貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 貴州 貴陽 550025

南沙參為桔?？浦参镙喨~沙參Adenophoratetraphylla或沙參A.stricta的干燥根，具有養(yǎng)陰清肺、祛痰止咳等功效[1]。同時，南沙參多糖具有防輻射、抗衰老和保肝等作用[2-4]。貴州產(chǎn)南沙參以多糖含量進(jìn)行質(zhì)量評價至今尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)以多糖含量為標(biāo)準(zhǔn)對貴州不同產(chǎn)地南沙參藥材質(zhì)量進(jìn)行評價，以期為貴州南沙參的開發(fā)利用提供一定的基礎(chǔ)資料。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 紫外分光光度計(jì)(UV-5900，上海元析儀器有限公司)；電子天平(XS205，瑞士梅特公司)；回流裝置，水浴鍋(HH-6，常州澳華儀器有限公司)；數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(GZX-9070MBE，上海博訊公司)。

1.2 試藥 D-無水葡萄糖(中國食品藥品檢定研究院，批號110833-201506)；95%乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，AR，批號：20151222)；苯酚(重慶川東化工有限公司，AR，批號：20130501)；濃硫酸(重慶川東化工有限公司，AR，批號：20160601)。試驗(yàn)用水為超純水。

1.3 南沙參樣品 南沙參生藥分別采自于貴州高坡、施秉、普定、織金、花溪、六枝、水城、安順、黔西和納雍等不同地區(qū)，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物與栽培教研室檀龍顏副教授鑒定為輪葉沙參Adenophoratetraphylla。

2 方法與結(jié)果

2.1 多糖的提取與精制 將南沙參藥材切片后，按馮澤岸等[1]的方法處理得南沙參多糖，得率約14%。

2.2 多糖的定性檢查 采用Fehling試驗(yàn)法，參考梁莉等[5]的方法：取2只10 mL試管，分別加入供試品溶液1 mL、Fehling試劑2 mL，1只試管中加入鹽酸(2 mol·L-1)0.5 mL，2只試管于沸水浴加熱，加酸試管有磚紅色沉淀生成，表明多糖酸解后發(fā)生反應(yīng)。

2.3 試液的制備 參考馮澤岸等[1]的方法：標(biāo)準(zhǔn)品母液按0.5 g·L-1濃度制備；系列標(biāo)準(zhǔn)液濃度按0.01、0.02、0,04、0.06、0.08、0.1 g·L-1濃度制備；供試品溶液按0.2 g·L-1濃度制備；苯酚溶液按250 g·L-1濃度制備(現(xiàn)用現(xiàn)配，避光)。

2.4 硫酸-苯酚法測定

2.4.1 吸收波長及顯色條件 參考馮澤岸等[1]的方法，測定波長選擇490 nm；顯色條件設(shè)定為苯酚用量1 mL，硫酸用量5 mL，沸水浴，反應(yīng)10 min。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取各標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL，以純水為對照，于490 nm測定，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=7.0241x+0.1271，(r=0.9996，n=6)(表1，圖1)，線性關(guān)系良好。

表1 多糖線性關(guān)系的考察

2.4.3 精密度及穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取0.06 mg·mL-1供試品溶液1.0 mL，于490 nm測定吸光度，由表2可知平均吸光度為0.435 AU，RSD值為1.86%，顯示其精密度良好。將顯色后的溶液溶于0，10，40，80，150 min測定吸光度，由表3可知平均吸光度為0.552 AU，RSD值為0.8773%，結(jié)果顯示其在150 min內(nèi)穩(wěn)定。

表2 南沙參多糖含量測定的精密度試驗(yàn)

表3 南沙參總多糖含量測定的穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取適量南沙參多糖平行制備成6份溶液，測定吸光度計(jì)算多糖含量及RSD值。由表4可知，所測得多糖平均含量為13.95%，RSD值為1.2%，由此可見其重復(fù)性較好。

表4 南沙參總多糖含量測定的重復(fù)性試驗(yàn)

2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取南沙參多糖約20 mg，共6份，制備溶液，精密吸取各溶液1.5 mL，標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度：0.2 mg·mL-1)1.5 mL，于10 mL容量瓶中定容，搖勻，測定吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量，在計(jì)算回收率、RSD值。從表5可知平均加樣回收率為99.1%，RSD值為0.95%。

表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：回收率%=(測得總量-樣品含量)/加樣量×100%。

2.4.6 多糖含量測定 精密稱取不同產(chǎn)地樣品粗多糖共10份，各20.0 mg，配置成濃度為0.06 mg·mL-1的樣品溶液，每份樣品溶液精密量取3份各1.0 mL，即每組3份，測定吸光度，計(jì)算樣品中葡萄糖濃度，以葡萄糖計(jì)樣品中多糖含量=C×D×V/m×100%(C：樣品溶液葡萄糖濃度；D：稀釋倍數(shù)，V：樣品溶液體積，m：樣品質(zhì)量)。

表6 南沙參多糖含量測定結(jié)果 (n=3)

由表6可知，在所檢測的不同10個產(chǎn)地之中，以六枝，水城，施秉地區(qū)南沙參多糖含量最低，約為6%～7%。 以納雍南沙參多糖含量最高，為21.978%。高坡、黔西、普定南沙參多糖含量較為接近，為11%～13.799%。 織金、花溪、安順南沙參多糖相近為17.839%～19.901%。

3 結(jié)論

通過研究發(fā)現(xiàn)，六枝、水城、施秉地區(qū)所產(chǎn)南沙參藥材多糖含量低，表明在該地區(qū)的南沙參藥材原植物多糖轉(zhuǎn)化率較差；相比之下，納雍、安順?biāo)a(chǎn)南沙參多糖含量較高，表明其原植物多糖轉(zhuǎn)化率較高；而高坡、黔西、普定、花溪、織金所產(chǎn)南沙參多糖含量居中。因此，以多糖含量為評價指標(biāo)考察南沙參種植區(qū)的選擇，此次實(shí)驗(yàn)認(rèn)為納雍和安順為南沙參種植的較適宜地區(qū)。