謝莉 張億 朱蓉 熊玲 陳紅

(成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，成都 610045)

甲硝唑是臨床使用歷史較久的一種廣譜抗厭氧菌藥和抗滴蟲(chóng)藥，其不同給藥途徑分別發(fā)揮著全身作用和局部作用。當(dāng)其發(fā)揮全身作用時(shí)，由于較多副作用的產(chǎn)生，已逐漸被替硝唑、奧硝唑等硝基咪唑類(lèi)衍生物替代。當(dāng)其制成栓劑、凝膠等劑型局部給藥時(shí)，發(fā)揮著良好的療效，并且副作用少。甲硝唑口頰片可用于牙齦炎、牙周炎、冠周炎及口腔潰瘍，一般將其置于牙齦和齦頰溝間含服，用于口腔潰瘍時(shí)黏貼于黏膜患處。目前該品種有兩個(gè)生產(chǎn)廠家。中國(guó)藥典以及其他國(guó)家藥典均未收載該品種。兩廠家樣品的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)分別為YBH03122014[1]以及WS1-(X-523)-2003Z[2]，兩標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的釋放度檢查采用的裝置均為小杯法，溶出介質(zhì)均為0.1mol/L的鹽酸溶液，測(cè)定方法分別為HPLC法和UV吸收系數(shù)法。但由于唾液的pH值為6.0～7.5[3]，原釋放度檢查方法采用的溶出介質(zhì)酸度太高，不能模擬藥物溶出的真實(shí)生理環(huán)境，介質(zhì)選擇不合理。且美國(guó)FDA溶出方法數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的口腔用藥膜或藥物貼片的溶出介質(zhì)多為磷酸鹽緩沖液[4]，本研究采用磷酸鹽緩沖液(pH6.6)作為溶出介質(zhì)。

小杯法是我國(guó)特有的溶出度檢查方法，最早收載于1995年版中國(guó)藥典。該方法被收載的主要原因是20多年前，儀器的檢測(cè)靈敏度低，小劑量固體制劑在籃法和槳法裝置下的樣品溶液濃度低于儀器檢測(cè)靈敏度，小杯法通過(guò)使用較少的溶出介質(zhì)，提高了樣品溶液的濃度，使得小劑量固體制劑的溶出度有法可控，得以全面控制該類(lèi)固體制劑的質(zhì)量。而現(xiàn)階段儀器的檢測(cè)靈敏度普遍較高，用槳法檢查小劑量固體制劑也能找到與之相適的高靈敏度檢測(cè)方式，保留小杯法的現(xiàn)實(shí)意義值得重新考慮。

流通池法是一種較新的釋放度檢查方法，有閉環(huán)和開(kāi)環(huán)兩種系統(tǒng)，以滿(mǎn)足不同藥品的需求。其中，閉環(huán)式流通池法將樣品置于樣品架或者玻璃珠上，在恒流泵的作用下，溶出介質(zhì)經(jīng)過(guò)恒溫裝置由流通池下端進(jìn)入，通過(guò)樣品表面后，經(jīng)過(guò)流通池上端的過(guò)濾裝置流出，回到介質(zhì)瓶，溶出介質(zhì)循環(huán)使用，樣品溶液從介質(zhì)瓶進(jìn)行采集。開(kāi)環(huán)式流通池法為新鮮介質(zhì)經(jīng)過(guò)樣品的溶出介質(zhì)后不回到介質(zhì)瓶，濾過(guò)后進(jìn)入樣品收集器。流通池法的流體力學(xué)與傳統(tǒng)溶出度檢查法完全不同，且可以用于微量藥物制劑、藥物支架、緩控釋制劑、透皮貼劑、速釋制劑等，能解決制劑漂浮的問(wèn)題，并且在體內(nèi)外相關(guān)性上有更好的發(fā)展空間[5]。目前，流通池法被國(guó)際廣泛認(rèn)可，被收載于美國(guó)藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國(guó)藥典(BP)及日本藥局方(JP)，中國(guó)藥典尚未收載該方法，由于儀器昂貴，目前國(guó)內(nèi)針對(duì)該方法的研究報(bào)道也較少[6-11]，國(guó)外使用該方法進(jìn)行溶出度測(cè)定的品種也極少。

考慮到小杯法被收入中國(guó)藥典的歷史局限性，且其他國(guó)家藥典均未收載小杯法，為與國(guó)際接軌，本研究采用USP四法流通池法和中國(guó)藥典一法籃法分別對(duì)甲硝唑口頰片釋放度進(jìn)行檢查，并與原標(biāo)準(zhǔn)的小杯法進(jìn)行比較。

1 儀器與試藥

CE7 smart溶出度儀(瑞士Sotax公司)，SotaxAT7 smart溶出度儀(瑞士Sotax公司)，Sotax AT xtend溶出度儀(瑞士Sotax公司)，MPS溶媒制備儀(瑞士Sotax公司)，1260高效液相色譜儀(美國(guó)Aglilent公司)，BP211D 電子天平(Sartorius公司)，Whatman GF/F玻璃纖維濾膜，Whatman GF/D玻璃纖維濾膜。

甲硝唑?qū)φ掌?批號(hào)：100191-201507，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，甲硝唑口腔黏貼片(規(guī)格：3mg；A廠，批號(hào)170103；B廠，批號(hào)：170904)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 釋放度試驗(yàn)方法

2.1.1 流通池法

采用USP溶出度四法流通池法的閉合系統(tǒng)裝置，將本品放入片夾，置于錐形部裝滿(mǎn)玻璃珠(直徑1mm)的流通池內(nèi)，以磷酸鹽緩沖液(pH6.6)100mL為溶出介質(zhì)，溫度為37℃，流速為4mL/min，于20、50、90、120、180、240和300min取已在線(xiàn)濾過(guò)的樣品溶液1mL，作為供試品溶液。

2.1.2 籃法

采用中國(guó)藥典溶出度一法籃法裝置，以磷酸鹽緩沖液(pH6.6)500mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r/min，溫度為37℃，于20、50、90、120、180、240和300min取已在線(xiàn)濾過(guò)的樣品溶液1mL，作為供試品溶液。

2.2 HPLC方法

以SPOLAR C18(150mm×4.6mm, 5μm)為色譜柱；以甲醇-水(20:80)為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，柱溫為35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。取甲硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱(chēng)定，加溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成分別約含0.006、0.015和0.03mg/mL的溶液，作為相應(yīng)方法的對(duì)照品溶液。分別精密量取供試品溶液和濃度對(duì)照品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

甲硝唑在3.012～50.20μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好(r=0.9999)，線(xiàn)性方程為：Y=62.99X-5.561。分別取濃度為6.024、15.06和30.12μg/mL的對(duì)照品溶液，分別重復(fù)測(cè)定6次，RSD均小于0.1%。精密量取各方法下300min時(shí)間點(diǎn)供試品溶液適量，分別加入相當(dāng)于甲硝唑已知濃度30%、50%和100%的對(duì)照品溶液依法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果回收率為99.0%～99.8%。供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 釋放度結(jié)果

采用所建流通池法和籃法與YBH03122014中采用的小杯法共3種方法分別對(duì)兩個(gè)廠家的甲硝唑口頰片的釋放度進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算累積釋放百分率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 釋放度數(shù)據(jù)分析

采用相似因子法對(duì)相同裝置不同廠家的f2因子進(jìn)行比較，結(jié)果采用新建立的流通池法和籃法測(cè)得兩廠家樣品的釋放曲線(xiàn)的f2因子分別為27和29，原標(biāo)準(zhǔn)采用的小杯法測(cè)得兩廠家的釋放曲線(xiàn)的f2因子為45，在3種方法下，兩廠家的樣品均不相似。

采用多個(gè)模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，最終采用擬合效果最優(yōu)的Weibull模型(r＞0.999)得到溶出參數(shù)，比較達(dá)到重要溶出率所需要的時(shí)間T25、T50、Td和T80(藥物溶出25%、50%、63.2%和80%所需的時(shí)間)，結(jié)果見(jiàn)表2。在不同方法下，分別將兩廠家樣品的各特征溶出參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果A廠樣品在籃法和流通池法下所得的溶出參數(shù)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，B廠樣品在3種方法下，兩兩方法間的溶出參數(shù)均存在顯著性差異(P＜0.01)。

3 討論

3.1 釋放度條件優(yōu)化

本研究對(duì)藥品的放置方式進(jìn)行考察，分別采用平放在玻璃珠面上和使用片夾兩種方式進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果兩種放置方式結(jié)果無(wú)差異。在進(jìn)行B廠樣品的研究過(guò)程中，曾采用孔徑為0.7μm的Whatman GF/F玻璃纖維濾膜置于在線(xiàn)的過(guò)濾器，結(jié)果因?yàn)檫^(guò)濾器處壓力過(guò)高，流通池法有明顯漏液，籃法第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)未取到供試品溶液。換成2.7μm的Whatman GF/D玻璃纖維濾膜，兩問(wèn)題均得到解決。A廠樣品因其未崩散，未發(fā)現(xiàn)上述問(wèn)題。

3.2 釋藥狀態(tài)與處方分析

本研究在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，A廠樣品在3種裝置下，藥片均漸漸溶脹，釋放試驗(yàn)結(jié)束時(shí)藥片呈半透明的溶脹狀態(tài)；B廠樣品在各裝置下，藥片約1h全部崩解。將兩廠家樣品的輔料進(jìn)行對(duì)比，A廠使用的輔料中有羥丙甲纖維素，其在冷水中溶脹成澄清或微渾濁的膠體溶液，該輔料的加入可能與該廠家樣品最終呈半透明的溶脹狀態(tài)有關(guān)。在3種不同釋放度檢查方法下，A廠樣品所得的到釋放數(shù)據(jù)極其相似，而B(niǎo)廠樣品所得數(shù)據(jù)則差異較大，這可能與兩廠家的處方不同有關(guān)，是否還與兩廠家的工藝有關(guān)，還需要進(jìn)一步的研究。另外，甲硝唑口頰片治療口腔疾病發(fā)揮的是局部作用，如果藥品迅速崩解，其停留在口腔的時(shí)間將會(huì)縮短，不利于其局部作用的發(fā)揮，且筆者曾研究市售兩廠家的甲硝唑口腔黏貼片(因規(guī)格和名稱(chēng)不同，處方差異大，未在本文中進(jìn)行對(duì)比)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束仍保持半透明的溶脹狀態(tài)，建議B廠對(duì)其產(chǎn)品的處方和工藝進(jìn)行優(yōu)化。

表1 兩廠家樣品不同溶出方法下的累積釋放百分率(%, n=6)Tab.1 Cumulative release percentages of samples from two manufacturers with different test methods (%, n=6)

表2 各廠家樣品不同方法的威布爾參數(shù)計(jì)算結(jié)果Tab.2 Weibull parameters of metronidazolebuccal tablets

3.3 本品種下流通池法與籃法比較

新建立的流通池法和籃法測(cè)得兩廠家樣品的釋放曲線(xiàn)的f2因子非常接近(分別為27和29，釋放曲線(xiàn)均不相似)，兩方法均可用于甲硝唑口頰片的釋放度檢查。釋放度實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，兩廠藥品呈現(xiàn)不同的狀態(tài)，A廠藥品不崩散，B廠藥品崩散，在籃法和流通池法下所得的釋放參數(shù)中，A廠藥品無(wú)顯著性差異，B廠藥品存在顯著性差異。由此可初步得出，籃法和流通池法均可用于A廠樣品的釋放度檢查，是否可適用于所有不崩散的藥品，還需要對(duì)不崩散的不同品種藥品進(jìn)行進(jìn)一步研究。由于流通池法溶出度儀的價(jià)格昂貴(是普通溶出儀的幾倍甚至10倍)，如果能得出對(duì)某一類(lèi)制劑(如非崩散型制劑)進(jìn)行釋放度檢查，流通池法與傳統(tǒng)方法(如籃法)能得出相似溶出參數(shù)的推論，可節(jié)約資源，降低廠家的生產(chǎn)成本。

3.4 關(guān)于甲硝唑口腔貼片的建議

中國(guó)藥典2015年版四部制劑通則中對(duì)口腔貼片的描述是黏貼于口腔，經(jīng)黏膜吸收后起局部或全身作用的片劑[12]。而我國(guó)批準(zhǔn)的以甲硝唑?yàn)閱我辉纤幘植坑糜谘例l炎、牙周炎、冠周炎及口腔潰瘍的片劑通用名為甲硝唑口腔黏貼片(有甲、乙兩個(gè)公司藥品)和甲硝唑口頰片(有A、B兩個(gè)廠家藥品)。其中甲硝唑口腔黏貼片的藥品特征為規(guī)格5mg，藥片小而薄(片重約0.04g)，藥片釋放度實(shí)驗(yàn)結(jié)束后不崩散，甲硝唑口頰片的藥品特征為規(guī)格3mg，藥片大而厚(片重約0.5g)，藥片釋放度實(shí)驗(yàn)結(jié)束后A廠藥品不崩散，B廠藥品崩散。兩通用名下相應(yīng)藥品的處方差異大，主要是輔料種類(lèi)和用量差別大，釋放行為差異大(主要是甲硝唑口頰片兩廠家產(chǎn)品間的差異)，但二者均為甲硝唑口腔貼片，適應(yīng)癥與用法均相同。建議相關(guān)部門(mén)規(guī)范該類(lèi)藥品的通用名，建議統(tǒng)一為甲硝唑口腔貼片，與藥典制劑通則一致，有助于研究者對(duì)該類(lèi)藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)節(jié)約了藥品流通及管理過(guò)程的資源。同時(shí)建議藥品的生產(chǎn)廠家及時(shí)對(duì)藥品的處方和工藝進(jìn)行優(yōu)化，找出影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵參數(shù)，進(jìn)行深入研究，提升自身藥品的質(zhì)量，確保藥品質(zhì)量的可靠性和穩(wěn)定性，以提升藥品質(zhì)量來(lái)增加產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。