劉暢，王慶偉，羅振宇，連艷珍

1鶴壁市人民醫(yī)院泌尿外科，河南鶴壁458000；

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2泌尿外科，3病理科，4檢驗(yàn)科，鄭州450052

前列腺癌是男性常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，前列腺癌患者的生活質(zhì)量較差，生存時(shí)間較短，生命安全受到嚴(yán)重的威脅[1-2]。在前列腺癌的病理機(jī)制方面，細(xì)胞因子或者腫瘤相關(guān)蛋白能夠通過(guò)影響前列腺移行上皮細(xì)胞的異常增殖，參與前列腺癌的早期發(fā)生。細(xì)胞S相激酶相關(guān)蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，SKP2）表達(dá)水平的升高能夠通過(guò)干預(yù)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期，導(dǎo)致腫瘤的G1/S期細(xì)胞的比例上升，加劇腫瘤細(xì)胞的異常核DNA分裂，進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生[3]；kindlin-2蛋白是黏附分子蛋白成員，對(duì)腫瘤細(xì)胞的黏附和浸潤(rùn)能力具有促進(jìn)作用，能夠提高腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)深度和浸潤(rùn)范圍，加劇腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征的惡化[4]。本研究通過(guò)觀察前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2的表達(dá)水平，分析其與前列腺癌患者臨床特征的關(guān)系，旨在為臨床上對(duì)前列腺癌的臨床治療和病情評(píng)估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年7月至2018年3月鶴壁市人民醫(yī)院收治的70例前列腺癌患者作為研究對(duì)象。選取70例前列腺癌患者的前列腺癌組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[5]；經(jīng)前列腺穿刺或手術(shù)后病理學(xué)檢查確診；手術(shù)前未接受過(guò)放療、化療、免疫學(xué)治療或激素治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：前列腺癌復(fù)發(fā)；伴有其他部位的惡性腫瘤；伴有尿路結(jié)石、尿路感染。70例前列腺癌患者的年齡為54～79歲，平均年齡為（67.5±7.5）歲；T分期：T1期20例，T2期24例，T3期20例，T4期6例；N分期：N0期47例，N1期23例；M分期：M0期51例，M1期19例；血清前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）水平＞20 ng/ml 36例，≤20 ng/ml 34例；Gleason評(píng)分：2～6分46例，7分6例，≥8分18例。另選取同期在本院接受治療的70例前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織標(biāo)本。70例前列腺良性增生患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)診斷證實(shí)為前列腺良性增生；未接受內(nèi)分泌相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并尿路結(jié)石及感染。70例前列腺良性增生患者的年齡為50～79歲，平均年齡為（66.8±8.0）歲。兩組患者的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。全部患者及家屬均對(duì)本研究知情同意并自愿簽署知情同意書(shū)，且本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

石蠟包埋，連續(xù)性切片，厚度為3 μm，60℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）進(jìn)行抗原修復(fù)，加入 10 μl蒸餾水，加入 10%過(guò)氧化氫 5 μl，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌3次，每次3 min，加入濃度為1∶1000的kindlin-2、SKP2蛋白的單克隆抗體（購(gòu)自羅氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的kindlin-2、SKP2蛋白二抗（1∶1500稀釋?zhuān)?gòu)自羅氏公司），37℃孵育20 min，PBS洗滌3次，每次3 min；加入顯色劑，PBS沖洗和復(fù)染，脫水，在50倍顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)結(jié)果判定：kindlin-2蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，SKP2蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒狀。①根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分：0分為無(wú)色，1分為淡黃，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例11%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例51%～75%為3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例＞75%為4分。兩種積分相乘，總分＜3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織和前列腺良性增生組織中的kindlin- 2、SKP 2蛋白表達(dá)情況的比較

前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2、SKP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.833、19.899，P＜0.01）。（表1）

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表達(dá)情況

表1 兩種組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的表達(dá)情況[n（%）]

T分期為T(mén)3～T4期、N分期為N1期、Gleason評(píng)分為8～10分前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均高于T分期為T(mén)1～T2期、N分期為N0期、Gleason評(píng)分為2～7分的前列腺癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.941、5.373、4.641，P＜0.05）；不同M分期、PSA水平前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。T分期為T(mén)3～T4期、N分期為N1期、PSA水平＞20 ng/ml、Gleason評(píng)分為8～10分前列腺癌患者前列腺癌組織中SKP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均高于T分期為T(mén)1～T2期、N分期為N0期、PSA水平≤20 ng/ml、Gleason評(píng)分為2～7分的前列腺癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.936、4.759、4.613、8.426，P＜0.05）；不同M分期前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

3 討論

長(zhǎng)期的臨床隨訪觀察發(fā)現(xiàn)，相比于良性前列腺病變患者，前列腺癌患者的3年生存率或者5年生存率明顯下降，給予綜合性治療措施進(jìn)行治療后，患者的無(wú)進(jìn)展生存期仍然無(wú)明顯改善[7-10]。通過(guò)腫瘤生物學(xué)指標(biāo)評(píng)估前列腺癌患者的病情具有重要的意義，其能夠在指導(dǎo)臨床診療及評(píng)估預(yù)后方面發(fā)揮重要的作用。本研究對(duì)前列腺癌患者前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白表達(dá)情況的分析，能夠在揭示前列腺癌病情進(jìn)展機(jī)制的同時(shí)，為臨床上前列腺癌患者的病情評(píng)估提供參考。

表2 70例不同臨床特征前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin- 2、SKP 2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況

SKP2是細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白，其能夠影響腫瘤細(xì)胞的周期，提高腫瘤細(xì)胞快速跨越G0期的能力，從而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生。SKP2蛋白的絲氨酸和巰基結(jié)構(gòu)能夠促進(jìn)其對(duì)腫瘤細(xì)胞持續(xù)性自我增殖調(diào)控的作用。相關(guān)研究還認(rèn)為，SKP2能夠影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征，進(jìn)而參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[11]；kindlin-2是黏附蛋白相關(guān)因子，其能夠通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)深度的增加，并提高腫瘤細(xì)胞的變形能力，從而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生[12]。相關(guān)研究已經(jīng)探討了SKP2蛋白的表達(dá)與婦科惡性腫瘤的關(guān)系[13]，但是，對(duì)于前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白表達(dá)情況的分析不足。本研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌患者前列腺癌組織中kindlin-2、SKP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于前列腺良性增生患者的前列腺良性增生組織（P＜0.01），提示SKP2、kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要的作用。分析其基礎(chǔ)方面的原因，考慮與以下病理性改變有關(guān)[14-154]：①SKP2表達(dá)水平的升高能夠影響細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶的激活，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞G1/S期細(xì)胞的比例上升；②kindlin-2蛋白表達(dá)水平的升高能夠影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路的激活，提高前列腺上皮移行細(xì)胞異常裂變的風(fēng)險(xiǎn)。廖順鴻[16]發(fā)現(xiàn)，相比于良性前列腺組織，在前列腺癌患者中，SKP2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高；在合并明顯泌尿系統(tǒng)轉(zhuǎn)移的患者中，SKP2的陽(yáng)性表達(dá)率更高。通過(guò)探討SKP2、kindlin-2蛋白的表達(dá)情況與前列腺癌患者臨床特征的關(guān)系，可以發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚、N1期或者Gleason評(píng)分較高的患者中，kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率較高，提示kindlin-2蛋白的表達(dá)與前列腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，這主要是由于Kindlin-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的升高能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，增加浸潤(rùn)深度和擴(kuò)大浸潤(rùn)范圍，加劇臨床分期的進(jìn)展。同時(shí)，kindlin-2還能夠提高前列腺癌移行上皮細(xì)胞黏附淋巴結(jié)組織的能力，進(jìn)而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。另外，SKP2蛋白的表達(dá)情況可能與前列腺癌患者的TNM分期、PSA水平、Gleason評(píng)分有關(guān)；其中，在PSA水平較高的患者中，SKP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高，這主要是由于PSA水平越高，腫瘤細(xì)胞的增殖速度越快，SKP2蛋白的合成和釋放越明顯。

綜上所述，在前列腺癌患者的前列腺癌組織中，SKP2、kindlin-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯上升，同時(shí)，SKP2、kindlin-2蛋白的表達(dá)與前列腺癌患者的臨床特征密切相關(guān)。本研究的局限性在于未對(duì)SKP2、kindlin-2蛋白的表達(dá)情況與前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行探討，因此，后續(xù)研究將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步探討SKP2、kindlin-2蛋白在前列腺癌臨床診療過(guò)程中的應(yīng)用價(jià)值。