李瑤 許璐 謝艷華等

[摘要] 目的 探究飛揚(yáng)腸胃炎膠囊及其主要成分對常見細(xì)菌的體外抗菌作用，探尋飛揚(yáng)腸胃炎膠囊的敏感菌株及主要抗菌成分。 方法 采用倍比稀釋測定飛揚(yáng)腸胃炎膠囊、缺藥味藥物、沒食子酸、鞣花酸、紫丁香苷的最小抑菌濃度（MIC）。 結(jié)果 飛揚(yáng)腸胃炎膠囊對金黃色葡萄球菌的抑制作用最顯著，MIC值為1.6 mg/mL;對福氏志賀菌和腸炎沙門菌的抑制作用顯著，MIC值為3.1 mg/mL;對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌（產(chǎn)腸毒素株）、傷寒沙門、鼠傷寒沙門的抑制作用較顯著，MIC值為6.3 mg/mL;對肺炎克雷伯菌的抑制作用極弱，MIC值為50.0 mg/mL;對白色念珠菌幾乎無抑制作用，MIC值>100.0 mg/mL;飛揚(yáng)腸胃炎膠囊對臨床菌包括大腸埃希菌、傷寒沙門菌、腸炎沙門菌、福氏志賀菌、變形桿菌均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，MIC值分別為6.3、6.3、3.1、3.1、12.5 mg/mL。 結(jié)論 飛揚(yáng)腸胃炎膠囊及主要成分沒食子酸、鞣花酸、紫丁香苷均具有較強(qiáng)的抑菌作用，敏感菌株為金黃色葡萄球菌、福氏志賀菌、腸炎沙門菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌（產(chǎn)腸毒素株）、傷寒沙門、鼠傷寒沙門和普通變形桿菌;飛揚(yáng)草、火炭母和救必應(yīng)均有一定的抗菌作用，其中救必應(yīng)的抗菌作用略優(yōu)于其他二味中藥，且救必應(yīng)中發(fā)揮抗菌作用的主要成分可能為紫丁香苷。

[關(guān)鍵詞] 飛揚(yáng)腸胃炎膠囊;最小抑菌濃度;抑菌作用

[中圖分類號] R285? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）02（a）-0026-04

[Abstract] Objective To explore the in vitro antimicrobial activity of Feiyang Changweiyan Capsules and its main components against common bacteria， and to explore the sensitive strains and main antimicrobial components of Feiyang Changweiyan Capsules. Methods Minimum inhibitory concentration （MIC） of Feiyang Changweiyan Capsules， drug-deficient drugs， gallic acid， ellagic acid and syringin were determined by multiple dilution method. Results Feiyang Changweiyan Capsules had the most significant inhibitory effect on Staphylococcus aureus with MIC value of 1.6 mg/mL， it had significant inhibitory effect on Shigella flexneri and Salmonella enteritidis with MIC value of 3.1 mg/mL， and it had significant inhibitory effect on Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa， Escherichia coli （enterotoxin producing strain）， Salmonella typhimurium and Salmonella typhimurium with MIC value of 6.3 mg/mL. The MIC value was 50.0 mg/mL for Klebsiella pneumoniae， almost no inhibition for Candida albicans， MIC value was more than 100.0 mg/mL; Feiyang Changweiyan Capsules showed strong inhibition for clinical bacteria including Escherichia coli， Salmonella typhi， Salmonella enteritidis， Shigella flexneri and Proteus vulgaris， MIC values were 6.3， 6.3， 3.1， 3.1 and 12.5 mg/mL， respectively. Conclusion Feiyang Changweiyan Capsules and its main components， gallic acid， ellagic acid and syringin， have strong antibacterial activity. The sensitive strains are Staphylococcus aureus， Shigella flexneri， Salmonella enteritidis， Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa， Escherichia coli （enterotoxin-producing strains）， Salmonella typhimurium， Salmonella typhimurium and Proteus vulgaris. Euphorbia hirta L.， Polygonum chinense L. and Ilex rotunda thunb. all have certain antibacterial activity， among which the antimicrobial effect of Ilex rotunda thunb. is slightly better than that of other two traditional Chinese medicines， and the main component of the antibacterial activity of Ilex rotunda thunb may be syringin.

[Key words] Feiyang Changweiyan Capsules; Minimum inhibitory concentration; Antibacterial activity

飛揚(yáng)腸胃炎膠囊（FYC）由飛揚(yáng)草（Euphorbia hirta L.）、火炭母（Polygonum Chinense L.）、救必應(yīng)（Ilex rotunda Thunb.）組成，具有瀉火解毒，除濕止痢的功效，臨床常用于急、慢性腸胃炎，細(xì)菌性痢疾的治療[1]。飛揚(yáng)草、火炭母、救必應(yīng)提取物有一定的抗菌作用[2-6]。FYC對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌有良好的抑制作用[7]。為進(jìn)一步尋找FYC的敏感菌株及主要抗菌成分，選擇沒食子酸（gallic acid，GA）、鞣花酸（ellagic acid，EA）和紫丁香苷（syringin，SY）評價FYC及其主要成分的體外抗菌作用，為FYC的二次開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器

HPsafe-1200LC型生物安全柜（上海力申科學(xué)儀器有限公司）、HZP-250型全溫振蕩培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、YXQ-LS-50S-Ⅱ立式壓力蒸汽滅菌器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）、DW-86L338型立式超低溫保存箱（青島海爾特種電器有限公司）。

1.2 試藥

MH營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物有限公司，批號：2017/12/29）、LB肉湯培養(yǎng)基（美國Sigma公司）、飛揚(yáng)腸胃炎膠囊（陜西君碧莎制藥有限公司;批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z20080523）、缺飛揚(yáng)草粉末（AEH）、缺火炭母粉末（APC）、缺救必應(yīng)粉末（AIT）均購自陜西君碧莎制藥有限公司、沒食子酸（純度99.96%，批號：PRF7091942）、鞣花酸（純度98.8%，批號：PRF7101305）、紫丁香苷（純度98.5%，批號：PRF1 6012001）均購自成都普瑞法有限公司、喜炎平注射液（XYP，江西青峰藥業(yè)有限公司;批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z20026249）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

幽門螺桿菌（Hpy）ATCC43504、金黃色葡萄球菌（Sau）ATCC29213、大腸埃希菌（Eco）ATCC25922、銅綠假單孢菌（Pae）ATCC27853、大腸埃希菌（Eco）CMCC44813（產(chǎn)腸毒素株）、福氏志賀菌（Sfl）CMCC51285、傷寒沙門菌（Sty）CMCC50319、鼠傷寒沙門菌（Ses）CMCC50220、腸炎沙門菌（Sen）CMCC50040、變形桿菌（Pvu）CMCC49027、肺炎克雷伯菌（Kpn）CMCC46117、白色假絲酵母菌（Cal）CMCC85021，以上實(shí)驗(yàn)菌株由中國科學(xué)院武漢病毒研究所提供。

1.4 臨床分離菌株

大腸埃希菌80株（EC001-EC80）、傷寒沙門菌30株（TY001-TY030）、腸炎沙門菌30株（ET001-ET030）、福氏志賀菌20株（SY001-SY020）、肺炎克雷伯菌50株（KE001-KE050）、變形桿菌50株（PR001-PR050），均由中國科學(xué)院武漢病毒研究所提供。

1.5 供試藥液配制

AEH、APC、AIT為FYC在原方上分別去掉飛揚(yáng)草、火炭母、救必應(yīng)，按照FYC的制備工藝提取、制粒所得。將FYC、AEH、APC、AIT粉末用無菌生理鹽水溶解為濃度200.0 mg/mL的原藥液;GA、EA、SY、GA+EA、GA+SY、EA+SY、GA+EA+SY分別溶解為濃度20.0 mg/mL的原藥液;XYP稀釋為200.0 mg/mL的原藥液。

1.6 各試藥對標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床菌株的最小抑菌濃度（MIC）測定

參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）推薦的二倍稀釋法測定各試藥的MIC值[8-9]。將試驗(yàn)菌株接種于MH肉湯，置37℃培養(yǎng)箱24 h，用肉湯將菌液稀釋為108 CFU/mL備用。各試藥以原藥液進(jìn)行二倍梯度稀釋，依次加入96孔板中，200 μL/孔，混勻后各孔加入108 CFU/mL的試驗(yàn)菌液1 μL，4℃培養(yǎng)12 h后，轉(zhuǎn)37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，肉眼觀察結(jié)果，以無細(xì)菌生長（澄清）孔對應(yīng)的最小藥物濃度為該藥物的MIC。

2 結(jié)果

2.1 飛揚(yáng)腸胃炎膠囊及不同藥味組合的抗菌作用

本研究選擇12種標(biāo)準(zhǔn)菌和6種臨床菌，分別測定FYC及缺少藥味藥物對所選菌的MIC值，結(jié)果見表1～2。FYC對標(biāo)準(zhǔn)菌中的Sau、Eco、Pae、Eco（產(chǎn)腸毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen、Pvu有很強(qiáng)的抑制作用，對Hpy和Kpn的抑制作用較弱，而對Cal無抑制作用。與FYC比較，發(fā)現(xiàn)AEH和APC對Sau、Eco、Pae的抑制作用降低，其MIC值均升高1～2倍;AEH和APC對Sty的抑制作用有所提高;與FYC比較，AIT對Hpy、Sau、Eco、Eco（產(chǎn)腸毒素株）、Sfl、Sen、Pvu、Kpn的抑制均減弱，MIC值為FYC的兩倍。

FYC對所選的6種臨床菌株均有一定的抑制作用，其中除對Kpn抑制作用較弱以外，對其余5種臨床菌有很強(qiáng)的抑制作用。與FYC比較，AEH對Kpn抑制作用降低;APC對Eco抑制作用提高，而對Sen抑制作用降低;AIT對Eco、Sty、Sen、Sfl、Kpn抑制均降低。見表2。

2.2 飛揚(yáng)腸胃炎膠囊及其主要成分的抗菌作用

GA、EA、SY對Sau、Eco、Pae、Eco（產(chǎn)腸毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen、Pvu有很強(qiáng)的抑制作用。GA、EA對Hpy和Kpn抑制作用較弱，與GA、EA比較，SY對Hpy和Kpn抑制作用稍強(qiáng)。GA和EA對Cal無抑制作用，SY對Cal有微弱的抑制作用。3個成分配伍后，GA+EA、GA+SY、EA+SY對Hpy、Kpn和Cal抑制作用增強(qiáng)，對其他菌抑制作用減弱，GA+EA+SY組對Sau、Eco、Eco（產(chǎn)腸毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen有很強(qiáng)的抑制作用，其抗菌作用及敏感菌株與FYC具有一致性。見表3。

GA、EA和SY對6種臨床菌表現(xiàn)出一定的抑制作用，其中GA和EA對Eco、Sty、Sen、Sfl的抑制作用最強(qiáng)，對Pvu的抑制作用較強(qiáng)，對Kpn的抑制作用較弱;SY對Eco、Sty、Sen、Sfl、Pvu的抑制作用最強(qiáng)，對Kpn的抑制作用稍弱。與GA、EA、SY比較，GA+EA和EA+SY組對6株臨床菌的抑制作用均減弱，GA+EA+SY組對6株菌的抑制作用與FYC的抑制作用具有一致性。見表4。

3 討論

微生物感染是很多疾病的誘發(fā)因素，如流感、腸胃炎、痢疾、心肌炎、婦科炎癥、肺炎等[10-14]。清除病原微生物是治療許多疾病的關(guān)鍵。目前主要采用抗生素來治療微生物感染相關(guān)疾病，但濫用抗生素易造成大量耐藥菌出現(xiàn)，這對抗生素的更新迭代提出了更高要求[15-16]。許多中藥提取物都具有良好的抗菌作用，且不易產(chǎn)生耐藥作用，從中藥中開發(fā)抗菌新藥已成為近年來的研究熱點(diǎn)。研究表明[17-21]，腸胃炎和細(xì)菌性痢疾的主要致病菌包括大腸埃希菌、傷寒沙門菌、腸炎沙門菌等。

體外抑菌實(shí)驗(yàn)方法分為試管稀釋法、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法和擴(kuò)散法。前三種方法適用于測定藥物對目標(biāo)菌的MIC值，通過比較MIC值的大小來評價藥物的抗菌作用強(qiáng)弱，MIC值越大，表明藥物的抗菌作用越弱;擴(kuò)散法包括紙片法、杯碟法和挖洞法，原理均是通過測定某一藥物在確定的濃度下對目標(biāo)菌的抑菌圈直徑來評價其抗菌作用，通常抑菌圈直徑越大，藥物抑菌效果越強(qiáng)[22]。

采用倍比稀釋法測定FYC及缺藥味藥物對12種標(biāo)準(zhǔn)菌和6種臨床菌的MIC值，發(fā)現(xiàn)FYC對標(biāo)準(zhǔn)菌Sau、Eco、Pae、Eco（產(chǎn)腸毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen和臨床菌Eco、Sty、Sen、Sfl有顯著的抑制作用，而對于Kpn抑制作用很弱，對Cal幾乎無抑制作用;缺藥味后的各藥物敏感菌株與FYC表現(xiàn)出一致性，但對部分菌的抑菌濃度升高1～2倍，其中AIT抑菌作用減弱最顯著。本研究繼續(xù)測定了GA、EA、SY的抗菌作用，發(fā)現(xiàn)GA、EA和SY與FYC的敏感菌株具有一致性，且救必應(yīng)中的SY抗菌作用優(yōu)于GA和EA，這證實(shí)了FYC中救必應(yīng)的抗菌作用略優(yōu)于飛揚(yáng)草和火炭母的猜想。3個主要成分配伍后，敏感菌株沒有發(fā)生變化，各組對Hpy、Cal的抑菌作用較主要成分單獨(dú)應(yīng)用時均增強(qiáng)，但對其他菌抑制作用無顯著變化，部分組對細(xì)菌的抑制作用減弱，這可能與3個藥物配伍后降低了單味藥物劑量有關(guān)，這也說明中藥組方是在君臣佐使的理論指導(dǎo)下優(yōu)選出的最佳配伍比例，而在進(jìn)行主要成分組合時也應(yīng)尋找主要成分的最佳配比關(guān)系。

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（收稿日期：2018-04-13? 本文編輯：王? ?蕾）