張穎 雷潔 許靜

乳腺癌是女性發(fā)生率較高的惡性腫瘤之一，近年其發(fā)生率呈直線上升趨勢，給女性的身心健康帶來了很大影響[1]。臨床上近年研究的熱點問題為乳腺癌的轉(zhuǎn)移、侵襲分子調(diào)控機制。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）是近年臨床上新發(fā)現(xiàn)的缺氧應(yīng)答調(diào)控因子，它在人體以及哺乳動物體內(nèi)廣泛存在，在維持全身氧穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞穩(wěn)定性方面發(fā)揮了非常重要的作用，是促使腫瘤發(fā)生的中間站，具有耐藥、抗凋亡、細(xì)胞增殖、無氧糖酵解、促使腫瘤血管生成的作用，在缺氧誘導(dǎo)基因中有一定的調(diào)控作用，HIF-1α含量升高是癌癥的不良預(yù)后因素[2]。生存素（inhibitor of apoptosis protein，Survivin）是凋亡抑制蛋白（IAPs）的一種，是近幾年臨床上新發(fā)現(xiàn)的凋亡因子，它具有抑制細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分裂分化作用，在促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生、腫瘤內(nèi)部血管生成方面發(fā)揮關(guān)鍵性作用[3]。在很多惡性腫瘤中HIF-1α、Survivin都存在過表達(dá)的情況，它們與腫瘤的發(fā)生緊密相關(guān)[4]。我院在乳腺癌細(xì)胞中HIF-1α與Survivin表達(dá)的相關(guān)性研究期間，發(fā)現(xiàn)HIF-1α與Survivin在乳腺癌的發(fā)生過程中存在很大聯(lián)系，通過檢測HIF-1α與Survivin的表達(dá)水平可以判斷患者的病情發(fā)展程度，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2017年5月～2018年8月收治的乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌患者130例，對所有患者的HIF-1α、Survivin含量進(jìn)行檢測。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5，6]，且通過檢查確診為乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變、乳腺癌；②臨床資料完整者；③隨訪資料完整者；④所有患者均知曉同意此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他腫瘤者；②臨床資料不完整者；③隨訪資料不完整者；④精神異常者。130例患者，年齡 23～78 歲，平均（50.3±3.1）歲；其中腫瘤直徑≤2.0cm者49例，2.0～5.0cm者56例，＞5.0cm者25例；組織學(xué)：Ⅰ級24例，Ⅱ級67例，Ⅲ級39例；其中遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移18例，＞3個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，1～3個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，腋窩淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移50例；分期：Ⅰ期25例，Ⅱ期41例，Ⅲ期23例，Ⅳ期41例；其中乳腺普通導(dǎo)管增生（UDH）27例，乳腺非典型導(dǎo)管增生（ADH）29例，乳腺導(dǎo)管原位癌（DCIS）35例，浸潤性乳腺癌（IDC）39例。所有患者一般資料存在可比性（P＞0.05），研究獲得了我院倫理委員會審核與批準(zhǔn)。

1.2 方法HIF-1α、Survivin含量檢測：所應(yīng)用的試劑由福州邁新生物公司提供，應(yīng)用免疫組織化學(xué)（Ultra Sensitive TMS-P）法對 DAB 進(jìn)行顯色，試劑盒為S-P，對常規(guī)的3～4μm切片進(jìn)行脫蠟、水化，應(yīng)用3%的雙氧水對其進(jìn)行處理，修復(fù)EDTA[7]。設(shè)置陽性、陰性對照組，陽性對照：已知的陽性切片，陰性對照：PBS代替一抗。后應(yīng)用高倍鏡觀察，對結(jié)果進(jìn)行判定，0分：陽性細(xì)胞數(shù)不超過5%；1分：陽性細(xì)胞數(shù)在6%～25%；2分：陽性細(xì)胞數(shù)在26%～50%；3分：陽性細(xì)胞數(shù)在51%～75%；4分：陽性細(xì)胞數(shù)超過75%。陽性強度判斷，1分：黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色；根據(jù)上述陽性細(xì)胞數(shù)分?jǐn)?shù)以及陽性強度判定分?jǐn)?shù)之和來判定陽性，兩者相加總分≥4分為陽性[8]。

1.3 觀察指標(biāo)①分析HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌不同組織中的表達(dá)情況。②分析HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的表達(dá)情況與臨床病理之間的關(guān)系。③分析HIF-1α與Survivin的表達(dá)相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0進(jìn)行分析，其中計數(shù)資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌不同組織中的表達(dá)情況HIF-1α、Survivin在乳腺浸潤性癌中的陽性表達(dá)率高于其他組織（P＜0.05），見表1。

2.2 HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的表達(dá)情況與臨床病理之間的關(guān)系HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的表達(dá)情況與患者的年齡、腫瘤大小無明顯關(guān)系（P＞0.05），腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)級別越高、腫瘤分期越高者HIF-1α、Survivin陽性率越高（P＜0.05），見表2。

2.3 HIF-1α與Survivin表達(dá)相關(guān)性分析在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中，HIF-1α與Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表1 HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌不同組織中的表達(dá)情況[n（%）]

表2 HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的表達(dá)情況與臨床病理之間的關(guān)系（例）

表3 HIF-1α與Survivin表達(dá)相關(guān)性

3 討論

乳腺癌是臨床上常見的女性惡性腫瘤之一，與其他國家相比，我國的乳腺癌發(fā)生率近年呈直線上升趨勢，且偏向于年輕化[9，10]。實體腫瘤中最常見的為缺氧，HIF-1α主要是腫瘤在缺氧條件下分泌而來，其表達(dá)情況可以反映腫瘤瞬間缺氧狀況[11]。腫瘤細(xì)胞發(fā)生缺氧后會刺激HIF-1α的表達(dá)，另外，腫瘤細(xì)胞中的某些抑癌基因、癌基因會被激活而促使HIF-1α的分泌，提高HIF-1α的水平[12]。HIF-1α被激活后可以對多種下游基因進(jìn)行調(diào)節(jié)，進(jìn)而會促使血管生成因子的增長繁殖，加快腫瘤發(fā)展。HIF-1α在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中也是過表達(dá)，過度表達(dá)對預(yù)后不利。生長素（Survivin）是臨床上近幾年發(fā)現(xiàn)的具有較強凋亡抑制作用的因子，在多種惡性腫瘤中它的表達(dá)水平比較異常，其作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂、生長、抑制細(xì)胞凋亡等[13]。

抑癌基因失去活性、癌基因被激活等都會使HIF-1α的水平顯著增高，使活性顯著增強。HIF-1α在缺氧誘導(dǎo)基因發(fā)揮作用的過程中起著非常重要的作用，HIF-1α可以對多種下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行調(diào)控。近幾年臨床上對HIF-1α與乳腺癌之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)在乳腺癌、腎癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌中HIF-1α陽性表達(dá)率較高，在很多癌前病變中也有一定的表達(dá)，但是在良性腫瘤中沒有HIF-1α的表達(dá)[14]。通過對乳腺癌患者的組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)實驗，可以觀察患者不同組織處HIF-1α、Survivin的表達(dá)情況。研究顯示，HIF-1α、Survivin在乳腺浸潤性癌中的陽性表達(dá)率高于其他組織（P＜0.05），隨著乳腺癌組織的惡化程度，HIF-1α、Survivin的表達(dá)情況也發(fā)生著變化，惡化程度越高，HIF-1α、Survivin含量就越高。因此，可以通過檢測患者體內(nèi)的HIF-1α、Survivin含量來判斷患者的病情變化。

乳腺癌對廣大女性的身心健康造成了很大影響，因此，盡早進(jìn)行診斷、實施治療對于改善患者預(yù)后非常重要。HIF-1主要是機體為了適應(yīng)缺氧應(yīng)激而分泌的因子，有α和β兩種形式，都是通過核轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，活性主要由HIF-1α因子的穩(wěn)定性與表達(dá)水平?jīng)Q定[15，16]。腫瘤在進(jìn)行生長、發(fā)展期間，HIF-1α因子會與其他的缺氧因子比如促紅細(xì)胞生成素（EPO）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等結(jié)合來促使腫瘤血管的生成，HIF-1α因子會與其他的缺氧因子結(jié)合，加快腫瘤的生長與發(fā)展進(jìn)程。HIF-1α含量與乳腺癌患者的雌激素水平之間存在一定的聯(lián)系，患者的雌激素水平越高，說明分子分型較好，治療后的效果也更好[17]。因此檢測乳腺癌患者的HIF-1α含量，有利于判斷患者預(yù)后、腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲情況、腫瘤生長發(fā)展?fàn)顩r等。另外，HIF-1α還可以激活乳腺癌耐藥蛋白（BRCP）基因的活性，使它在乳腺癌耐藥過程中發(fā)揮一定的作用。Survivin是一種IAPs家族的因子，它的作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、抑制細(xì)胞凋亡，其抑制細(xì)胞凋亡的作用非常強。另外，Survivin可以使腫瘤細(xì)胞失去凋亡監(jiān)測點的束縛，會使細(xì)胞發(fā)生異常生長與分裂，進(jìn)而使癌細(xì)胞加快生長繁殖進(jìn)程；同時，Survivin可以促進(jìn)淋巴管、腫瘤血管的生產(chǎn)，降低放化療對腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用。Survivin主要在胎兒生長發(fā)育過程中表達(dá)，在健康人體中的非增殖細(xì)胞內(nèi)不會表達(dá)。研究顯示，HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的表達(dá)情況與患者的年齡、腫瘤大小無明顯關(guān)系（P＞0.05），腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級高其表達(dá)陽性率較高（P＜0.05），這就說明，HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中的高表達(dá)可能與乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此，HIF-1α、Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中過度表達(dá)會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長繁殖，它們在促進(jìn)腫瘤發(fā)展進(jìn)程中起到了關(guān)鍵性作用。另外，細(xì)胞核中Survivin的表達(dá)水平可以反映乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌患者的總生存期，當(dāng)細(xì)胞核中Survivin的表達(dá)水平與胞質(zhì)中Survivin的表達(dá)水平比例超過5時，乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌患者的總生存期較高，細(xì)胞核中Survivin的表達(dá)水平與胞質(zhì)中Survivin的表達(dá)水平比例與患者的原癌基因人類表皮生長因子受體2（HER-2）陰性率、雌激素受體陽性率呈正相關(guān)[18]，這就說明，細(xì)胞核中Survivin的表達(dá)水平與胞質(zhì)中Survivin的表達(dá)水平比例越高，患者的原癌基因人類表皮生長因子受體2的陰性率就越高，雌激素受體陽性率就越高，這對患者的預(yù)后有積極的改善作用。

研究顯示，在乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌中，HIF-1α與Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），這說明，降低乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生病變及乳腺癌患者的HIF-1α表達(dá)水平，有利于降低Survivin表達(dá)水平，這利于改善患者預(yù)后。同時，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展期間，HIF-1α與Survivin會相互協(xié)同發(fā)生作用，因此，盡早對患者進(jìn)行檢查、診斷、治療，更有利于提高患者的生存質(zhì)量。在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中，最少會有2個基因被異常激活，從而才可以有效地促進(jìn)腫瘤生長、誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲等。

此次研究的不足：樣本量較小，所得到的結(jié)果可能存在一定的局限性，在今后的工作中，會不斷進(jìn)行深入的研究與分析，以便對本次結(jié)果進(jìn)行證實。

綜上所述，乳腺癌細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α與Survivin表達(dá)呈正相關(guān)，可以通過HIF-1α、Survivin在乳腺癌中的表達(dá)情況來判斷患者的病情進(jìn)展，進(jìn)而有利于為臨床治療提供一定的依據(jù)，有較高的臨床價值。