李 楠，吳曉昀，嚴(yán) 芳，李 婕，張 珍,朱 燕

(廣東省第二人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)部,廣東廣州 510317)

染色體多態(tài)性是個別染色體上的微小變異，表現(xiàn)為結(jié)構(gòu)及帶型強度的變異。一般涉及在遺傳上不活躍的含高度重復(fù)DNA 的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)，而此區(qū)無遺傳信息傳遞，發(fā)生變異后一般不會引起臨床表型異常。然而，國內(nèi)外均有研究表明，染色體多態(tài)性所具有的遺傳效應(yīng)可能在一定內(nèi)外環(huán)境影響下，導(dǎo)致相應(yīng)的臨床表型或妊娠異常等[1]。本研究通過羊水染色體核型分析及跟蹤隨訪，探討染色體多態(tài)性與妊娠結(jié)局的關(guān)系，旨在為產(chǎn)前診斷工作提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2015年1月至2018年3月，由于高齡、異常妊娠史、產(chǎn)前篩查高風(fēng)險或B超異常等高危因素來本院產(chǎn)前診斷中心就診的孕期年齡在20～46歲，孕周為16+3～24周的孕婦共581例。所有孕婦經(jīng)過遺傳咨詢并簽署知情同意書后自愿接受羊膜腔穿刺術(shù)進行產(chǎn)前診斷。

1.2研究方法

1.2.1無菌條件下經(jīng)超聲介導(dǎo)行羊膜腔穿刺術(shù)，抽取羊水20.0 mL，離心后留細胞沉淀物及羊水0.5 mL，加入10.0 mL Gibco培養(yǎng)基，吸管吹打混勻后平均分至兩個25.0 mL的培養(yǎng)瓶中，置37 ℃，5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。經(jīng)培養(yǎng)后制備染色體標(biāo)本，G顯帶后進行核型分析，計數(shù)30個中期分裂相，分析3個以上的核型，對于嵌合體患者，則計數(shù)100個中期分裂相，分析5個以上核型。

1.2.2核型分析檢測出胎兒染色體多態(tài)性時，召回孕婦夫婦抽取其外周血，常規(guī)外周血染色體制備，G顯帶后進行核型分析，明確胎兒染色體多態(tài)性的遺傳來源，并隨訪其在孕期的產(chǎn)檢結(jié)果及新生兒出生情況。

1.2.3外周血Y染色體AZF微缺失基因檢測采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司試驗盒，按照試劑盒說明書逐步操作。

2 結(jié) 果

2.1581例孕婦中，核型分析發(fā)現(xiàn)羊水染色體多態(tài)性36例，占受檢人數(shù)的6.20%。召回夫婦36對(100.00%)。 見表1。

表1 36例羊水染色體多態(tài)性核型分布

2.236例胎兒染色體多態(tài)核型中，出生男嬰21例，女嬰14例，1例為21pstk+合并21三體綜合征而終止妊娠[47，XN，21pstk+，+21]；其中inv(9)8例，次縊痕變異8例，D組和G組染色體多態(tài)13例，大Y 1例，小Y 6例，見表1。產(chǎn)前診斷指征分布：年齡高風(fēng)險≥35歲9例(25.00%)；產(chǎn)前血清學(xué)篩查高風(fēng)險者23例(63.89%)，其中早期唐篩高風(fēng)險8例(34.78%),中期唐篩高風(fēng)險13例(56.52%)，中期唐篩臨界風(fēng)險2例(8.70%)；不良孕產(chǎn)史者4例(11.11%)。

2.336例胎兒染色體多態(tài)核型中,35例多態(tài)性核型遺傳自父母其中一方，且父母無異常臨床表型；僅有1例21ps+多態(tài)性核型為新生變異，為39+2周順產(chǎn)男嬰，出生時體質(zhì)量3.05 kg，身長50 cm，Apgar評10分，孕婦在孕期產(chǎn)檢以及胎兒出生后均未見明顯異常，新生兒期保健各項指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。

2.4外周血Y染色體AZF下微缺失基因檢測結(jié)果為：6例中有2例AZFc區(qū)的SY152位點缺失，其余4例未發(fā)現(xiàn)AZF微缺失。

3 討 論

染色體多態(tài)性是指正常人群中經(jīng)?？梢姷礁鞣N染色體形態(tài)恒定的微小變異，其發(fā)生率為2.6%[2]，常涉及9號染色體倒位，D、G組短臂和Y染色體長臂長度變異，并按孟德爾方式遺傳，有家族聚集現(xiàn)象，但傳統(tǒng)觀點認(rèn)為上述變異不會引起表型效應(yīng)[3]。本研究58例孕婦中染色體多態(tài)性的發(fā)生率為6.20%，高于普通人群。

9號染色體臂間倒位[inv(9)]在人群中的發(fā)生率為1.00%～1.65%[4],韓國有學(xué)者報道，inv(9)患者與健康人群相比畸形率沒有顯著差異[5],但有學(xué)者發(fā)現(xiàn)成年患者可出現(xiàn)生育障礙[6]。因有一部分本身或配偶帶有結(jié)構(gòu)異常(包括倒位、易位、插入等)的染色體，而表型正常的攜帶者很容易形成異常的配子而使后代受累，其共同的臨床表現(xiàn)是引起反復(fù)自然流產(chǎn)、死胎、生育畸形兒等。本研究中inv(9)共8例，占羊水穿刺病例的1.38%(8/581)，與人群中的發(fā)生率一致,且均遺傳自雙親之一，且雙親表型正常。

本研究中1qh+/9qh+共有8例，占羊水穿刺病例的1.38%(8/581)。目前，對于次縊痕增加會引起流產(chǎn)、生育異常等癥狀報道觀點不一，有支持者[7]，也有反對者[8]。本研究對召回的8對夫婦做檢查，結(jié)果顯示胎兒多態(tài)性均遺傳自雙親之一，且雙親表型正常。

Y染色體的多態(tài)性分為大Y、小Y和Y倒位。大Y過去一直認(rèn)為是正常的變異形態(tài)，而現(xiàn)在認(rèn)為大Y染色體高度重復(fù)的DNA序列可能增加大Y的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致配子或合子在早期細胞分裂時發(fā)生不分離、易位或基因數(shù)的增減等傾向，從而產(chǎn)生不平衡配子或合子而引起不育、流產(chǎn)等生殖異常[9-11]。小Y染色體，可因存在Y染色質(zhì)微缺失引起細胞分裂發(fā)生錯誤，引起無精癥或異常精子，導(dǎo)致對方流產(chǎn)、死胎等。本研究中大Y 1例，小Y 6例，占羊水穿刺病例的1.20%(7/581)。召回孕婦丈夫檢查，Y的多態(tài)性均垂直遺傳自父親。我們同時對多態(tài)性為小Y的胎兒的父親加做外周血Y染色體AZF微缺失檢測，6例中4例未發(fā)現(xiàn)AZF微缺失，有2例為AZFc區(qū)的SY152位點缺失。由于Y染色體屬于單倍體，當(dāng)親代存在AZF微缺失時，缺失的Y染色體會毫無保留地垂直遺傳給子代，甚至有報道子代的AZF缺失片段會擴大[12]，子代成年后的精液情況也是不可預(yù)知的[13-14]。所以YqAZFc段缺失者自身的影響不大，也可以有正常的生育能力，但遺傳給后代時可能有加重的趨勢。

D、G組為近端著絲粒染色體，短臂上有多拷貝的rRNA基因，該基因拷貝數(shù)的增減對細胞代謝不會造成明顯影響，但rRNA基因的增多可使染色體結(jié)構(gòu)功能發(fā)生改變，引起D/C組隨體區(qū)聯(lián)合，導(dǎo)致染色體不分離和重排機會增多，形成染色體異常的配子和合子，從而導(dǎo)致胚胎發(fā)育障礙，致使流產(chǎn)、胚胎死亡或不育等[15]。本組研究中，D、G組染色體多態(tài)性胎兒有13例，占羊水穿刺病例的2.23%(13/581)。其中有1例21pstk+合并21三體綜合征而終止妊娠；1例21ps+新生變異的病例在孕期及出生后未見明顯異常，可能是由于隨體區(qū)本不具有結(jié)構(gòu)功能基因。由于病例數(shù)據(jù)少，其新生變異的具體機制及與臨床表型效應(yīng)的關(guān)系還需收集數(shù)據(jù)進一步研究。其余胎兒染色體多態(tài)性均遺傳自雙親之一，且雙親表型正常。

本組資料顯示，36例染色體多態(tài)性胎兒中，除1例合并21三體綜合征終止妊娠外，均健康出生，隨后分別對其36對父母進行外周血染色體檢查，除發(fā)現(xiàn)1例21ps+新生變異外，其余胎兒多態(tài)性均遺傳自雙親之一，且這些夫婦均表型正常。21ps+新生變異病例在整個孕期且胎兒出生后均顯示正常，新生兒保健各項指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。因此，筆者推斷染色體多態(tài)性對臨床表型及妊娠結(jié)局并無影響。所以在發(fā)現(xiàn)胎兒多態(tài)性時，應(yīng)建議召回其父母做相應(yīng)檢查，確定來源。對于具有明確遺傳來源的染色體多態(tài)性可參照其父母的身體發(fā)育、智力發(fā)育情況予以判斷其妊娠結(jié)局。但新發(fā)的染色體多態(tài)性與胎兒的生長發(fā)育之間的關(guān)系還需收集更多的樣本資料進行進一步的研究，以便更好地進行產(chǎn)前診斷，避免染色體異常胎兒的出生。

具有明確遺傳來源的染色體多態(tài)性可參照其父母的身體發(fā)育、智力發(fā)育情況予以判斷其妊娠結(jié)局，但新發(fā)的染色體多態(tài)性與胎兒的生長發(fā)育之間的關(guān)系還待收集更多的樣本資料進行進一步的研究。