孫麗美

[摘要] 目的 探討糜爛型口腔扁平苔蘚患者EB病毒誘導(dǎo)基因3（EBi3 ）及IL-12p35的表達及臨床意義。方法 方便選取2016年1月—2018年2月該院收治的口腔扁平苔蘚患者56例作為研究組，選取同期健康體檢者60名作為對照組，采取免疫組織化學(xué)法檢測其EBi3 及IL-12p35 陽性的表達情況，分析EBi3 及IL-12p35與糜爛型口腔扁平苔蘚患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 研究組EBi3 、IL-12p35 陽性表達率分別為60.71%、41.07%，均高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；EBi3 及IL-12p35 蛋白表達與口腔扁平苔蘚患者臨床分型有關(guān)（χ2=32.323，13.333，P<0.05），與年齡、性別、病程無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 口腔扁平苔蘚病損組織中EBi3、IL-12p35表達上調(diào)，其與口腔扁平苔蘚患者臨床分型有關(guān)，提示EBi3、IL-12p35可能在口腔扁平苔蘚病損形成中發(fā)揮著重要作用。

[關(guān)鍵詞] 糜爛型；口腔扁平苔蘚；EBi3；IL-12p35

[中圖分類號] R4 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2019）03（a）-0001-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of Epstein-Barr virus-induced gene 3 （EBi3） and IL-12p35 in patients with erosive oral lichen planus. Methods A total of 56 patients with oral lichen planus admitted to our hospital from January 2016 to February 2018 were convenient selected enrolled as the study group. 60 healthy subjects were selected as the control group. Immunohistochemistry was used to detect EBi3 and IL-12p35 positive. The relationship between EBi3 and IL-12p35 and clinicopathological features of erosive oral lichen planus was analyzed. Results The positive expression rates of EBi3 and IL-12p35 in the study group were 60.71% and 41.07%， respectively， which were higher than the control group. There was significant difference between the two groups （P<0.05）. The expression of EBi3 and IL-12p35 protein and oral lichen planus patients clinical classification was related（χ2=32.323， 13.333， P<0.05）， and was not related to age， gender and duration （P>0.05）. Conclusion The expression of EBi3 and IL-12p35 is up-regulated in the lesions of oral lichen planus， which is related to the clinical classification of oral lichen planus， suggesting that EBi3 and IL-12p35 may play an important role in the formation of oral lichen planus lesions.

[Key words] Erosive type； Oral lichen planus； EBi3； IL-12p35

口腔扁平苔蘚是一種影響皮膚及黏膜表面的慢性炎癥性自身免疫性疾病，主要發(fā)病部位在口腔頜面部，按疾病類型可分為糜爛型和非糜爛型，其中以糜爛型最為常見[1]。該病病因尚未明確，主要病理特征為上皮增生，伴有上皮過渡不全角化，固有層淋巴細(xì)胞呈帶狀浸潤。白細(xì)胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是IL-12細(xì)胞因子家族中新的一員，主要由EB病毒誘導(dǎo)基因3（Epstein-Barr virus-induced gene 3，EBi3 ）及IL-12p35兩個亞基組成，通過特異性作用方式，可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用[2]。近年，有研究證實[3]，IL-35在多種感染性疾病、自身免疫性疾病的病理機制中扮演重要角色，并與病情嚴(yán)重程度及預(yù)后存在密切聯(lián)系。為探討IL-35中兩個亞基EBi3、IL-12p35在糜爛型口腔扁平苔蘚患者中的表達情況及臨床意義，該文方便選取2016年1月—2018年2月該院口腔科收治的糜爛型口腔扁平苔蘚患者56例進行分析，并選取60名健康體檢者作對照，現(xiàn)分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取上述時期該院口腔科收治的56例糜爛型口腔扁平苔蘚患者作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《實用口腔科學(xué)》[4]中關(guān)于糜爛型口腔扁平苔蘚診斷標(biāo)準(zhǔn)；口腔損害發(fā)生2 d內(nèi)就診；所有患者經(jīng)血常規(guī)、心電圖、肝腎功能檢查均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心、肝、肺、腎等重要器官病變者；腦血管疾病者；精神疾病者；資料不全者。其中男22例，女34例，年齡30～75歲，平均（48.21±3.34）歲；病程6個月～8年，平均（2.15±0.46）年；其中糜爛型36例，非糜爛型20例。選取同期健康體檢者60名作為對照組，男28名，歲32名，年齡30～74歲，平均（48.19±3.31）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。該次所選受試者均對該次研究知情，均簽署知情同意書，且經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

采取免疫組織化學(xué)法檢測其EBi3 及IL-12p35 陽性表達情況，選取胎盤組織作為陽性對照，選取PPS緩沖液作為陰性對照，具體操作步驟：①烤片：將所得石蠟組織切片放入電熱恒溫培養(yǎng)干燥箱（60℃）中進行烤片，持續(xù)90 min；②脫蠟：使用二甲苯脫蠟15～20 min，共3次；③用95%酒精水化5 min；蒸餾水沖洗3 min，共3次；用PBS緩沖液洗滌3 min，3～4次；④抗原修復(fù)，將組織切片置于耐高溫塑料切片架上進行高溫高壓修復(fù)，隨后將其置入含有EDTA抗原修復(fù)液（北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司）的器皿中，經(jīng)高溫加熱處理后，取出器皿，冷卻至室溫；⑤用PBS緩沖液洗滌5 min，3～4次；⑥滴加濃度3%H2O2去離子水，室溫下孵育持續(xù)10 min，隨后用PBS緩沖液洗滌5 min，3～4次；⑦滴加一抗，選取鼠抗人Ebi3單克隆抗體（英國NOVUWS生物科研有限公司）、兔抗人IL-12p35多克隆抗體（上海酶研生物科技有限公司），4℃冰箱孵育過夜，次日取出，將其置于溫箱（37℃）中，孵育持續(xù)30 min，用PBS緩沖液洗滌5 min，3～4次；⑧滴加二抗，Ebi3滴加PV6002山羊抗鼠IgG/HRP聚合物（北京中杉生物技術(shù)有限公司），IL-12p35滴加PV6001山羊抗兔IgG/HRP聚合物（北京中杉生物技術(shù)有限公司），在37℃條件下孵育30 min，用PBS緩沖液洗滌5 min，3～4次；⑨DAB顯色，將配制的DBA顯色劑滴加至組織切片上，在YS100光學(xué)顯微鏡（Nikon公司）下觀察，直至陽性切片上細(xì)胞出現(xiàn)明顯棕色或棕黃色顆粒時終止反應(yīng)；⑩蘇木素復(fù)染，切片上滴加蘇木素試劑，復(fù)染2 min，用自來水沖洗5 min，最后用酒精脫水干燥，中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

免疫組化結(jié)果判定：每張切片隨機選取5個視野（400×），計算每個視野中陽性細(xì)胞所占百分比，Ebi3、IL-12p35染色以細(xì)胞出現(xiàn)明顯棕色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，0分：棕黃色顆粒細(xì)胞<5%；1分：5%≤棕黃色顆粒細(xì)胞<25%；2分：25%≤棕黃色顆粒細(xì)胞<50%；3分：50%≤棕黃色顆粒細(xì)胞<75%；4分：棕黃色顆粒細(xì)胞≥75%，0～1分為陰性（-），2～4分為陽性（+）[5]。詳細(xì)記錄糜爛型口腔扁平苔蘚患者EBi3 及IL-12p35 陽性的表達情況，并分析EBi3 及IL-12p35蛋白表達與糜爛型口腔扁平苔蘚患者臨床病理特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計方法

將該研究納入統(tǒng)計的數(shù)據(jù)均在SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件中完成處理，計量數(shù)據(jù)以（x±s）表示，采取t檢驗進行組間比較，多組間比較采取F檢驗，將該研究納入統(tǒng)計的計數(shù)數(shù)據(jù)，以[n（%）]表示，采取χ2檢驗進行組間比較，檢驗水準(zhǔn)設(shè)置為α=0.05。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EBi3 及IL-12p35 陽性表達

研究組EBi3 、IL-12p35 陽性表達率均顯著高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 EBi3 及IL-12p35蛋白表達與口腔扁平苔蘚患者臨床病理特征的關(guān)系

EBi3 及IL-12p35 蛋白表達與口腔扁平苔蘚患者臨床分型有關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、病程無關(guān)（P>0.05），見表2。

3 討論

口腔扁平苔蘚是臨床常見一種口腔黏膜病變疾病，對口腔損害較嚴(yán)重，若不及時治療，隨著病情進展，易發(fā)生癌變，癌變率為0.5%～3.5%[6]。有研究表明[7]，口腔扁平苔蘚具有成人易患、病程遷延不愈、自身免疫功能明顯下降、病損部位存在自身毒性T細(xì)胞克隆等特性，其主要病理特征為上皮增生?？谇槐馄教μ\的發(fā)生、發(fā)展與機體免疫狀態(tài)存在密切聯(lián)系，其中以T淋巴細(xì)胞免疫是近年來臨床關(guān)注的重點。當(dāng)機體免疫功能低下時，調(diào)節(jié)性T（Treg）細(xì)胞會誘導(dǎo)機體炎性細(xì)胞通過免疫逃逸機制的作用，以此來逃避效應(yīng)細(xì)胞的殺傷作用，最終促進病情進展。其中IL-35可由Treg細(xì)胞特異性產(chǎn)生，是一種抑制性細(xì)胞因子，其主要通過以下途徑來發(fā)揮免疫抑制的作用：①能促進Tregs增殖；②對Teffs增殖及分泌的細(xì)胞因子有明顯的抑制作用；③抑制T淋巴細(xì)胞向Teffs分化[8-9]。近年，有研究報道[10]，腫瘤細(xì)胞分泌的IL-35，可促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展，其主要受EBi3 及IL-12p35兩個亞基的影響。

劉艷等[11]研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織中IL-35水平明顯高于鼻炎黏膜慢性炎癥組織及健康對照組（P<0.05），提示隨著病情嚴(yán)重程度加重，患者組織中IL-35水平逐漸升高。目前，國內(nèi)外關(guān)于IL-35中兩個亞基EBi3 、IL-12p35在口腔扁平苔蘚病損中的表達少見報道。該研究采取免疫組織化學(xué)法檢測口腔扁平苔蘚患者組織中EBi3 及IL-12p35 陽性表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)研究組EBi3 、IL-12p35陽性率分別為60.71%、41.07%，均高于對照組（P<0.05）。王榮等[12]學(xué)者報道，EBi3 、IL-12p35在正常口腔黏膜上皮均無表達，在口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為58.82%、67.65%，都高于對照組，此研究結(jié)果與上述結(jié)果差別不大，都提示了EBi3 、IL-12p35在正?？谇火つど掀そM織中無表達，但病損組織中就會出現(xiàn)EBi3 、IL-12p35陽性表達。按臨床分型，口腔扁平苔蘚可分為糜爛型和非糜爛型兩種，以糜爛型最為常見。本研究分析EBi3 、IL-12p35與口腔扁平苔蘚患者病理特征的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EBi3 、IL-12p35與口腔扁平苔蘚患者臨床分型有關(guān)，與年齡、性別、病程無關(guān)。EBi3 、IL-12p35可能是口腔黏膜癌變的早期事件，隨著組織惡性程度的增加，其蛋白表達水平均會升高。糜爛型口腔扁平苔蘚的發(fā)生，多表現(xiàn)為上皮萎縮變薄，脫落后形成不規(guī)則形態(tài)的表淺糜爛，常伴有自發(fā)性疼痛，給患者帶來的痛苦較大，其癌變率可能大于網(wǎng)狀型，臨床需對其引起足夠重視[13-15]。早診斷、早治療，降低癌變率，對提高患者生活質(zhì)量有重要意義。

綜上所述，口腔扁平苔蘚是臨床常見一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，大部分會出現(xiàn)口腔損害，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。根據(jù)其病理特征，機體免疫功能明顯下降，T淋巴細(xì)胞免疫受到抑制，而IL-35主要由Treg細(xì)胞特異性產(chǎn)生，其兩個亞基EBi3 、IL-12p35表達水平也會受到影響。因此，分析口腔扁平苔蘚病損中EBi3 、IL-12p35表達情況，可見上述指標(biāo)表達上調(diào)，且與口腔扁平苔蘚患者臨床分型有關(guān)，尤其是糜爛型口腔扁平苔蘚，提示EBi3 、IL-12p35可能在口腔扁平苔蘚病損中發(fā)揮著重要作用。

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（收稿日期：2018-12-01）