張海燕， 季慕寅， 張冬冬， 王巨龍， 朱廣雙， 楊艷麗

(1.蕪湖職業(yè)技術學院 生物工程學院，安徽 蕪湖 241003；2.蕪湖市畜牧獸醫(yī)局，安徽 蕪湖 241003)

隨著安徽蕪湖地區(qū)的畜牧業(yè)發(fā)展，當?shù)刎i的存欄總量逐年上升，但豬的傳染病也越來越多，限制當?shù)仞B(yǎng)豬業(yè)可持續(xù)發(fā)展。其中，豬瘟(Classical swine fever, CSF)、豬口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)和高致病性豬藍耳病(High pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HPPRRS)是危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的病毒性傳染病，屬于國家非常重視的一類傳染病[1]，實踐證明，疫苗免疫接種是防控病毒性傳染病的有效手段，在使動物對某種病原產(chǎn)生抵抗力的同時也為疫病的最終控制或消滅打下基礎?？贵w水平是反映豬群免疫狀態(tài)或感染狀態(tài)的重要指標，國家對于實施疫苗免疫要求的指標是抗體陽性率≥70%[2]。為切實掌握目前蕪湖地區(qū)豬場豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病免疫抗體水平，在蕪湖市畜牧獸醫(yī)局和正大集團合作支持下，于2013～2016年期間針對蕪湖市8個縣(區(qū))的部分規(guī)模豬場及散養(yǎng)戶進行血樣抽檢，以掌握蕪湖地區(qū)相關疫病的抗體水平分布情況，為有效防控相關動物疫病提供了重要的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 待檢血清 2013年5月至2016年11月，由蕪湖市畜牧獸醫(yī)局動物疫病監(jiān)測站和正大集團蕪湖有限公司派專人抽檢，每年2次，從蕪湖地區(qū)豬場的豬瘟、豬口蹄疫和高致病性豬藍耳病免疫豬群(免疫程序分別按照國家相關規(guī)定進行)采集血液，按照常規(guī)方法從前腔靜脈或耳靜脈采血5 mL左右，實驗室統(tǒng)一收集，將采好的血樣呈45°～60°斜放于4 ℃冰箱，放置1 h，然后用低速離心機離心3～5 min，轉速為2 500～3 000 r/min，分離的血清-20 ℃保存待測[3]，共制備血清樣本1 038份。

1.1.2 免疫情況和疫苗類型 規(guī)?；i場一年四季能夠按固定的免疫程序注射疫苗，其中，對豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病3種疫病的免疫程序(表1)。

1.1.3 主要儀器 MK3酶標儀(賽默飛世爾有限公司) ELx50洗板機(伯騰儀器有限公司)；5810R離心機、100 μL 和300 μL 8道移液器、10 μL和20 μL的單道移液器(艾本德有限公司)，生化培養(yǎng)箱(常州國立有限公司)；超凈工作臺(蘇州凈化有限公司)；高壓蒸汽滅菌器(上海申安有限公司)，數(shù)字恒溫箱(DHP-9160B型)(上海瑯玗有限公司)；MK2微量振蕩器(江蘇姜堰有限公司)，海爾冰箱。

1.1.4 主要試劑 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病抗體檢測試劑盒均為深圳康百得生物科技有限公司生產(chǎn)的 ELISA 抗體檢測試劑盒，所有試劑盒均在有效期內，置于4 ℃冰箱保存。

表1 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病免疫程序

1.2 試驗方法

1.2.1 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病抗體檢測 采用間接ELISA法，按照試劑盒說明進行：(1)洗滌液配制；(2)樣品和對照稀釋；(3)操作步驟：抗原抗體孵育30 min，洗板3次。

1.2.2 結果判定 豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測試劑盒有效性判定：陰性對照孔OD值≤0.15(若大于0.15則試驗無效)；陽性對照孔OD值≥0.50(若小于0.50則試驗無效)。

豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測試劑盒：

Cov-off值(COV)=陰性對照平均OD值×2.1(陰性對照孔OD值<0.08，按0.08計);

樣品OD值≥COV，判為豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病病毒抗體陽性；

樣品OD值

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 對不同分組數(shù)據(jù)間的差異顯著性進行檢驗比較。

2 結果與分析

2.1 年度統(tǒng)計

2013年5月至2016年11月，共檢測豬瘟(豬瘟病毒，CSFV)、豬口蹄O型口蹄疫病毒，O-FMDV)和豬藍耳病(豬繁殖與呼吸綜合癥病毒，PRRSV)免疫血樣1 038份，其中，PRRS抗體陽性率明顯低于國家免疫要求，CSFV和FMDV抗體陽性率符合國家免疫要求(表2)。

表2 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率年度分布

注：同一列數(shù)據(jù)中有相同字母者，表示組間差異不顯著；無相同字母者，表示組間差異顯著；其中小寫字母者表示差異顯著

(P<0.05)，大寫字母表示差異極顯著 (P<0.01)，下同 。

統(tǒng)計年份中豬瘟免疫血樣共計1 038份，豬瘟病毒抗體陽性率表現(xiàn)為89.2%～96.1%，總體為91.9%免疫效果良好，均滿足國家免疫要求，年度間結果差異顯著(P<0.05)；豬O型口蹄疫抗體陽性率表現(xiàn)為76.9%～93.6%，總體為83.9%，均滿足國家免疫要求，年度間結果差異極顯著(P<0.01)，2013年5月份～2014年11月，豬O型口蹄疫抗體陽性率為78.0%，2014年5月份～2015年11月份，豬O型口蹄疫抗體陽性率為高達93.6%，而2015年5月份～2016年11月份，豬O型口蹄疫抗體陽性率又降為76.9%； 高致病性豬藍耳病抗體陽性率為57.9%～76.3%，總體低于國家免疫要求僅為65.1%，年度間結果差異無統(tǒng)計學意義，2014年5月份～2016年11月份，高致病性豬藍耳病抗體陽性率分別為57.9%、66.4%，均低于國家免疫要求標準。

2.2 區(qū)域統(tǒng)計

2013年5月至2016年11月期間，根據(jù)蕪湖地區(qū)四區(qū)四縣(蕪湖縣、繁昌縣、無為縣、南陵縣、鏡湖區(qū)、鳩江區(qū)、三山區(qū)和弋江區(qū))采集的血樣，按照區(qū)域進行統(tǒng)計對比分析(表3)。

表3 豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率區(qū)域分布

2013～2016年蕪湖地區(qū)不同區(qū)域的豬瘟病毒抗體陽性率表現(xiàn)為87.1%～98.7%，總體為91.9%，各地區(qū)均滿足國家免疫要求, 區(qū)域間結果差異極顯著(P<0.01)；豬O型口蹄疫抗體陽性率為62.5%～100%，總體為83.9%，區(qū)域間結果差異極顯著(P<0.01)，統(tǒng)計結果顯示，三山區(qū)豬O型口蹄疫抗體陽性率高達100%，而繁昌縣豬O型口蹄疫抗體陽性率不合格，僅為62.5%，其它地區(qū)均達到國家免疫要求；檢測發(fā)現(xiàn)，高致病性豬藍耳病總體抗體陽性率為65.1%，低于國家免疫要求，其中南陵縣和無為縣檢測陽性率分別為86.7%和82.0%。達到國家免疫要求，其他區(qū)域均未達到國家免疫要求。

2.3 規(guī)模豬場和散養(yǎng)戶統(tǒng)計

按照血樣來源的養(yǎng)殖單位規(guī)模大小，劃分為規(guī)模化豬場(養(yǎng)殖規(guī)?！?50頭)和散養(yǎng)戶，按規(guī)模將血樣檢測結果對其進行對比分析(表4)。

表4 不同規(guī)模養(yǎng)殖單位的豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病抗體陽性率

由表4可見，2013～2016年共采集規(guī)模養(yǎng)豬場血樣940份，散養(yǎng)戶血樣98份，其中規(guī)模養(yǎng)豬場豬瘟抗體陽性率達到91.8%，散養(yǎng)戶豬瘟抗體陽性率高達92.8%，均達到國家免疫要求，不同規(guī)模養(yǎng)殖單位間結果具有統(tǒng)計學意義，無顯著差異(P>0.05)；規(guī)模養(yǎng)豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率為84.4%，散養(yǎng)戶豬O型口蹄疫抗體陽性率僅為79.6%，均達到國家免疫要求；規(guī)模養(yǎng)豬場高致病性豬藍耳病抗體陽性率為66.3%，散養(yǎng)戶高致病性豬藍耳病抗體陽性率為65.1%，均未達到國家免疫要求，不同規(guī)模養(yǎng)殖單位間結果無統(tǒng)計學意義。

3 結論與討論

豬瘟最早起源于美國，繼而在法國、德國及南美等地暴發(fā)，我國豬瘟流行呈慢性、非典型特征，引起豬體免疫抑制，影響母豬的繁殖性能，因此，加重豬場的經(jīng)濟損失[4]。在我國，免疫接種仍是防制豬瘟的重要措施，疫苗對預防豬瘟起重大作用[5]。研究表明自2013～2016年來，對蕪湖四區(qū)四縣規(guī)模養(yǎng)殖場豬瘟抗體陽性率檢測，檢測結果顯示，豬瘟抗體陽性率91.9%，免疫效果較好，總體水平達到國家免疫要求，同時也發(fā)現(xiàn)蕪湖地區(qū)豬瘟抗體陽性率有逐漸下滑的趨勢，暗示豬瘟病毒潛伏豬群中的機率大大增加，需引起相關從業(yè)者的重視，不能放松警惕，應當根據(jù)免疫抗體消長規(guī)律，實現(xiàn)抗體水平監(jiān)測常態(tài)化[6]。

豬口蹄疫是一種古老的疾病，幾乎世界上所有的國家和地區(qū)歷史上都曾經(jīng)發(fā)生過口蹄疫。該病能在全球大規(guī)模流行，而且該病傳播快，發(fā)病高，傳播途徑廣，病原復雜多變，發(fā)病率高達100%，被世界動物衛(wèi)生組織規(guī)定為危害最嚴重的動物疫病。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2017年提出，為最大程度地做好動物疫病防控，節(jié)約國家財政資源，只把豬口蹄疫列為國家強制免疫計劃病種，而豬瘟和高致病性豬藍耳病推出國家強制免疫計劃，各地按照國家防治指導意見執(zhí)行[7]。近年來豬口蹄疫在我省范圍內發(fā)病率較高，而研究表明2013～2016年中蕪湖地區(qū)豬口蹄疫抗體陽性率平均達到83.9%，達到國家免疫要求，僅有繁昌縣豬口蹄疫抗體陽性率為62.5%，未達到國家規(guī)定的70%標準。豬口蹄疫病毒一旦感染發(fā)病，會在豬群中迅速傳染，造成地區(qū)內口蹄疫疫病集中爆發(fā)。繁昌縣抗體陽性率過低極易引發(fā)疫病爆發(fā)。因此，該地區(qū)應做好衛(wèi)生防疫工作，疑似口蹄疫及早隔離及早治療，防止感染從豬群場內流出，同時制定科學地免疫程序，提高豬群的免疫水平。

高致病性豬藍耳病，也稱為豬繁殖和呼吸綜合癥，自1987年于美國發(fā)現(xiàn)以來，繼而在全世界蔓延而成為世界養(yǎng)豬業(yè)的頭號威脅。目前，我國PRRS呈現(xiàn)局部散點狀分布，但也面臨著新型HP-PRRSV病毒變異株的威脅，對于新建的養(yǎng)豬場危害尤為嚴重，患病生豬和帶有HP-PRRSV陽性病毒豬為其主要傳染源[8]。試驗研究顯示蕪湖市2013～2016年間，檢測蕪湖市地區(qū)高致病性豬藍耳病抗體陽性率未到達國家標準，其中鏡湖區(qū)陽性率最低，僅為45.1%，說明該地區(qū)免疫接種失敗。同時發(fā)現(xiàn)弋江區(qū)、鳩江區(qū)、三山區(qū)、蕪湖縣、繁昌縣高致病性豬藍耳病抗體陽性水平低于國家標準，分析原因可能與豬場的免疫程序、免疫操作和免疫頻率有關。因此，有必要加強制免疫接種，改善飼養(yǎng)條件，制定有效的高致病性豬藍耳病疫苗接種計劃，完善場內消毒措施，提高豬群的免疫力。

隨著養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)規(guī)模化、集約化和標準化程度的不斷提高，所面臨的疫病壓力也日益增大。豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病均是由病毒引起的高度傳染性疾病，在集約化養(yǎng)殖模式中，其高致病、高度傳染的特性造成母豬流產(chǎn)率、死胎和胎弱率極高，危害性極大[9]。豬場除了做好豬群的飼養(yǎng)管理和完善生物安全體系外，尤其要重視豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病等疫病的免疫控制[10]，基于抗體水平的監(jiān)測數(shù)據(jù)，結合抗體監(jiān)測結果，制定合理的免疫程序，達到減少重大疫病的發(fā)生的目的。

免疫接種疫苗是預防畜禽傳染病的有力措施，但疫苗除了自身質量原因外，科學制定和嚴格執(zhí)行免疫程序規(guī)定的接種方式、時間、次數(shù)、接種量、操作方式、藥物影響等，也是免疫成敗的關鍵[11]。抗體檢測可以評價疫苗免疫效果，群體免疫的合格率是一個重要指標[12]。本研究通過血清學調查，統(tǒng)計了近年來的蕪湖地區(qū)豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病的抗體陽性率，并分年度與區(qū)域結果進行數(shù)據(jù)分析，基本掌握了蕪湖地區(qū)常見豬病的抗體水平分布情況。以此為制定疫病防治措施，開展強制免疫工作，實現(xiàn)免疫抗體水平監(jiān)測等提供科學有力的支持。