焦丹，劉越

酒泉市人民醫(yī)院1病理科，2腫瘤科，甘肅 酒泉7350000

乳腺癌是起源于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，其發(fā)病率居歐美發(fā)達國家女性惡性腫瘤第1位，近年來，隨著中國生活水平的不斷提高、生活方式及環(huán)境的改變，其發(fā)病率不斷升高，嚴重威脅中國女性健康[1-2]。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的演變過程，促癌基因的激活、抑癌基因的失活及細胞凋亡的抑制在該過程中發(fā)揮重要的作用[3]，其中參與細胞凋亡調(diào)節(jié)的p53和B淋巴細胞瘤/白血病-2（B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）基因的激活與乳腺癌有密切的關(guān)系。由p53基因編碼的蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，p53基因突變后可誘發(fā)多種腫瘤[4]，Bcl-2是重要的凋亡因子，其表達的蛋白可與該家族其他蛋白通過復雜的機制調(diào)節(jié)細胞凋亡。本研究分析了122例乳腺癌患者的臨床資料，旨在探究p53和Bcl-2的表達情況與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系，為乳腺癌的輔助治療、預后評估和生物學行為提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2018年6月于酒泉市人民醫(yī)院診治的乳腺癌患者。納入標準：①接受乳腺癌手術(shù)治療且術(shù)后病理檢查確診為乳腺癌；②腫瘤無遠處轉(zhuǎn)移，無鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；③病歷資料完整。排除標準：①合并其他部位的惡性腫瘤；②術(shù)前接受了新輔助化療。根據(jù)納入、排除標準，共納入122例乳腺癌患者。所有患者均為女性，年齡23～79歲，平均年齡為（45.7±9.2）歲；腫瘤最大徑為（3.30±0.94）cm；病理類型：浸潤型導管癌87例，浸潤性小葉癌26例，其他9例；臨床分期：Ⅰ期36例，Ⅱ期46例，Ⅲ期40例；組織分化程度：高分化60例，中分化42例，低分化20例；雌激素受體（estrogen receptor，ER）狀態(tài)：陽性63例，陰性59例；孕激素受體（progestogen receptor，PR）狀態(tài)：陽性54例，陰性68例；人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）狀態(tài)：陽性 31例，陰性91例；Ki-67表達：陽性84例，陰性38例。

1.2 治療方法

122例患者中88例行乳腺癌改良根治術(shù)治療，19例行乳腺癌常規(guī)根治術(shù)治療，15例行乳腺癌保乳術(shù)治療，術(shù)后根據(jù)患者病理及免疫組織化學結(jié)果進行后續(xù)放化療和（或）內(nèi)分泌治療和（或）靶向治療。

1.3 檢測方法及判斷標準

患者病理資料由病歷中病理報告獲得，術(shù)后腫瘤組織標本采用免疫組織化學法進行檢測，檢測所用的抗體及試劑盒均購自北京中杉金橋生物科技有限公司，檢測步驟嚴格按照說明書操作。Bcl-2蛋白染色陽性細胞表現(xiàn)為細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核呈棕黃色顆粒，以細胞質(zhì)為主。p53、ER、PR及Ki-67染色陽性細胞表現(xiàn)為細胞核內(nèi)呈棕黃色顆?；驁F塊。上述指標陰性為其陽性細胞比例＜10%，陽性為其陽性細胞比例≥10%。HER2檢測結(jié)果判斷：HER2陽性為陽性細胞比例≥75%；或25%≤陽性細胞比例＜75%，進一步熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）檢測到HER2基因擴增；HER2陰性為陽性細胞比例＜25%；或25%≤陽性細胞比例＜75%，進一步FISH未檢測到HER2基因擴增。

1.4 觀察指標

統(tǒng)計所有患者的p53、Bcl-2表達情況，統(tǒng)計年齡、腫瘤最大徑、病理類型、臨床分期、組織分化程度、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER表達情況、PR表達情況、HER2表達情況及Ki-67的表達情況等臨床特征，并分析p53、Bcl-2表達與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；多因素分析采用Logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者 p53及Bcl- 2陽性表達影響因素的單因素分析

不同臨床分期、組織分化程度的乳腺癌患者的p53及Bcl-2陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=14.529、15.201，P＜0.01；χ2=16.279、10.959，P＜0.01）；不同腫瘤最大徑的乳腺癌患者的Bcl-2陽性表達率比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.178，P＜0.05）；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性、PR陰性的乳腺癌患者的p53陽性表達率均明顯高于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陽性、PR陽性的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=11.586、10.328、6.897，P＜0.01）；無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的Bcl-2陽性表達率明顯高于有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=14.992，P＜0.01）；不同年齡、病理類型、HER2狀態(tài)、Ki-67表達情況的乳腺癌患者的p53及Bcl-2陽性表達率比較，不同腫瘤最大徑的乳腺癌患者的p53陽性表達率比較，不同ER、PR陽性表達率的乳腺癌患者的Bcl-2陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表1）

2.2 乳腺癌患者 p53及Bcl- 2陽性表達影響因素的多因素Logistic回歸分析

將上述單因素分析中有統(tǒng)計學意義的臨床特征作為自變量，將乳腺癌患者p53及Bcl-2陽性表達作為因變量進行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ期及低分化均是p53陽性表達的獨立危險因素（P＜0.01），ER陽性表達為p53陽性表達的保護因素（P＜0.01）（表2）；臨床分期為Ⅲ期、低分化、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是Bcl-2陽性表達的保護因素（P＜0.01）（表3）。而單因素分析中與p53表達相關(guān)的PR表達情況及與Bcl-2表達相關(guān)的腫瘤最大徑，多因素分析差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），因此，未在Logistic回歸分析結(jié)果中顯示。

表1 不同臨床特征的乳腺癌患者的 p53及Bcl- 2陽性表達情況

表2 122例乳腺癌患者 p53陽性表達的Logistic回歸分析

3 討論

細胞凋亡是由一系列基因調(diào)控的程序化細胞主動自殺的過程，是通過外源性或內(nèi)源性的凋亡信號激活細胞內(nèi)編碼的自殺程序而觸發(fā)，是維持自身穩(wěn)定及清除異常細胞的重要機制[5-6]。對細胞凋亡相關(guān)基因如p53及Bcl-2的研究一直是生命科學的熱點，其在乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展中起著重要的作用。研究乳腺癌p53及Bcl-2的表達及其與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系，可為乳腺癌的輔助治療、預后評估提供參考。

p53是20世紀80年代發(fā)現(xiàn)并確定的一種抑癌基因，其定位于染色體17p13.1，由11個外顯子和10個內(nèi)含子構(gòu)成，其產(chǎn)物可啟動DNA損傷的細胞凋亡程序使其凋亡，一旦其發(fā)生缺失等突變，則會喪失抑制腫瘤的功能，導致細胞癌變[7]。但p53蛋白的半衰期較短，難以檢出，僅半衰期長的突變型p53蛋白可應用免疫組織化學法檢出[8]。多項研究提示，p53蛋白檢測在評價乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預后方面有重要的意義，其可作為預測乳腺癌的標志物[9-11]。本研究結(jié)果顯示，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的p53陽性表達率明顯高于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.01），表明p53表達情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，同時不同臨床分期、組織分化程度的乳腺癌患者的p53表達情況比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），且臨床分期為Ⅲ期及低分化的患者的p53陽性表達率高；多因素Logistic回歸分析其差異仍有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），這與部分研究者的結(jié)論相符[12-13]。乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是評估患者臨床分期及預后的重要指標，也是術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的因素之一[14]，ER及PR陽性表達提示患者術(shù)后預后相對較好，HER2及Ki-67陽性表達提示腫瘤增殖快，易侵襲，預后較差。本研究結(jié)果顯示，ER陰性、PR陰性的乳腺癌患者的p53陽性表達率均明顯高于ER陽性、PR陽性的患者（P＜0.01），多因素Logistic回歸分析亦顯示ER陽性表達是p53陽性表達的保護因素。綜上，不利于預后的因素（有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期高及組織分化程度低）是p53陽性表達的獨立危險因素，即臨床分期高、組織分化程度低、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，p53陽性表達率升高；有利于預后的因素（ER陽性表達）是p53陽性表達的保護因素，即ER陽性表達的患者，p53表達表達率降低，這提示p53基因陽性表達預示預后不良。

Bcl-2基因是最受關(guān)注及研究最多的凋亡基因，其產(chǎn)物通過抑制細胞凋亡參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其調(diào)控細胞凋亡主要通過線粒體途徑實現(xiàn)[15]。Bcl-2蛋白作用于線粒體并抑制線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放，同時阻斷細胞色素C從線粒體釋放，進而抑制細胞凋亡[16]。值得注意的是，雖然Bcl-2表達抑制了細胞凋亡，但同時也使腫瘤細胞周期延長，從而抑制了腫瘤細胞的快速增殖[17]。研究顯示，Bcl-2陽性表達與腫瘤惡性程度呈負相關(guān)，可作為乳腺癌的預后因素[18]。亦有研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2在高分化的腫瘤組織中的陽性表達率低于低分化組織，Bcl-2陽性表達與組織分化程度呈負相關(guān)[19]；Bcl-2陰性表達、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的生存期縮短[20]。上述結(jié)論與本研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果顯示：有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ期、低分化是Bcl-2陽性表達的保護因素，即臨床分期高、低分化、無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，Bcl-2的陽性表達率升高。因此，Bcl-2陽性表達預示患者預后相對較好。

綜上所述，臨床分期為Ⅲ期、低分化、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性的乳腺癌患者的p53陽性表達率升高，p53陽性表達預示預后不良；臨床分期為Ⅲ期、低分化、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的Bcl-2陽性表達率降低，Bcl-2陽性表達預示患者預后相對較好；p53及Bcl-2陽性表達情況與乳腺癌患者的臨床特征密切相關(guān)。檢測p53及Bcl-2的陽性表達情況對評估患者的病情及預后有參考價值。