姜峰玉 孫 抒 辛 悅 李 冰

目前對(duì)蝙蝠葛藥理作用的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，蝙蝠葛具有多種生物學(xué)活性，其根、莖葉、果實(shí)均有良好的藥理效應(yīng)，具有較好的應(yīng)用前景和開(kāi)發(fā)價(jià)值。不僅如此，現(xiàn)代研究認(rèn)為蝙蝠葛活性成分具有體內(nèi)外抗腫瘤作用，而受到了醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的的廣泛關(guān)注[1-2]。本實(shí)驗(yàn)研究中所用的蝙蝠葛活性成分由延邊大學(xué)天然藥物研究所提供，由本科實(shí)驗(yàn)室用MTT等檢測(cè)方法一步一步地篩選其有效成分，現(xiàn)已經(jīng)接近于單體。初步認(rèn)為其有效成分是異喹啉衍生物。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

蝙蝠葛活性成分由延邊大學(xué)天然植物制品研究所提供。人肺癌A-549細(xì)胞株購(gòu)買于北京華美生科生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

BALB/cA裸小鼠，體重(21±1)g，雄性45～50日齡，由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所提供，合格證編號(hào)為SCXK(瀘)2009-0017。陰性對(duì)照組12只；陽(yáng)性對(duì)照組6只；蝙蝠葛活性成分低劑量組6只；蝙蝠葛活性成分高劑量組6只，共30只。

1.3 方法

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A-549細(xì)胞制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml，按每只裸鼠注射0.2 ml的細(xì)胞懸液計(jì)算，制備適量細(xì)胞懸液；用1 ml注射器在每只裸鼠右側(cè)腋窩皮下注射細(xì)胞懸液0.2 ml，注射后輕壓5 s：將裸鼠重新放回到籠中觀察3～5天，以右側(cè)腋窩皮下出現(xiàn)米粒大小質(zhì)硬結(jié)節(jié)為模型復(fù)制成功的標(biāo)準(zhǔn)；接種成功后，在裸鼠體內(nèi)傳代2代以后使用；取生長(zhǎng)旺盛期的瘤組織剪切成1.5 mm3左右，在無(wú)菌條件下，接種于裸小鼠背部皮下，裸小鼠皮下移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑。

1.4 動(dòng)物分組

待裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)至100～200 mm3后將動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分為4個(gè)組：陰性對(duì)照組(加入蝙蝠葛活性成分的藥物溶劑Na2CO3)，為12只；陽(yáng)性對(duì)照組(加入絲裂霉素)，為6只；蝙蝠葛活性成分低劑量組，為6只；蝙蝠葛活性成分高劑量組，為6只。

1.5 藥物的用法

蝙蝠葛活性成分低劑量和高劑量組每天口服給藥，連續(xù)給藥4周；陽(yáng)性對(duì)照組絲裂霉素第1，7天靜脈給藥兩次；陰性對(duì)照組給等量的藥物溶劑(Na2CO3)。給藥劑量以及用法等參照表1。

表1 蝙蝠葛活性成分作用于裸鼠給藥劑量、濃度及給藥方式

1.6 抑瘤效果的觀察

每周兩次使用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤的長(zhǎng)度和寬度，動(dòng)態(tài)觀察裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)情況，并計(jì)算其體積，以此繪出裸鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線圖，同時(shí)稱取小鼠的體重。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

蝙蝠葛活性成分對(duì)人肺癌A-549裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)性治療結(jié)果見(jiàn)表2～4。陽(yáng)性對(duì)照組、絲裂霉素組的T/C值為6.0%，對(duì)裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用；蝙蝠葛活性成分低劑量組的T/C值為68.4%，對(duì)裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯地抑制作用；蝙蝠葛活性成分高劑量組的T/C值為58.8%，并P<0.05,故可以認(rèn)為對(duì)裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)具有抑制作用。各實(shí)驗(yàn)組裸鼠生長(zhǎng)情況良好，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程無(wú)裸鼠死亡，蝙蝠葛活性成分實(shí)驗(yàn)組體重均有增加，與對(duì)照組裸鼠無(wú)明顯差異，絲裂霉素組體重相對(duì)較輕。

3 討論

用化學(xué)藥物治療腫瘤僅僅是最近四十年的事，與手術(shù)治療和放射治療相比較，藥物治療的歷史非常短。經(jīng)過(guò)這四十多年的不斷努力，科學(xué)家們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾十種有效的抗腫瘤藥物，讓很多晚期癌癥病人的生存期明顯延長(zhǎng)[3]。但化療藥物的毒副作用也顯而易見(jiàn)，導(dǎo)致相當(dāng)一部分患者不得不停止治療。這需要我們更多地深入研究和發(fā)覺(jué)新的資源并于以開(kāi)發(fā)。尋找具有抗腫瘤作用，并且毒副作用小，能提高患者生活質(zhì)量的藥物。多數(shù)常見(jiàn)的實(shí)體瘤，比如肺癌、胃癌、肝癌以及胰腺癌等還缺乏有效的藥物治療，新型抗腫瘤藥物的研究勢(shì)在必行。 近年來(lái)，越來(lái)越多的研究認(rèn)為蝙蝠葛具有廣譜的抗腫瘤作用[4-5]。但大部分研究是體外實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)用人肺癌A-549裸小鼠移植瘤來(lái)觀察了蝙蝠葛活性成分在體內(nèi)的抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)蝙蝠葛活性成分低劑量組T/C值為68.4%，對(duì)裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯地抑制作用，高劑量組的T/C值為58.8%，并P<0.05,故可以認(rèn)為蝙蝠葛活性成分高劑量組對(duì)裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)具有抑制作用，并且實(shí)驗(yàn)組裸鼠生長(zhǎng)情況良好，體重?zé)o明顯減輕，并沒(méi)有表現(xiàn)出明顯毒性反應(yīng)，而陽(yáng)性對(duì)照組，絲裂霉素組小鼠體重相對(duì)較輕。我們發(fā)現(xiàn)蝙蝠葛活性成分在體外具有廣譜的抗腫瘤細(xì)胞增殖作用，在體內(nèi)也具有抗腫瘤作用，并無(wú)表現(xiàn)出明顯的毒副作用，故可以認(rèn)為蝙蝠葛活性成分具有進(jìn)一步研究的價(jià)值，其抗腫瘤機(jī)制有待于進(jìn)一步研究和探討。

表2 各組裸鼠體重的變化

表3 各組裸鼠皮下移植瘤的平均體積

表4 各組裸鼠皮下移植瘤的相對(duì)腫瘤體積和相對(duì)腫瘤增殖率