黃光墉 王金生 唐蘇鐵

【摘要】 目的：研究對不同宮頸病變的患者檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞臨床價值。方法：選取2017年5月-2018年8月本院擬行陰道鏡檢查和液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的健康女性30例為對照組。另選取同期接受上述兩項檢查的宮頸癌患者、慢性宮頸炎與CIN1患者、CIN2～CIN3患者各30例，設(shè)為宮頸癌組、A組以及B組。采集上述四組清晨空腹靜脈血，進行外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達水平的檢測。分析外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在不同臨床分期宮頸癌患者中的表達情況。結(jié)果：在外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平方面比較，對照組、A組、B組、宮頸癌組呈逐漸降低趨勢;而在外周血CD8+水平方面比較，對照組、A組、B組、宮頸癌組呈逐漸升高趨勢，且經(jīng)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在外周血CD4+CD25+CD127-水平方面比較，對照組、A組、B組、宮頸癌組呈逐漸升高趨勢，且經(jīng)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。宮頸癌臨床分期為Ⅲ期的患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ期患者，而CD8+、CD4+CD25+CD127-水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P<0.05）。結(jié)論：不同宮頸病變的患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達水平存在明顯差異，檢測上述指標(biāo)表有利于輔助診斷宮頸病變。

【關(guān)鍵詞】 宮頸病變; T淋巴細(xì)胞; 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞; 臨床分期

【Abstract】 Objective：To study and analyze the clinical value of peripheral blood T lymphocyte subsets and regulatory T cells in patients with different cervical lesions.Method：30 healthy women who were to undergo colposcopy and liquid-based TLC in our hospital from May 2017 to August 2018 were selected as the control group.In addition，30 patients with cervical cancer were selected as cervical cancer group，30 patients with chronic cervicitis were selected as group A and 30 patients with CIN2-CIN3 were selected as group B.The peripheral blood T lymphocyte subsets and regulatory T lymphocyte expression levels were detected in the four groups of fasting venous blood in the morning.The expression of peripheral blood T lymphocyte subsets and regulatory T cells in patients with cervical cancer at different clinical stages were analyzed.Result：In the peripheral blood levels of CD3+，CD4+，CD4+/CD8+ in the control group，group A，group B and cervical cancer group showed a trend of gradually reduce;the level of peripheral blood CD8+ in the control group，group A，group B，and cervical cancer group showed a trend of increasing gradually，the differences were statistically significant（P<0.05）.The levels of CD4+CD25+CD127- in peripheral blood were compared，with A gradually increasing trend in the control group，group A，group B，and cervical cancer group，the difference was statistically significant（P<0.05）.The levels of CD3+，CD4+ and CD4+/CD8+ in cervical cancer patients with clinical stage for Ⅲ peripheral were lower than those of Ⅰ-Ⅱ period，the levels of CD8+ and CD4+CD25+CD127- in cervical cancer patients with clinical stage for Ⅲ peripheral were higher than those of Ⅰ-Ⅱ period（P<0.05）.Conclusion：The expression levels of T lymphocyte subsets and regulatory T cells in peripheral blood of patients with different cervical lesions were significantly different.Detection of these indicators is helpful to the diagnosis of cervical lesions.

【Key words】 Cervical lesions; T lymphocytes; Regulatory T cells; Clinical staging

First-authors address：Guangdong Province Shenzhen Municipal Baoan District Fuyong Peoplels Hospital，Shenzhen 518103，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.10.009

由于宮頸癌在發(fā)病早期具有較強的隱匿性，大部分患者一經(jīng)確診便已是中晚期，喪失了手術(shù)根治的時機。因此，如何有效早期診斷宮頸癌顯得尤為重要[1]。隨著近年來相關(guān)研究的逐漸深入，越來越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)宮頸癌以及宮頸病變患者存在不同程度的細(xì)胞免疫功能異常[2]，機體免疫系統(tǒng)對上皮突變細(xì)胞的識別和殺傷能力顯著下降，且在腫瘤細(xì)胞的生長以及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[3]。由此，作者推測細(xì)胞免疫功能可能在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要是指具有免疫負(fù)調(diào)控功能的一類T淋巴細(xì)胞亞群，具有抑制多種免疫細(xì)胞活化的作用[4]。本文研究對不同宮頸病變的患者檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞臨床價值，為臨床宮頸癌患者的早期診斷、治療以及預(yù)后評估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年5月-2018年8月在本院擬行陰道鏡檢查和液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的健康女性30例為對照組，另選擇同期于本院接受上述兩項檢查的宮頸癌、慢性宮頸炎與CIN1、CIN2～3患者各30例為宮頸癌組、A組、B組。具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有人員均經(jīng)影像學(xué)檢查以及手術(shù)病理組織活檢確診;（2）入院前均未接受任何相關(guān)治療者;（3）年齡在18周歲以上;（4）臨床病歷資料無缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）入院前30 d內(nèi)接受過免疫抑制劑或類固醇皮質(zhì)激素治療者;（2）伴有心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重受損者;（3）合并嚴(yán)重感染性疾病或自身免疫系統(tǒng)疾病者;（4）妊娠期或哺乳期婦女;（5）入院前60 d內(nèi)接受過宮頸癌手術(shù)或相關(guān)宮頸操作者;（6）存在認(rèn)知功能障礙或精神疾病者。所有患者及其家屬均簽署知情同意書且獲醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 （1）標(biāo)本采集：四組人員入院后均于翌日清晨采集空腹靜脈血10 mL，保存在-80 ℃條件下待檢備用。（2）T淋巴細(xì)胞亞群與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測：檢測儀器為FACS Canto Ⅱ型流式細(xì)胞儀（購自美國BD公司），首先將上述（1）外周血標(biāo)本加入肝素鈉進行抗凝處理，然后加入5 mL流式管底，分別置入10 μL的CD3、CD4、CD8抗體混勻，放在室溫條件下進行時長為20 min的避光孵育，隨后加入2 mL 1×紅細(xì)胞裂解液混勻，避光放置10 min，溶解紅細(xì)胞，將樣品管以1 500 r/min離心10 min，除去上清，并加入2 mL的PBS洗液重懸細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD4+及CD8+亞群數(shù)目及比例。按照上述方式檢測外周血CD4+CD25+CD127-水平。其中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+CD127-試劑盒均購自德國Partec公司。

1.3 觀察指標(biāo) 比較四組患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+CD127-表達水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，將多組間的數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，計算F值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基線資料比較 對照組年齡22～73歲，平均（51.32±10.45）歲;受教育程度：初中以下12例，初中及以上18例。宮頸癌組年齡28～70歲，平均（51.40±10.38）歲;受教育程度：初中以下11例，初中及以上19例;臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ期10例。A組年齡25～72歲，平均（51.24±10.41）歲;受教育程度：初中以下14例，初中及以上16例。B組年齡24～73歲，平均（51.38±10.42）歲;受教育程度：初中以下9例，初中及以上21例。四組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 四組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群各項指標(biāo)水平對比 對照組、A組、B組、宮頸癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平依次降低，對照組、A組、B組、宮頸癌組外周血CD8+水平呈依次升高，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 四組患者外周血CD4+CD25+CD127-水平對比 四組患者外周血CD4+CD25+CD127-水平比較，對照組、A組、B組、宮頸癌組依次升高分別為（6.26±1.30）%、（7.61±1.67）%、（10.32±2.02）%、（12.86±2.31）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=13.877，P=0.000）。經(jīng)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.4 宮頸癌組不同臨床分期患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+CD127-水平比較 宮頸癌臨床分期為Ⅲ期的患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ期患者，而CD8+、CD4+CD25+CD127-水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者。見表2。

3 討論

我國宮頸癌發(fā)病率正呈逐年升高趨勢，嚴(yán)重危及女性的生命健康安全[5-6]。宮頸上皮內(nèi)瘤變主要是指子宮頸上皮非典型性增生至原位癌的一系列癌前病變，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有獨特的免疫調(diào)節(jié)功能，具有免疫抑制性[7-8]，在胃癌以及前列腺癌等多種惡性腫瘤中均存在異常表達。HPV感染是宮頸病變的最主要危險因素[9-10]，90%以上的免疫功能正常女性患者在發(fā)生HPV感染后均可在2年內(nèi)自然痊愈，免疫功能正常女性極少會發(fā)生HPV持續(xù)感染以及持續(xù)加重宮頸病變，進一步降低了宮頸病變發(fā)展成宮頸癌的風(fēng)險[11]。其中細(xì)胞免疫反應(yīng)在HPV病毒的清除過程中起著決定性作用，且T淋巴細(xì)胞亞群中的CD4與CD8與細(xì)胞免疫反應(yīng)直接相關(guān)。

本文表1提示了對照組、A組、B組、宮頸癌組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平依次降低，同時外周血CD8+水平依次升高趨勢，這說明了宮頸病變患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群存在明顯的表達異常，且隨著病變程度的不斷加重，T淋巴細(xì)胞亞群表達異常情況越明顯。分析原因，在無病生理變化條件下，T淋巴細(xì)胞總?cè)杭捌鋪喨涸跀?shù)量上存在動態(tài)平衡，從而發(fā)揮維持機體平衡的作用[12-13]。一旦機體發(fā)生宮頸病變，則會對患者的免疫功能產(chǎn)生一定程度的損害，進一步導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞總?cè)杭捌鋪喨旱臄?shù)量減少[13]。隨著宮頸病變程度的不斷加劇，上述變化隨之增大，繼而引發(fā)了機體免疫系統(tǒng)的失衡，進一步促進了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展[14]。在正常生理狀況下T淋巴細(xì)胞亞群的CD4+和CD8+兩大亞群比例維持在一定范圍內(nèi)，發(fā)揮維持機體免疫系統(tǒng)平衡的作用[15-16]。而宮頸病變會促使CD4+以及CD8+亞群發(fā)生異常改變，并隨著宮頸病變程度的加重，上述變化趨勢會持續(xù)保持并進一步促使細(xì)胞免疫系統(tǒng)出現(xiàn)失衡，導(dǎo)致免疫功能的喪失[17]。此外，本文表2提示了隨著宮頸病變程度的增加，外周血CD4+CD25+CD127-表達異常升高。究其原因，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有促進多種抑制性細(xì)胞因子分泌的作用，包括IL-10以及TGF-β等，進一步有效抑制CD4+與CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的效應(yīng)，最終導(dǎo)致CD4+CD25+CD127-表達的升高。另外，宮頸癌為Ⅲ期的患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ期患者，而CD8+、CD4+CD25+CD127-水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者。這提示了隨著宮頸癌患者病情嚴(yán)重程度的逐漸增加，患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達異常情況隨之加劇[18]。同時也說明了T淋巴細(xì)胞亞群以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可能與宮頸癌的發(fā)展存在密切相關(guān)[19]，可能在機體內(nèi)通過抑制自身同源性腫瘤的細(xì)胞免疫路徑，從而促進了宮頸癌的發(fā)展。

綜上所述，宮頸病變的患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞均存在顯著的表達異常，臨床上可通過對上述指標(biāo)表達情況予以檢測，為宮頸病變的早期判斷提供指導(dǎo)作用。

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（收稿日期：2018-11-01） （本文編輯：周亞杰）