沈青義，張傳師，羅正中，雍康，何清，王一，曹隨忠

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，臨洮 730500；2.重慶三峽職業(yè)學(xué)院動物科技系，重慶 404155；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，成都 611130）

寄生蟲病是奶牛養(yǎng)殖中常見的疾病。寄生蟲在侵入、移行和定居過程中，以各種方式對奶牛機體造成危害，包括奪取奶牛的營養(yǎng)；對奶牛造成機械性損傷；寄生蟲排出的代謝產(chǎn)物、排泄物和分泌物等可引起奶牛應(yīng)激反應(yīng)，造成免疫抑制[1]；奶牛的抗病能力下降，給其他微生物的侵入創(chuàng)造了條件。長期如此，寄生蟲病可引起奶牛生長發(fā)育受阻[2]、產(chǎn)奶量降低[3]和飼料報酬下降。在臨床上，寄生蟲病可以造成產(chǎn)奶量下降、乳脂率降低、產(chǎn)奶高峰期縮短、流產(chǎn)、不孕等，嚴(yán)重時可導(dǎo)致奶牛死亡[4]。據(jù)報道，在美國，胃腸道線蟲每年給養(yǎng)牛業(yè)造成的經(jīng)濟損失超過20億美元[5]。在我國，奶牛寄生蟲感染普遍存在[6～13]。

奶牛常見消化道寄生蟲病病原種類較多[13,14]，常見的線蟲有捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、細(xì)頸線蟲、牛弓首蛔蟲、牛仰口線蟲和毛首線蟲等；常見的絳蟲有莫尼茨絳蟲；常見的吸蟲有肝片吸蟲、前后盤吸蟲、矛形雙腔吸蟲和胰闊盤吸蟲等；常見的原蟲有艾美耳球蟲、微小隱孢子蟲、安氏隱孢子蟲、藍氏賈第鞭毛蟲等。通過檢測奶牛糞便中的寄生蟲蟲卵或卵囊可以了解奶牛寄生蟲的感染情況，檢查方法經(jīng)濟、簡單、易操作，而且對奶牛造成的應(yīng)激小[15,16]。本試驗通過糞便檢測，調(diào)查奶牛寄生蟲感染情況，為該奶牛場防治寄生蟲病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 糞樣

2018年1月20日，在四川崇州市某奶牛養(yǎng)殖場（存欄犢牛80頭、育成牛46頭、泌乳牛147頭），隨機采集新鮮奶牛糞樣90份，其中犢牛15份、育成牛25份、泌乳牛50份，每份150～200g，采集過程中嚴(yán)格避免用具相互交叉污染。每份糞樣保鮮袋分裝，逐一編號登記，4℃冷藏保存，帶回實驗室進行糞樣寄生蟲檢查。

1.1.2 試劑及儀器

0.1mol/L NaOH溶液、飽和食鹽水。光學(xué)顯微鏡（CX21FS1、OLYMPUS）、普通離心機（TD-4Z臺式低速離心機、四川蜀科儀器有限公司）、天平（恒佳牌JYT-2架盤天平、常熟市佳衡天平儀器有限公司）等。

1.2 方法

1.2.1 飽和鹽水漂浮法

稱取新鮮糞便2g置于燒杯中，加入10倍量的飽和鹽水，用鑷子攪拌均勻，用紗布過濾到平底管中，使管內(nèi)糞汁平于管口并稍隆起，用蓋片蓋于管口上，靜置15min，將蓋片置于載片上，顯微鏡下觀察糞便中蟲卵或卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小等特征，根據(jù)相關(guān)資料[4,15～17]進行初步鑒定。

1.2.2 離心沉淀法

稱取新鮮糞便5g，置于燒杯中，加入25mL清水，攪拌均勻。用紗布過濾到離心管中，離心3min，以轉(zhuǎn)速500r/min離心，傾去上層液體，加入清水混勻，再次離心，如此反復(fù)3次。最后傾去上層清液，留約沉淀物1/2體積的液體量，使用吸管吹吸均勻，取2滴糞汁置于載片上，加蓋片鏡檢。

1.2.3 斯陶爾氏計數(shù)法

斯陶爾氏計數(shù)法即蟲卵計數(shù)法，用于了解奶牛感染寄生蟲的強度。方法為：使用100mL的三角錐瓶，先加入0.1mol/L（或4%）NaOH溶液至75mL處，加入8g糞便，用鑷子攪拌均勻，使呈細(xì)致均勻的糞懸液，用吸管吸0.15mL糞懸液滴于2張載片上。顯微鏡下將載玻片上所有糞懸液中的蟲卵計數(shù)后，兩張載玻片上的總蟲卵數(shù)乘以62.5，即每克糞便中蟲卵數(shù)[18]（egg per gram feces，EPG）和每克糞便中的卵囊數(shù)（oocysts per gramme，OPG）。寄生蟲感染率=（感染陽性樣本數(shù)/總檢測樣本數(shù)）×100%；寄生蟲感染強度=0.15mL糞懸液中總蟲卵數(shù)×62.5。

2 結(jié)果

2.1 奶牛寄生蟲感染情況

如表1所示，本試驗共采樣90份，其中寄生蟲蟲卵/卵囊陽性54份，總感染率為60%（54/90）。犢牛寄生蟲感染率為73.33%（11/15），育成牛寄生蟲感染率為40.00%（10/25），泌乳牛寄生蟲感染率為66.00%（33/50）。結(jié)果表明，不同年齡階段的寄生蟲感染率不同，其中犢牛感染率最高，育成牛感染率最低。

表1 奶牛糞樣中蟲卵、卵囊檢出情況

2.2 奶牛線蟲、吸蟲、絳蟲感染情況

采用漂浮法和沉淀法處理糞樣，根據(jù)相關(guān)資料[4,15～17]鑒定蟲卵并進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。如表2所示，90份糞樣中，線蟲感染率為57.78%（52/90），檢測出的線蟲卵主要是圓線蟲卵、細(xì)頸線蟲卵、牛弓首蛔蟲卵、毛首線蟲卵；吸蟲感染率為6.67%（6/90），檢測出的吸蟲卵主要是前后盤吸蟲卵和肝片吸蟲卵；絳蟲感染率為1.11%（1/90），檢測出的絳蟲卵是擴展莫尼茨絳蟲卵、貝氏莫尼茨絳蟲卵。不同年齡階段的感染種類和感染率不同，在犢牛與育成牛的蠕蟲檢查中，主要感染的是線蟲，犢牛與育成牛的感染率分別為60%（9/15）、40%（10/25），未檢測出絳蟲卵與吸蟲卵。泌乳牛也主要感染線蟲，感染率為66%（33/50），但從糞樣中也檢測出吸蟲卵與絳蟲卵，感染率分別為12%（6/50）、2%（1/50）。圖1為檢出的部分蟲卵。

表2 奶牛糞樣中蠕蟲卵檢出情況

圖1 奶牛糞便中檢出的部分蟲卵（×400）

2.3 奶牛球蟲感染情況

如表3所示，90份糞樣中，只檢測出艾美耳球蟲卵囊，未檢測到隱孢子蟲卵囊、賈第鞭毛蟲卵囊等。球蟲卵囊陽性糞樣13份，總感染率為14.44%（13/90）。檢出的球蟲卵囊有邱氏艾美耳、牛艾美耳和橢圓艾美耳球蟲卵囊（圖1F）。犢牛對艾美耳球蟲更易感，犢牛感染率最高，為60.00%（9/15）。育成牛及泌乳牛的感染率較低，分別是8%（2/25）和4%（2/50）。

表3 奶牛糞樣中球蟲卵囊檢出情況

2.4 奶牛線蟲卵、吸蟲卵和球蟲卵囊感染強度

如表4所示，犢牛、育成牛、泌乳牛的線蟲卵感染強度均較低，EPG范圍在0～375；吸蟲卵只從泌乳牛糞樣中檢出，EPG范圍為125～250；球蟲卵囊各年齡階段均有所感染，但感染強度不高，其中犢牛的感染強度最高，OPG范圍為0～562.5。

表4 線蟲卵、吸蟲卵和球蟲卵囊感染強度

2.5 奶牛寄生蟲混合感染情況

奶牛寄生蟲感染多為數(shù)種寄生蟲感染，如表5和圖2所示，該奶牛場的犢牛、育成牛、泌乳牛均存在混合感染現(xiàn)象，混合感染率為33.33%。犢牛線蟲與球蟲混合感染現(xiàn)象尤為嚴(yán)重，混合感染率達到63.64%（7/11）。

圖2 奶牛寄生蟲混合感染情況

表5 奶牛寄生蟲混合感染情況

3 討論

3.1 奶牛線蟲感染情況

根據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示，該奶牛場寄生蟲感染普遍，總陽性率達到60%（54/90）。主要感染線蟲，其次為球蟲和吸蟲。牛線蟲病原種類較多，初步鑒定有圓線蟲、細(xì)頸線蟲、牛弓首蛔蟲和毛首線蟲。本調(diào)查結(jié)果與王正榮和薄新文[11]調(diào)查的石河子地區(qū)奶牛寄生蟲感染結(jié)果基本一致。該奶牛場在過去一年未進行驅(qū)蟲，且飼養(yǎng)管理環(huán)境較差，這可能是導(dǎo)致線蟲感染普遍的原因。

3.2 奶牛吸蟲感染情況

犢牛和育成牛糞樣中未檢測出吸蟲卵，只從泌乳牛糞樣中檢測出吸蟲卵，為片形吸蟲卵和前后盤吸蟲卵。泌乳牛吸蟲感染率為12%（6/50），感染強度EPG范圍為125～250。與之相對，王汝代等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省散養(yǎng)荷斯坦牛腸道寄生蟲吸蟲卵檢出率為87.8%，吸蟲蟲卵檢出率高，王華東和廖黨金[18]調(diào)查西南地區(qū)奶牛前后盤吸蟲感染率也高達86%，吸蟲感染率均比該奶牛場高。根據(jù)吸蟲的流行病學(xué)，吸蟲需要淡水螺作為中間宿主，而淡水螺棲息的地方多在水邊的青草處，奶牛飼料中添加的青草或者散養(yǎng)管理則成為吸蟲感染的主要原因。本次調(diào)查的奶牛場是集約化養(yǎng)殖場，其采用的集約化養(yǎng)殖和飼喂干草飼料的管理方式可能是該奶牛場吸蟲感染率低的原因。而北京地區(qū)[6,7]奶牛寄生蟲檢測未檢出吸蟲，原因也是奶牛場主要以圈養(yǎng)方式為主，主要飼喂干草和青貯料，切斷了吸蟲的傳播途徑，有效防止了吸蟲病的傳播。據(jù)報道，奶牛片形吸蟲病可造成奶牛的產(chǎn)奶量降低10%～20%，犢牛體重下降5%～15%，Howell等[19]研究發(fā)現(xiàn)肝片吸蟲陽性奶牛的產(chǎn)奶量比未感染牛低15%。

3.3 奶牛球蟲感染情況

球蟲檢查只檢測出艾美耳球蟲卵囊，未檢測到隱孢子蟲卵囊、賈第鞭毛蟲卵囊等。球蟲卵囊陽性糞樣13份，感染率14.44%（13/90）。主要感染種類有邱氏艾美耳、牛艾美耳和橢圓艾美耳球蟲。本調(diào)查結(jié)果與王正榮和薄新文[11]調(diào)查的石河子地區(qū)奶牛寄生蟲感染結(jié)果差異不大。在本次檢查中，犢牛寄生蟲感染率最高，為60.00%（9/15），明顯高于育成牛及泌乳牛，且感染強度（犢牛OPG范圍為0～562.5）也明顯高于育成牛與泌乳牛（OPG范圍為0～62.5），由于犢牛對球蟲的免疫力低，更易感染和發(fā)病。5%的犢牛感染球蟲后有臨床表現(xiàn)，95%的呈亞臨床經(jīng)過。球蟲病是引起犢牛腹瀉的一個重要原因，嚴(yán)重者可導(dǎo)致犢牛死亡。年齡大的牛一般為無癥狀帶蟲者，帶蟲者可通過糞便不斷向環(huán)境排出卵囊，犢牛通過接觸卵囊而感染。犢牛感染后會損害腸絨毛，導(dǎo)致犢牛的生長發(fā)育不良[20]，因此應(yīng)該重視奶牛球蟲病防治。潮濕、衛(wèi)生狀況較差的牛舍中的牛易感染球蟲[21]。本奶牛場球蟲感染普遍，主要是因為該牛場未定期驅(qū)蟲，糞便清理不及時導(dǎo)致環(huán)境衛(wèi)生狀況較差。

3.4 奶?；旌细腥厩闆r

該奶牛場寄生蟲感染種類較多，混合感染率達33.33%（18/54），混合感染情況普遍?；旌细腥韭实母叩鸵卜从沉伺龅墓芾砗托l(wèi)生狀況的好壞[22]，該奶牛場為牛舍內(nèi)散養(yǎng)式飼養(yǎng)，糞便堆積，清掃不及時，導(dǎo)致衛(wèi)生狀況較差，糞水潴留也會造成寄生蟲反復(fù)感染，導(dǎo)致混合感染普遍。經(jīng)調(diào)查了解，該奶牛場過去一年未進行寄生蟲防治，這也可能是導(dǎo)致寄生蟲感染率較高的原因。因此，應(yīng)該重視寄生蟲防治，加強奶牛飼養(yǎng)管理，提高環(huán)境衛(wèi)生水平。由于場內(nèi)寄生蟲多為混合感染，驅(qū)蟲藥應(yīng)選擇廣譜驅(qū)蟲藥，驅(qū)蟲程序可參考沈俊樂等[20]的研究調(diào)查結(jié)果。

4 結(jié)論

該奶牛場寄生蟲感染普遍，總感染率為60%（54/90），主要為線蟲，其次是球蟲和吸蟲。混合感染率達33.33%（18/54），混合感染情況普遍。該牛場未進行寄生蟲驅(qū)蟲和牛場衛(wèi)生情況較差可能是導(dǎo)致寄生蟲感染率高的主要原因。