要求。宏觀神經(jīng)行為的異常是失眠動物常有的征象，而這種異常正是失眠動物模型造模成功的標(biāo)準，也是最易于觀察的指標(biāo)。同時行為學(xué)指標(biāo)能全面、迅速地反映失眠大鼠的整體狀態(tài)變化，本研究采用的力竭實驗、曠場實驗、鼠尾懸吊實驗數(shù)據(jù)指標(biāo)，可以反映大鼠的運動功能、心肺能力，以及對新環(huán)境的探索能力和情緒焦慮相關(guān)狀態(tài)。將失眠大鼠的整體狀態(tài)以具體化、客觀化的數(shù)據(jù)顯示，使其具有可比性，適用于推拿機制的基礎(chǔ)研究[3]。

本研究結(jié)果顯示，與B組比較，A組及C組力竭時間均增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），即背部經(jīng)脈手法和安定藥物均可以緩解失眠大鼠心肺能力和運動功能的下降?，F(xiàn)代神經(jīng)解剖已證實，手法改善失眠的作用機制與背部神經(jīng)系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系，脊柱兩旁淺層有脊神經(jīng)后支分布，深層有交感神經(jīng)干、交感神經(jīng)椎旁節(jié)和灰、白交通支，當(dāng)在脊柱兩側(cè)施加手法干預(yù)時，可以刺激機體的神經(jīng)系統(tǒng)，激發(fā)相應(yīng)的內(nèi)臟調(diào)控系統(tǒng)，影響中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，發(fā)揮神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)作用，改善睡眠狀態(tài)[4]。而心肺能力和運動功能的變化可以作為大鼠睡眠狀態(tài)的改善指標(biāo)，通過觀察這些指標(biāo)，本研究可以初步證明背部經(jīng)脈手法對于大鼠失眠狀態(tài)的改善作用。

本研究中，與治療前比較，B組治療后力竭時間和絕望時間均降低（P < 0.05），而A組和C組治療前后力竭時間和絕望時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。空白造模大鼠的運動能力下降和情緒變化呈現(xiàn)出隨時間逐步加重的趨勢，而背部經(jīng)脈手法和藥物治療在一定程度上能夠控制和延緩其加重，可以作為失眠程度改善的反映。背部經(jīng)脈手法所包含的按揉法主要為緩慢柔和的推拿手法，其有鎮(zhèn)靜安神、疏通經(jīng)絡(luò)和行氣活血的作用，可以提高局部血液流動速度，改善軟組織的微循環(huán)，促進生理代謝，有利于脊柱相關(guān)肌纖維的再生和恢復(fù)，改善組織的力學(xué)特性[5]。背部經(jīng)脈手法作用于失眠大鼠脊背部時，可以調(diào)整血氣、滑利脈絡(luò)，以改善睡眠狀態(tài)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)也有相應(yīng)的解釋：脊柱兩側(cè)的皮膚，通過節(jié)段神經(jīng)支配與相應(yīng)的內(nèi)臟密切聯(lián)系，背部手法作用于脊柱時，刺激會通過感覺神經(jīng)纖維，在植物神經(jīng)和體液的參與下，對相應(yīng)的臟腑起到調(diào)整作用。同時通過反射弧影響腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的功能狀態(tài)，從而調(diào)整大腦的興奮性以達到改善睡眠的目的[6]。

綜上，通過觀察背部經(jīng)脈手法對PCPA失眠大鼠的行為學(xué)影響，初步顯示PCPA失眠大鼠存在行為學(xué)異常，而背部經(jīng)脈手法和安定藥物治療均可明顯減緩失眠大鼠運動功能、心肺能力和對新環(huán)境探索能力的下降，是推拿手法改善失眠的客觀體現(xiàn)。今后可以將PCPA失眠大鼠模型用于推拿治療失眠的基礎(chǔ)實驗研究，推進推拿學(xué)科的發(fā)展。

[參考文獻]

[1]? 姚斐，房敏.不同強度按壓背俞穴對CFS大鼠行為學(xué)及體重的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，34（10）：676-678.

[2]? 羅本華，羅梅桂，王燕，等.臍內(nèi)環(huán)針與安定片對PCPA失眠大鼠神經(jīng)行為學(xué)影響的對照研究[J].大眾科技，2016， 18（2）：90-92，104.

[3]? 張智燁，張振賢，董書桂，等.理虛解郁方對慢性疲勞綜合征大鼠行為學(xué)的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014， 28（2）：65-67.

[4]? 畢勝，李義凱，汪愛媛，等.不同推拿手法下腰椎小關(guān)節(jié)應(yīng)力變化的觀察[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2001，16（3）：144-145.

[5]? 駱雄飛，紀東升，匡堯.針灸配合推拿“培元益神”法治療慢疲勞綜合癥[J].中華實用中西醫(yī)雜志，2010，23（11）：31-34.

[6]? 李義凱.脊柱推拿生物力學(xué)研究的幾個關(guān)鍵問題[J].醫(yī)用生物力學(xué)，2013，28（3）：255-258.

（收稿日期：2018-05-03? 本文編輯：羅喬荔）