顧鑫　周曉瑩　趙玉龍　張旭東　李杰穎

摘要：香花槐對(duì)城市不良環(huán)境有抗性，抗病力強(qiáng)，是造林的優(yōu)良樹種。分別對(duì)香花槐外植體滅菌時(shí)間、外植體初代培養(yǎng)、外植體繼代培養(yǎng)進(jìn)行初步研究，結(jié)果表明：利用0.1%升汞進(jìn)行滅菌，在3.5～4.0 min最適宜；最佳初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為A6：MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+瓊脂6 g；最佳繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+瓊脂6 g。

關(guān)鍵詞：香花槐；組織培養(yǎng)；愈傷組織；激素；不定芽

中圖分類號(hào)：Q943 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2019）02-0025-03

香花槐（Robinia pseudoacacia CV.Idaho）為豆科刺槐屬刺槐變種，原產(chǎn)于西班牙、朝鮮，是近年來我國(guó)引進(jìn)的美化城市園林的理想珍稀樹種，具有保持水土、防風(fēng)固沙、改善生態(tài)環(huán)境的作用。香花槐為落葉喬木，株高10～12 m，樹干為褐色至灰褐色。葉互生，7～19片葉組成羽狀復(fù)葉，葉橢圓形至卵狀長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)3～6 cm，比刺槐葉大。葉片美觀對(duì)稱，深綠色有光澤，青翠碧綠。密生成總狀花序，作下垂?fàn)睢；ū患t色，有濃郁的芳香氣味，可同時(shí)盛開小紅花200～500 朵，花期長(zhǎng)。無莢果，不結(jié)種子。耐干旱瘠薄，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，酸性土、中性土及輕堿地均能生長(zhǎng)。主、側(cè)根發(fā)達(dá)，萌芽性強(qiáng)，生長(zhǎng)快，當(dāng)年可達(dá)2 m，翌年達(dá)3～4 m，開始開花。性耐寒，能抵抗零下25～28 ℃低溫，對(duì)城市不良環(huán)境有抗性，抗病力強(qiáng)，是造林的優(yōu)良樹種。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

當(dāng)香花槐植株發(fā)芽抽出枝條時(shí)，選擇生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無病蟲害、健壯的植株，取其粗壯帶有腋芽的枝條作為組織培養(yǎng)的外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 處理香花槐外植體 在香花槐外植體中選出粗壯且不帶病蟲害的枝條，用剪刀除去多余葉片，取其帶有3個(gè)腋芽、長(zhǎng)3～4 cm的莖段進(jìn)行處理。處理a：修剪合適的莖段裝到容器里，貼好標(biāo)簽，放到流水下沖洗30～60 min，然后拿到接種臺(tái)上；處理b：用無菌水沖洗2～3 遍，用75%酒精浸泡20～30 s，用無菌水沖洗3～4 遍，用無菌濾紙吸干多余水分；處理c：用0.1%升汞滅菌，用無菌水沖洗4～5 遍，備用。

1.2.2 香花槐外植體初代培養(yǎng) 將處理后相對(duì)無菌的香花槐外植體放至已用紫外燈照射20～30 min的無菌超凈工作臺(tái)上，再用經(jīng)加熱殺菌的工具把處理過的香花槐截成帶有1 個(gè)或2 個(gè)腋芽的莖段，插入初代培養(yǎng)基A1—A6中，見表1。標(biāo)上代號(hào)和接種日期，放置培養(yǎng)室中培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為24～26 ℃，光照14～16 h/d，光強(qiáng)1 000～3 000 lx，40 d后觀察腋芽生長(zhǎng)情況。

1.2.3 香花槐繼代培養(yǎng) 當(dāng)初代培養(yǎng)40 d、腋芽長(zhǎng)到2 cm以上時(shí)，將其切成0.5 cm的小段，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基B1—B6中培養(yǎng)30 d后，觀察生長(zhǎng)狀況。

1.2.4 生根培養(yǎng) 當(dāng)繼代培養(yǎng)達(dá)到一定數(shù)量和要求時(shí)進(jìn)行生根培養(yǎng)，即把試管苗切成適合的莖段，接到生根培養(yǎng)基中，20～30 d可生根，生根后植株便可移栽馴化。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)外植體成活率的影響

利用0.1%升汞滅菌時(shí)，時(shí)間長(zhǎng)短至關(guān)重要。為提高外植體成活率，減少污染率，分別進(jìn)行7 種時(shí)間的滅菌試驗(yàn)，滅菌時(shí)間對(duì)香花槐成活率的影響見表2。

從表2可知：滅菌時(shí)間越長(zhǎng)，滅菌效果越好且污染個(gè)數(shù)少，但褐化死亡個(gè)數(shù)增加，成活率降低；滅菌時(shí)間越短，污染個(gè)數(shù)增加，但褐化死亡個(gè)數(shù)減少；3.5～4.0 min時(shí)成活個(gè)數(shù)相對(duì)多，成活率達(dá)到45%。

2.2 初代培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織及腋芽誘導(dǎo)的影響

初代培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)過消毒滅菌的外植體分別接在不同的培養(yǎng)基中，約15 d開始萌動(dòng)，20 d后腋芽開萌動(dòng)變化，40 d長(zhǎng)出芽。觀察香花槐外植體初代培養(yǎng)20 d后不同培養(yǎng)基上莖段的生長(zhǎng)狀況，見表3。

從表3 中可以看出，A6培養(yǎng)基中香花槐莖段上腋芽變綠芽，生長(zhǎng)幾率大，最先萌動(dòng)且有愈傷組織形成，而其他幾種培養(yǎng)基變化和長(zhǎng)勢(shì)均不如A6。

2.3 繼代培養(yǎng)基對(duì)腋芽生長(zhǎng)的影響

香花槐外植體初培40 d后，在不同繼代培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況見表4。

由表4可知，A6培養(yǎng)基上莖段底部不但有健康的愈傷組織，且腋芽正常生長(zhǎng)。這表明A6培養(yǎng)基是相對(duì)適合香花槐組織培養(yǎng)的初代培養(yǎng)基。

3 結(jié)語

1） 利用0.1%升汞處理香花槐外植體時(shí)，滅菌處理時(shí)間很重要。時(shí)間過長(zhǎng)，滅菌效果雖好，但褐化死亡個(gè)數(shù)增加，成活率降低；滅菌時(shí)間短有利于減少褐化死亡個(gè)數(shù)，但滅菌不徹底，污染率升高。試驗(yàn)表明：3.5～4.0 min的滅菌效果較好，香花槐外植體成活個(gè)數(shù)相對(duì)多，成活率達(dá)45%。

2） 香花槐外植體初代培養(yǎng)基是其無性繁殖的關(guān)鍵。香花槐外植體在A1，A2，A3培養(yǎng)基上變化小且生長(zhǎng)較緩慢，在A4，A5培養(yǎng)基上能形成大量透明狀愈傷組織且腋芽呈現(xiàn)透明狀玻璃化，無法形成健康植株，在A6培養(yǎng)基上生有正常的愈傷組織，且腋芽能正常生長(zhǎng)。這表明，適合香花槐初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為A6，即MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+瓊脂6 g。

3） 在香花槐繼代增殖培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的選擇對(duì)香花槐增殖倍數(shù)、叢芽長(zhǎng)勢(shì)尤為重要。香花槐植株在B1，B2，B3培養(yǎng)基上有愈傷也有分化，但植株容易玻璃化，無法正常生長(zhǎng)或停止生長(zhǎng)，這（下轉(zhuǎn)第29頁）

（上接第26頁）說明B1，B2，B3不宜作為香花槐繼代培養(yǎng)基；在B4，B5，B6培養(yǎng)基中既可形成健康的愈傷組織也有分化，但相比較而言，B6培養(yǎng)基中香花槐植株生長(zhǎng)更健康。這表明適宜香花槐培養(yǎng)的繼代增殖培養(yǎng)基為B6，即MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+瓊脂6 g。

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