張莉，劉詩意，王艷清，楊瀟，程艷香

卵巢癌（ovarian cancer）的致死率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中居首位。目前卵巢癌患者的5年生存率僅為30%～50%[1]，其主要原因是卵巢位于盆腔深部，癥狀隱匿，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時多屬晚期（FIGO分期：Ⅲ～Ⅳ期）。此外，在治療過程中出現(xiàn)的高復(fù)發(fā)率和對化療藥物耐藥也是卵巢癌患者生存率低的原因。因此，為提高患者的生存率還需要進(jìn)一步研究卵巢癌發(fā)病及耐藥的機(jī)制并尋找早期診斷標(biāo)志物以及更有效的治療方法。

2011年Salmena等[2]提出了競爭性內(nèi)源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）假說，該假說認(rèn)為在ceRNA網(wǎng)絡(luò)中，微小RNA（microRNA,miRNA）為核心元素，mRNA、長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lncRNA）、環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）或假基因等作為ceRNA，通過競爭一個或多個miRNA反應(yīng)元件來調(diào)節(jié)其他RNA的功能。lncRNA、miRNA和circRNA等均為非編碼RNA（noncoding RNA，ncRNA），研究證實(shí)ncRNA發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用，參與細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡和耐藥等過程。在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)lncRNA作為ceRNA參與病程的進(jìn)展[3]，ceRNA網(wǎng)絡(luò)在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮著重要作用?，F(xiàn)綜述lncRNA作為ceRNA在卵巢癌中的研究進(jìn)展。

1 lncRNA

lncRNA為長度超過200個核苷酸的ncRNA[4]，通常情況下，lncRNA的表達(dá)水平較低，但呈現(xiàn)出較高的表達(dá)特異性。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA與組蛋白修飾[5]、染色質(zhì)修飾[6]、基因組印跡[5]等表觀遺傳過程有關(guān)。此外，lncRNA在轉(zhuǎn)錄水平可通過影響特定轉(zhuǎn)錄因子及聚合酶活性調(diào)節(jié)mRNA的生成[7]。lncRNA也可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控mRNA，包括剪接、加工、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯以及降解等過程[8]。lncRNA在轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平參與調(diào)節(jié)mRNA的表達(dá)，提示其在基因的表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。

2 ceRNA在卵巢癌中的研究

在卵巢癌相關(guān)的ceRNA網(wǎng)絡(luò)中，lncRNA作為ceRNA的研究最多，多數(shù)lncRNA在卵巢癌中表達(dá)失調(diào)，這表明lncRNA可作為卵巢癌早期診斷標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。

2.1 漿細(xì)胞瘤變體易位1（plasmacytoma variant translocation 1，PVT1） 其位于染色體8q24，Yang等[9]發(fā)現(xiàn)PVT1在卵巢癌中表達(dá)顯著上調(diào)，通過在線預(yù)測PVT1擁有miR-133的結(jié)合位點(diǎn)，PVT1通過結(jié)合miR-133a促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡。

2.2 肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（MALAT1） 其位于染色體11q10，在多數(shù)癌癥的形成和進(jìn)展中具有廣泛的功能。Tao等[10]發(fā)現(xiàn)MALAT1在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)，敲除MALAT1后卵巢癌細(xì)胞增殖能力減弱。在線預(yù)測其與miR-211可以直接結(jié)合，隨后證實(shí)miR-211可靶向多梳抑制復(fù)合體2的成員之一PHD指蛋白19（PHD finger protein 19，PHF19），Ghislin等[11]認(rèn)為沉默PHF19可抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖并提高細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的能力。在Tao等[10]的研究中，敲除miR-211后PHF19表達(dá)上調(diào)，癌細(xì)胞增殖和遷移能力增強(qiáng)。提示MALAT1/miR-211/PHF19軸在卵巢癌中參與調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖和進(jìn)展。

Hu等[12]發(fā)現(xiàn)MALAT1通過結(jié)合miR-200a調(diào)節(jié)泛素E3連接酶MARCH7和自噬相關(guān)蛋白ATG7的表達(dá)，MARCH7和ATG7在卵巢癌中過表達(dá)，在線預(yù)測到MARCH7和MALAT1與miR-200a上的結(jié)合位點(diǎn)相同，沉默MALAT1后MARCH7 mRNA和蛋白水平均降低，同時抑制miR-200a時，可以逆轉(zhuǎn)MARCH7 mRNA和蛋白水平的降低，表明在卵巢癌中MALAT1通過結(jié)合miR-200a促進(jìn)MARCH7表達(dá)而抑制細(xì)胞遷移和侵襲。此外，研究還發(fā)現(xiàn)ATG7表達(dá)水平與MARCH7表達(dá)有關(guān)，ATG7可作為miR-200a的ceRNA來調(diào)節(jié)MARCH7表達(dá)。MARCH7沉默可下調(diào)ATG7表達(dá)；而當(dāng)miR-200a沉默時，這種調(diào)節(jié)被逆轉(zhuǎn)。敲低ATG7明顯增強(qiáng)各種抗癌藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[13]。Hu等[12]通過下調(diào)ATG7或MARCH7的表達(dá)阻斷自噬從而抑制細(xì)胞遷移和侵襲，表明抑制自噬會減弱卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力。揭示lncRNA與mRNA均可以成為miR-200a的ceRNA，調(diào)控MARCH7的表達(dá)，構(gòu)成ceRNA網(wǎng)絡(luò)，在卵巢癌中影響癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。

2.3 Homeobox轉(zhuǎn)錄反義基因間RNA（homeobox transcript antisense intergenic RNA，HOTAIR）其位于染色體12q13.13，是來自HOXC基因座的轉(zhuǎn)錄本，已證明其促進(jìn)多種癌癥的惡化[14]。Chang等[15]發(fā)現(xiàn)HOTAIR在卵巢癌中高表達(dá)，并且促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和遷移。通過在線預(yù)測到與HOTAIR有相同結(jié)合位點(diǎn)的miR-206以及miRNA的靶基因細(xì)胞周期蛋白D1 （cyclin D1，CCND1） 和CCND2。CCND1和CCND2是人類常見的致癌基因，與腫瘤晚期分期和腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[16]。HOTAIR通過負(fù)調(diào)節(jié)miR-206增強(qiáng)CCND1和CCND2的表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和細(xì)胞周期進(jìn)程。

Zhang等[17]發(fā)現(xiàn)HOTAIR與卵巢癌不良預(yù)后有關(guān)，HOTAIR作為miR-373的ceRNA調(diào)節(jié)Rab22a的表達(dá)，促進(jìn)卵巢癌的惡性進(jìn)展。Rab22a是一種小的GTP酶，可募集Rab-5[18]，進(jìn)而通過整合素介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑進(jìn)一步增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞增殖能力。

2.4 結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物1（colon cancer-associated transcript 1，CCAT1） 其位于染色體8q24.21，首先發(fā)現(xiàn)其在結(jié)腸癌中表達(dá)上調(diào)[19]。Cao等[20]發(fā)現(xiàn)CCAT1在卵巢癌中過表達(dá)，通過靶向miR-152和miR-130b促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移、侵襲及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）進(jìn)程。Mu等[21]發(fā)現(xiàn)CCAT1可直接靶向miR-490-3p，增加轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor beta 1，TGF-β1） 表達(dá)水平，CCAT1通過miR-490-3p/TGF-βR1軸促進(jìn)TGF-β1誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT。因此，CCAT1在卵巢癌的演變過程中扮演重要角色，有望成為卵巢癌早期診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)。

2.5 ADAMTS9-AS2 其位于染色體3p14.1，Wang等[22]發(fā)現(xiàn)ADAMTS9-AS2在卵巢癌中表達(dá)顯著降低，可減弱卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲能力，抑制EMT過程和體內(nèi)腫瘤生長。通過在線預(yù)測，ADAMTS9-AS2可作為miR-182-5p的ceRNA。添加miR-182-5p類似物可減弱ADAMTS9-AS2過表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用；相反，添加miR-182-5p抑制劑可逆轉(zhuǎn)ADAMTS9-AS2敲低對卵巢癌細(xì)胞的促進(jìn)作用，ADAMTS9-AS2與miR-182-5p呈負(fù)相關(guān)。隨后通過預(yù)測，叉頭框轉(zhuǎn)錄因子2（forkhead box F2，F(xiàn)OXF2）為miR-182-5p的候選靶標(biāo)，并且發(fā)現(xiàn)ADAMTS9-AS2與FOXF2表達(dá)呈正相關(guān)，抑制FOXF2可以消除ADAMTS9-AS2對卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響。由此，ADAMTS9-AS2可通過調(diào)節(jié)miR-182-5p/FOXF2軸來減弱卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。

2.6 LINC00152 其位于染色體2p11.2，最初在肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)[23]。Chen等[24]發(fā)現(xiàn)LINC00152在卵巢癌中表達(dá)也上調(diào)，使用在線數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)miR-125b與LINC00152可以結(jié)合，并且髓樣細(xì)胞白血病1（myeloid cell leukemia-1，MCL-1）和LINC00152具有在miR-125b上相同的結(jié)合位點(diǎn)。MCL-1是BCL2家族的促細(xì)胞凋亡成員[25]，MCL-1功能的喪失是促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵。Chen等[24]發(fā)現(xiàn)敲低LINC00152后卵巢癌細(xì)胞凋亡增加，抑制卵巢癌細(xì)胞增殖和體內(nèi)腫瘤生長，并且MCL-1與LINC00152表達(dá)水平呈正相關(guān)，LINC00152過表達(dá)抑制miR-125b和MCL-1之間的直接結(jié)合，從而促進(jìn)MCL-1的表達(dá)，而LINC00152敲低則可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加。此外，研究還發(fā)現(xiàn)LINC00152的表達(dá)水平升高與卵巢癌患者的組織學(xué)分級、臨床分期和預(yù)后不良呈正相關(guān)。因此，在卵巢癌中LINC00152作為miR-125b的ceRNA調(diào)控MCL-1表達(dá)，進(jìn)而影響卵巢癌細(xì)胞內(nèi)的線粒體凋亡途徑。

2.7 核富集轉(zhuǎn)錄體1（Nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1） 其 位 于 染 色 體 11q13.1，Yong等[26]發(fā)現(xiàn)NEAT1在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲以及體內(nèi)腫瘤生長，應(yīng)用在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測到miR-506，NEAT1敲低后miR-506表達(dá)上調(diào)，并且對EMT具有顯著影響。NEAT1的敲減顯著削弱了卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，而抑制miR-506則阻斷了NEAT1敲減誘導(dǎo)的作用。此外，抑制miR-506可明顯增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲能力，并且促進(jìn)EMT關(guān)鍵分子蛋白鋅指E盒結(jié)合同源盒蛋白1（zinc finger E-box binding homeobox 1，ZEB1）、波形蛋白（vimentin）和 Snail家族鋅指蛋白2（snail family transcriptional repressor 2，Snail2）的表達(dá)。這些結(jié)果表明NEAT1通過作為miR-506的ceRNA，調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和EMT。

Ding等[27]也發(fā)現(xiàn)NEAT1在卵巢癌中過表達(dá)，可通過增加S期細(xì)胞比例和抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡來促進(jìn)增殖，同樣應(yīng)用在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測NEAT1的靶標(biāo)，其與miR-34a-5p可直接相互作用，另外，預(yù)測BCL2為miR-34a-5p的靶標(biāo)，NEAT1敲低抑制BCL2表達(dá)，而加入miR-34a-5p抑制劑顯著減弱NEAT1敲低對BCL2表達(dá)的抑制作用。

Liu等[28]發(fā)現(xiàn)抑制NEAT1可抑制卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移相關(guān)基因Rho相關(guān)蛋白激酶1（Rho associated coiled-coil containing protein kinase 1，ROCK1） 的表達(dá)。Rho和ROCK1與腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲有關(guān)[29]，使用在線數(shù)據(jù)庫分析，NEAT1和ROCK1分別在其3′-非翻譯區(qū)（3′-untranslated region，3′-UTR）與miR-382-3p結(jié)合，并且共享相同的結(jié)合位點(diǎn)。NEAT1和miR-382-3p兩者可互相調(diào)節(jié)[28]。NEAT1的升高和miR-382-3p的抑制促進(jìn)ROCK1的表達(dá)及其介導(dǎo)的遷移和侵襲。此外，過表達(dá)NEAT1對ROCK1的促進(jìn)作用可被miR-382-3p類似物逆轉(zhuǎn)。該研究認(rèn)為NEAT1/miR-382-3p/ROCK1軸可能是治療卵巢癌的潛在靶點(diǎn)。

2.8 在腎細(xì)胞癌發(fā)生舒尼替尼耐藥時被激活的lncRNA（activated in RCC with sunitinib resistance，lncARSR） 其位于染色體9q82，Shu等[30]發(fā)現(xiàn)在卵巢癌中l(wèi)ncARSR表達(dá)上調(diào)，并且與FIGO分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和存活率低有關(guān)。lncARSR與ZEB1和ZEB2共享miR-200s反應(yīng)元件，lncARSR的過表達(dá)增加ZEB1和ZEB2的表達(dá)并誘導(dǎo)EMT，表明lncARSR作為miR-200s的ceRNA，促進(jìn)ZEB1和ZEB2的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的侵襲能力。

2.9 結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物2（colon cancer-associated transcript 2，CCAT2） 其位于染色體8q24.21，最初在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已被證實(shí)在多種腫瘤中發(fā)揮癌基因的作用[31]。Hua等[32]發(fā)現(xiàn)CCAT2在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)，在線預(yù)測miR-424在3′-UTR處與CCAT2可以結(jié)合，miR-424與CCAT2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，在卵巢癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)，CCAT2上調(diào)與卵巢癌細(xì)胞的增殖、抑制癌細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。此外，添加miR-424抑制劑可逆轉(zhuǎn)由CCAT2敲低誘導(dǎo)的腫瘤抑制。這表明CCAT2可充當(dāng)miR-424的ceRNA，以調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞的增殖與凋亡。

3 結(jié)語

CeRNA網(wǎng)絡(luò)為一個復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，研究lncRNA在其中的作用有利于卵巢癌的診斷和治療，對全面了解卵巢癌發(fā)生機(jī)制有很大的幫助。LncRNA在癌癥中的研究越來越多，除了作為癌癥治療的靶點(diǎn)，也可以作為早期診斷分子。另有研究發(fā)現(xiàn)ceRNA網(wǎng)絡(luò)也存在于其他疾病中，如在特發(fā)性肺纖維化的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，lncRNA lnc-pcf可以通過靶向miR-344a-5p來調(diào)控map3k11，促進(jìn)活化的上皮細(xì)胞增殖，從而導(dǎo)致肺纖維化[33]。提示ceRNA網(wǎng)絡(luò)在機(jī)體的疾病進(jìn)展過程中扮演著不可替代的角色。但是ceRNA網(wǎng)絡(luò)目前仍處于假說階段，需要更多的證據(jù)來證明其存在。