張巧云，歐紅玲，王 巖，吳繼敏，李 娜，白 靜，李曉寧，王欣茹

（1.火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，北京100088；2.火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心胃食管反流中心，北京100088）

胃食管反流?。╣astroesophageal reflux disease，GERD）是常見的消化道疾病，指胃內(nèi)容物或十二指腸內(nèi)容物反流入食管、咽喉甚至呼吸道等部位，從而引起燒心、不典型胸痛、吞咽困難等不適感。近幾年GERD發(fā)病率越來越高［1］，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量，該類疾病臨床表現(xiàn)多樣，缺少特異體征，導(dǎo)致診斷較為困難。目前臨床GERD的診斷多數(shù)采用臨床癥狀加24 h食管pH監(jiān)測、內(nèi)鏡、鋇餐等有創(chuàng)檢查綜合評價(jià)［2］，患者的依從性差，檢查費(fèi)用高、普及率不高。臨床急需簡單快速、創(chuàng)傷性小、經(jīng)濟(jì)的新型檢驗(yàn)技術(shù)協(xié)助診斷。體外檢測具有標(biāo)本易得（血液、痰、唾液或反流物）、檢測簡便、費(fèi)用低、檢出率高、病人檢查前后無不適反應(yīng)等優(yōu)勢，易于患者接受。本研究探討血清胃蛋白酶原水平檢測在GERD診斷中的價(jià)值，旨在為臨床診斷提供新的檢驗(yàn)指標(biāo)。現(xiàn)報(bào)告如下。

材料和方法

1 一般資料

選取本院2018年8月至2019年2月確診的胃食管反流病患者40例，其中男22例，女18例，年齡28～84歲，平均49.0±17.3歲。胃食管反流組納入標(biāo)準(zhǔn)（以下任一項(xiàng)符合）［3］：①胃鏡提示食管炎；②病理性酸反流（24 h pH-阻抗監(jiān)測DeMeester評分＞14.7或者反流總次數(shù)＞73）；③典型癥狀＋抑酸治療有效。另選擇40例同期健康體檢者為對照組，其中男24例，女16例，年齡29～73歲，平均44.0±12.5歲。兩組研究對象均為同期在院，隨機(jī)選擇獲得，在性別、年齡構(gòu)成上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究均獲得患者知情同意，并在血清采集檢測前均未采取過任何治療措施。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①有嚴(yán)重的心、肺，腹基礎(chǔ)疾病者或有精神異常者。②有凝血功能障礙或正在服用阿司匹林、華法林等抗凝藥者。③胃癌、萎縮性胃炎患者或曾行胃部手術(shù)史。

2 方法

被檢者空腹采集靜脈血5mL置于真空促凝管內(nèi)，離心分離血清，-80℃冰凍保存?zhèn)溆?。采用全自?dòng)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法（雅培I2000及配套試劑）檢測PGI、PGII，并計(jì)算PGI／PGII比值（PGR）。另2種比對試劑盒分別采用化學(xué)發(fā)光法（國產(chǎn)某A產(chǎn)品）和速率散射比濁POCT法（國產(chǎn)某B產(chǎn)品）。所有質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品及檢測試劑均由各公司提供。各指標(biāo)參考范圍［4］：PGI＞70ng／mL，PGI／PGII＞3。

3 比對試驗(yàn)

隨機(jī)選取42份標(biāo)本，包含有低、中、高各濃度水平，標(biāo)本均無黃疸、溶血或脂血，本研究以雅培I2000作為參考儀器，國產(chǎn)某A產(chǎn)品與國產(chǎn)某B產(chǎn)品作為實(shí)驗(yàn)儀器。將所選取的標(biāo)本分別在3臺儀器上平行檢測PGI與PGII，對檢測結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析［5］。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)量資料用表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ROC曲線下面積評估三項(xiàng)指標(biāo)對GERD的臨床診斷價(jià)值，用EXCEL軟件做線性回歸統(tǒng)計(jì)，得到回歸方程：Y＝b X＋a及相關(guān)系數(shù)。

結(jié) 果

1 胃食管反流組與健康對照組血清中PGI、PGII及PGR水平比較

胃食管反流組PGI、PGR水平與對照組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），胃食管反流組PGII水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 2組患者血清PGI、PGII及PGR水平的比較（）

表1 2組患者血清PGI、PGII及PGR水平的比較（）

組別 例數(shù) PGI（ng／mL）PGII（ng／mL） PGR GERD 40 106.71±57.89 13.72±8.91 8.41±2.96健康對照組 40 62.15±43.98 10.52±7.95 6.47±2.87 t值 2.677 1.195 2.115 P值0.01 0.239 0.04

2 PGI、PGII及PGR對胃食管反流的診斷

根據(jù)ROC數(shù)據(jù)分析，PGI用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.739，介于0.7～0.9之間，表明PGI具有診斷價(jià)值，對于胃食管反流的診斷具有一定的指示性。PGII用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.614，低于0.7，表明PGII對診斷胃食管反流病準(zhǔn)確性較低，PGR用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.696，略低于0.7，表明PGI／PGII診斷價(jià)值不大，診斷價(jià)值依次為PGI＞PGI／PGII＞PGI。見圖1、2、3。

圖1 PGI的ROC曲線

圖2 PGII的ROC曲線

圖3 PGI／PGII的ROC曲線

3 三種檢測系統(tǒng)的相關(guān)分析

結(jié)果表明，國產(chǎn)某A產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)對PGI、PGII及PGI／PGII檢測的相關(guān)性都較好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9947、0.9893、0.8063，見表2。國產(chǎn)某B產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)對PGI檢測的相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)r為0.9427，PGII與PGI／PGII兩者與雅培檢測系統(tǒng)相關(guān)性稍差，分別為0.7957、0.7695，見表3。

表2 國產(chǎn)某A產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)的相關(guān)系數(shù)和回歸分析

表3 國產(chǎn)某B產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)的相關(guān)系數(shù)和回歸分析

討 論

胃食管反流病已成為一種危害極大的慢性疾病，臨床表現(xiàn)極具特異性和復(fù)雜性［6］。對其診治難易程度不一，癥狀可為頻發(fā)或偶發(fā)，需要多種診斷手段聯(lián)合確診或排除GERD。目前臨床常用的檢查為反流監(jiān)測、PPI實(shí)驗(yàn)、胃鏡、喉鏡、高分辨率測壓和造影，患者對這些有創(chuàng)檢查往往難以接受，尋找一種簡單易行體外檢測方法是當(dāng)務(wù)之急，新的診斷方法如血清胃蛋白酶原檢測，簡便無創(chuàng)，有很好的應(yīng)用前景［7］。

胃蛋白酶原屬于天冬氨酸蛋白酶家族，由375個(gè)氨基酸組成的蛋白多肽鏈，是胃蛋白酶（蛋白水解酶）的非活性前體［8］。免疫學(xué)上可分為2型：胃蛋白酶原I（PGI）和胃蛋白酶原II（PGII），PGI由胃底腺分泌，PGII由胃底腺、幽門腺和Brunner腺分泌。PG由高爾基體分泌入胃腔，然后少量PG通過毛細(xì)血管進(jìn)入血液循環(huán)，血液濃度在通常情況下比較穩(wěn)定［9-10］，波動(dòng)較小。

有大量報(bào)道發(fā)現(xiàn)萎縮性胃炎和胃癌患者血清PG和PGR的變化顯著，為診斷和評估病情提供重要價(jià)值［11］，然而對于PG和PGR在食管反流病中變化如何這方面研究甚少。本研究為了驗(yàn)證PGI及PGI／PGII血清學(xué)檢測在GERD診斷中的應(yīng)用價(jià)值，選取了40例GERD患者和40例健康體檢者作為研究對象進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，胃食管反流病患者血清中PGI及PGI／PGII水平明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且ROC曲線分析顯示，PGI對胃食管反流病診斷的曲線下面積為0.739，具有一定的診斷價(jià)值，這與顧紅［12］的研究結(jié)論相近，提示血清胃蛋白酶原的檢測可作為胃食管反流病診斷的一項(xiàng)新型指標(biāo)。盡管仍然需要更多大樣本的研究來證明胃蛋白酶原在GERD診斷中的靈敏度及特異性，但將胃蛋白酶原測定作為GERD的輔助診斷試驗(yàn)還是比較可靠的，值得在GERD篩查中推廣應(yīng)用，為臨床GERD的診斷提供一定的參考依據(jù)。目前實(shí)驗(yàn)室血清胃蛋白酶原的檢測并未普及，主要檢測方法有化學(xué)發(fā)光法、微粒子發(fā)光法和免疫比濁POCT法，本研究對三家產(chǎn)品進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法與進(jìn)口微粒子化學(xué)發(fā)光法相關(guān)性不錯(cuò)，三項(xiàng)結(jié)果均符合，國產(chǎn)免疫比濁POCT法試劑盒與進(jìn)口微粒子化學(xué)發(fā)光法試劑盒對于PGI的檢測相關(guān)性較好，對于PGII及PGI／PGII檢測，國產(chǎn)POCT法試劑盒較進(jìn)口發(fā)光法相關(guān)性稍差。綜上所述，目前實(shí)驗(yàn)室儀器具有良好的可比性，符合質(zhì)量目標(biāo)要求，具有高通量的大型儀器或檢測快速、成本低廉、攜帶方便的小型床旁快速設(shè)備能夠滿足不同層次中小型實(shí)驗(yàn)室、專科實(shí)驗(yàn)室的需求。

胃蛋白酶原檢測是近年來診斷反流的熱點(diǎn)，具有方便、廉價(jià)的優(yōu)點(diǎn)，有望成為篩查GERD的重要手段。下一步仍需要大量收集標(biāo)本，進(jìn)一步驗(yàn)證胃蛋白酶原對GERD診斷的臨床應(yīng)用價(jià)值，并且可進(jìn)一步研究GERD的其他實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)［13-15］，如胃泌素-17、白介素-6、胃蛋白酶、幽門螺桿菌（呼氣試驗(yàn)和血清HP-IgG）、痰及肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)分析，旨在提高GERD的診斷率，避免漏診甚至誤診，為GERD患者帶來更多的福音。