張寧 郭陽(yáng) 劉微

[摘要]目的 建立生脈飲（黨參方）中五味子醇甲含量的測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定生脈飲（黨參方）中五味子醇甲含量。色譜條件：色譜柱為Agilent 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（62：38），檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣體積為10 μl。結(jié)果 五味子醇甲的進(jìn)樣量在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度良好（RSD=0.23%）、穩(wěn)定性良好（RSD=0.4%）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD為0.87%。平均加樣回收率為102.9%，RSD為0.7%（n=6）。頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的平均含量分別為1.827、1.736和1.703 mg/支，平均RSD為0.1%。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便，可用于生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；生脈飲（黨參方）；五味子醇甲；含量

[中圖分類號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）4（c）-0052-03

Determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）

ZHANG Ning GUO Yang LIU Wei DUAN Shu-qing▲

Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Hebei Province， Chengde 067000， China

[Abstract] Objective To establelish a determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. Methods High performance liquid chromatography （HPLC） was used to deternmine Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The chromatographic condition： Agilent column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used， the mobilephase consisted of methyl alcohol-water， the detection wavelength was at 250 nm， the flow ratew was 1.0 ml/min， the volume was 10 μl. Results The linear range of Schisandrin was 0.02084～0.41680 mg/ml， it had a good linear relationship with its peak area， the regression equation was Y=2×107X （r=1， n=5）. The accuracy was good （RSD=0.23%）， the stability was good （RSD=0.4%）， and the RSD of the repeated test was 0.87%. The average recovery was 102.9% and the RSD was 0.7% （n=6）. The average contents of three batches of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula） produced by Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd. were 0.182 mg， 0.173 mg and 0.165 mg in each Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The average RSD was 0.1%. Conclusion This method is accurate， sensive， simple and stability， and has good reproducibility. It is suitable for the determination of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula）.

[Key words] High performance liquid chromatography； Shengmaiyin （Dangshen Famula）； Schisandrin； Content

生脈飲（黨參方）由黨參、麥冬、五味子等3味藥材組成，具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津的功效。用于氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗[1]。

生脈飲（黨參方）[1]現(xiàn)收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)第10冊(cè)，除合劑的常規(guī)檢驗(yàn)外，只有一項(xiàng)相對(duì)密度檢驗(yàn)項(xiàng)。生脈飲中五味子具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心等的作用，在方中發(fā)揮重要作用[2-3]。因此，參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-17]，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定生脈飲中五味子醇甲的含量，為生脈飲（黨參方）的質(zhì)量控制方法提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

安捷倫1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；五味子醇甲對(duì)照品（批號(hào)110857-201714，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇（美國(guó)Fisher）為色譜純；純化水（Millipore；Milli-Q Direct 8）；0.45 μm微孔濾膜（上海市新亞凈化器件廠）。生脈飲（黨參方）（840001批、840002批、840003批）、陰性樣品制備所用的原料均由頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用安捷倫C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（62∶38），檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm；流速：1.0 ml/min，柱溫：常溫。分離度應(yīng)>1.5。理論板數(shù)按五味子醇甲計(jì)算應(yīng)≥2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱定五味子醇甲對(duì)照品，加甲醇制成濃度為0.08336 mg/ml五味子醇甲的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取生脈飲（黨參方）5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4陰性樣品的制備

按生脈飲（黨參方）處方配制不含五味子的陰性樣品，依“2.3”項(xiàng)下方法制備即得。

2.5專屬性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，將“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液、“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液及“2.4”項(xiàng)下的陰性樣品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，陰性無(wú)干擾（圖1）。

2.6線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

精密稱取五味子醇甲對(duì)照品，加甲醇制成含五味子醇甲0.4168、0.2084、0.08336、0.04168、0.02084 mg/ml的對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入高效液相色譜儀。以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。得回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5），結(jié)果表明，五味子醇甲在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.7精密度實(shí)驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，各重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄每次的色譜峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果顯示五味子醇甲R(shí)SD為0.23%，表明儀器精密度良好。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批已知濃度生脈飲（黨參方），精密量取6份，按“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，五味子醇甲的平均含量為168.7 μg/ml，RSD為0.87%（n=6）。表明重現(xiàn)性良好。

2.9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0，1， 2，3，......，22，23，24 h進(jìn)樣10 μl，記錄色譜峰面積，結(jié)果顯示，峰面積RSD值為0.4%。表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密量取已測(cè)定五味子醇甲含量的生脈飲（含量為0.1687 mg/ml）6份，精密吸取25 ml至50 ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻；再精密吸取5 ml，分別加入“2.2”項(xiàng)下的五味子醇甲對(duì)照品溶液5 ml，混勻，即可。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，五味子醇甲平均回收率為102.9%，RSD值為0.7%（表1）。

2.11定量限

取標(biāo)準(zhǔn)曲線中最低濃度的對(duì)照品，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，然后按倍數(shù)稀釋對(duì)照品溶液。結(jié)果五味子醇甲濃度為0.2084 μg/ml時(shí)信噪比為10∶1，定量限為2.084 ng。

2.12檢測(cè)限

取標(biāo)準(zhǔn)曲線中最低濃度的對(duì)照品，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，然后按倍數(shù)稀釋對(duì)照品溶液。結(jié)果五味子醇甲濃度為0.08336 μg/ml時(shí)信噪比為3∶1，檢測(cè)限為0.8336 ng。

3樣品含量測(cè)定

按上述所建方法，測(cè)定頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量，每批樣品做平行樣，結(jié)果取平均值（表2）。結(jié)果表明，3批五味子醇甲含量分別為：840001批1.827 mg/支，840002批1.736 mg/支，840001批1.703 mg/支，3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲整體平均含量為1.755 mg/支，平均RSD值為0.1%。

3討論

生脈飲（黨參方）療效較好，受廣大患者的好評(píng)。但現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中除合劑的常規(guī)檢驗(yàn)外，只有一項(xiàng)相對(duì)密度檢驗(yàn)項(xiàng)，并沒(méi)有含量測(cè)定項(xiàng)，為確保生脈飲藥品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)生脈飲（黨參方）的質(zhì)量控制進(jìn)行了研究。五味子為處方中一味重要中藥材，其中含木脂素類成分，以五味子醇甲為代表，本實(shí)驗(yàn)采取高效液相色譜法對(duì)生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量進(jìn)行研究。

本實(shí)驗(yàn)建立了生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量的測(cè)定方法，具有準(zhǔn)確、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、分離效果好、陰性無(wú)干擾等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的平均含量分別為1.827、1.736和1.703 mg/支，整體平均含量為1.755 mg/支，平均RSD值為0.1%。本實(shí)驗(yàn)可為生脈飲（黨參方）中質(zhì)量控制研究提供理論依據(jù)，可更為全面的反映藥品質(zhì)量，亦對(duì)其他制劑研究提供借鑒。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也對(duì)色譜條件進(jìn)行了考察：采用Agilent色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；YMC-pack色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）兩個(gè)色譜柱進(jìn)行樣品分離，結(jié)果提示，Agilent色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）的分離效果更好。流動(dòng)相選取甲醇-水（62：38）和甲醇-水（56：44）兩個(gè)流動(dòng)相進(jìn)行樣品分離，結(jié)果提示，甲醇-水（62：38）分離效果更好。對(duì)前處理方法做了考察，最終確定為直接稀釋取續(xù)濾液即得，操作步驟簡(jiǎn)單，省時(shí)省力。

本研究結(jié)果提示，五味子醇甲的進(jìn)樣量在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好。平均加樣回收率為102.9%（RSD=0.7%）。

從目前研究數(shù)據(jù)來(lái)看，頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的3批生脈飲（黨參方）質(zhì)量控制較為穩(wěn)定。還有待搜集更多批次生脈飲（黨參方）進(jìn)行研究分析。

綜上所述，本研究所建立的方法，準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便，可用于生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量測(cè)定

[參考文獻(xiàn)]

[1]部頒標(biāo)準(zhǔn)第十冊(cè)[S].中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)，1995，41.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].1部2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：66-67.

[3]吳曉鳳，陳虹，趙志茹.HPLC法測(cè)定生脈飲中五味子醇甲的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2003，28（1）：39-40，72.

[4]李斌.HPLC法測(cè)定生脈飲（人參方）中五味子醇甲的含量[J].哈爾濱醫(yī)藥，2014，34（1）：20-21.

[5]王春紅，張丹丹.HPLC法測(cè)定生脈飲口服液中五味子醇甲的含量方法研究[J].黑龍江科技信息，2015，19（28）：30.

[6]劉鳳蘭，李東升.HPLC法測(cè)定生脈飲中五味子醇甲的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2008，21（4）：16-17.

[7]郭沖，郜玉鋼，臧埔，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定人參及其制劑中16種人參皂苷[J].中草藥，2009，45（14）：2009-2013.

[8]倪琳，楊錫.HPLC 法同時(shí)測(cè)定生脈飲中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素[J].中成藥，2012，34（5）：872-875.

[9]楚楚，徐紹靜，吳瓊瓊，等.HPLC同時(shí)測(cè)定生脈飲（黨參方）中多組分的含量[J].中藥材，2013，36（5）：820-823.

[10]馮雪松，王大成，劉雅茹.HPLC同時(shí)測(cè)定生脈飲（黨參方）中多組分的含量[J].中藥材，2013，36（5）：820.

[11]楊帆，范洪巖，黃龍梅.利用HPLC法建立五味子醇甲的檢測(cè)方法及其方法學(xué)考察[J].廣東化工，2017，44（21）：151-152.

[12]楊堃.生脈飲（黨參方）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（18）：167-169.

[13]林美斯，陳哲杰，羅林，等.生脈飲研究現(xiàn)狀及其制劑開發(fā)中的問(wèn)題分析[J].中藥與臨床，2017，8（2）：69-73.

[14]潘國(guó)良，呂彬，郭林，等.市售生脈飲中五味子醇甲含量的比較分析[J].中國(guó)處方藥，2017，12（1）：89-90.

[15]劉文英，周煒，吳荻，等.生脈飲中五味子醇甲的薄層分離技術(shù)與掃描定量法[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，24（2）：78-81.

[16]馮雪松，王大成，劉雅茹.高效液相色譜法測(cè)定生脈飲中6種活性成分的含量[J].化學(xué)與生物工程，2008，25（2）：76-78.

[17]胡玉春.反相高效液相色譜法測(cè)定黃芪生脈飲口服液中五味子醇甲的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24（7）：628-629.

（收稿日期：2018-07-09 本文編輯：孟慶卿）