吳 雪，范艷美，楊 鐮，李啟照，姚 凱

(安徽新華學(xué)院，安徽 合肥 230088)

蒲公英為多年生草本菊科植物，氣微，味微苦，具有很高的藥用價值，能清熱解毒，利尿散結(jié)，還可以治療急性乳腺炎，淋巴腺炎，疔毒瘡腫，急性結(jié)膜炎，感冒發(fā)熱急性扁桃體炎，急性支氣管炎，胃炎，肝炎，膽囊炎，尿路感染等[1]。

蒲公英含有多種化學(xué)成分，主要包括黃酮類，萜類，酚酸類，萜類，多糖類，植物甾醇類[2-3]。中國藥典2015年版一部主要以咖啡酸含量作為質(zhì)控指標[4]。咖啡啡酸，又名3,4-二羥基肉桂酸，屬于酚酸類化合物，具有收縮增固微血管，促進凝血因子功能，升高白血球及血小板之功效，用于白細胞、血小板減少癥的治療，此外還具有抗氧化、抗腫瘤和腦保護等多種藥理作用[5-6]。目前常用高效液相色譜法測定咖啡酸的含量。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent HC-C18(4.6×250mm，5μm)色譜柱，F(xiàn)A2004電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)。甲酸，95%乙醇為分析純。甲醇為色譜純?？Х人釋φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號為110885-200102)。蒲公英(安徽產(chǎn))。

2 方法與結(jié)果

2.1 蒲公英提取物的制備

稱取蒲公英粗粉50g，配置500mL 60%乙醇溶液(料液比1∶10)，用甲酸調(diào)節(jié)pH值3～5，將二者置于閃式提取器罐中，閃式提取兩次，每次2min。抽濾，濾液減壓蒸餾濃縮得浸膏，用丙酮萃取兩次，萃取液脫溶，置于真空干燥箱干燥，制得蒲公英提取物。

2.2 咖啡酸對照品的制備

精密稱取咖啡酸對照品13.62mg,置100mL容量瓶中,用甲醇定容到刻度，溶解搖勻，得咖啡酸對照品溶液(濃度0.1362mg/mL)。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取上述方法制備的蒲公英提取物1.0g,置100mL容量瓶中,用甲醇定容到刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液備用。

2.4 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18(4.6×250mm，5μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液 (25∶ 75)；柱溫30℃，流速1.0mL/min，檢測波長323mm?？Х人釋φ掌泛蜆悠飞V圖見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取咖啡酸對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL,分別置于50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度，得6個不同濃度的對照品溶液，分別進樣20μL測定峰面積。以峰面積縱坐標濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程y=389.91x+268.56(r2=0.9989)，表明咖啡酸在0.0027至0.0163mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

精密吸取咖啡酸對照品溶液20μL，連續(xù)進樣6次，算得峰面積的RSD為1.34%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

取同一樣品供試品溶液，按上述方法分別于不同時間(1h,2h,3h,4h,5h,6h,8h)測定峰面積，RSD為0.97%，顯示在8h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果表明供試品穩(wěn)定性好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

稱取同一批蒲公英提取物樣品5份，每份1g，按供試品溶液制備方法進行平行實驗，每份進樣20μL，測定峰面積，計算咖啡酸的含量。RSD為1.36%，表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收實驗

精密稱取咖啡算對照品6.0mg,分別加入6份已知含量的1克的樣品中, 按供試品溶液制備方法制備，每份進樣20μL，測定峰面積，計算回收率。 計算RSD為1.58%，表明本方法回收率較好。

圖1 咖啡酸對照品(A)和樣品(B)色譜圖

3 樣品含量測定

用上述方法對蒲公英提取物中咖啡酸進行含量測定，得蒲公英提取物中咖啡酸含量是4.599mg/g。

4 討論

蒲公英提取物的制備方法比較多，本文通過查閱相關(guān)文獻進行比較總結(jié)，選擇了合適的提取溶劑，料液比，采用新型的閃式提取法制備蒲公英提取物，并測定其中主要成分咖啡酸的含量。結(jié)果表明，此法操作簡單快速，高效節(jié)能，質(zhì)量檢查符合要求，可作為制備蒲公英提取物的一種方法。