王洪云 張毅鈕 福祥 孫健 徐飛 朱紅 岳瑞雪 張文婷

摘 要：ICR小鼠連續(xù)3d腹腔注射100mg/kg環(huán)磷酰胺，建立血小板減少癥模型。將造模成功小鼠分別灌胃6g/kg和2g/kg劑量TSP-1水提取物、6g/kg和2g/kg劑量TSP-1石油醚提取物、2g/kg劑量TSP-1正丁醇提取物和1g/kg劑量TSP-1氯仿提取物，造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血測定血小板和白細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果表明：2g/kg TSP-1石油醚提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物可以顯著升高環(huán)磷酰胺模型小鼠的血小板，但各提取物對環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少無治療作用，提示特種甘薯氯仿與石油醚提取物具有進(jìn)一步用于治療血小板減少癥的潛在價(jià)值。

關(guān)鍵詞：特種甘薯TSP-1;環(huán)磷酰胺;血小板減少

甘薯為璇花科甘薯屬一年或多年生草本植物，是一種藥食同源作物，具有重要的藥用保健價(jià)值[1]。研究表明，甘薯葉含有樹脂糖苷、萜類、酚酸類、黃酮類和甾體類等化學(xué)成分，具有抗氧化、抑制癌細(xì)胞增殖和提高免疫力等多種功能[2-3]，某些特種甘薯對過敏性紫癜出血等疾病具有良好的治療作用[4]。近些年來，筆者通過特種甘薯TSP-1對志愿者的臨床試用效果進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)該品種的葉片提取物對血小板減少癥具有良好的治療作用。

目前，臨床上使用的大多數(shù)化療藥物都會(huì)對癌癥患者造成較為嚴(yán)重的毒副作用，主要的血液學(xué)毒性作用表現(xiàn)在血小板數(shù)量明顯降低，患者的免疫功能降低，進(jìn)而影響化療進(jìn)程[5]。本研究以化療藥物環(huán)磷酰胺制作血小板減少癥小鼠模型，采用特種甘薯TSP-1不同提取物（水、石油醚、正丁醇、氯仿）對ICR小鼠灌胃，觀察其對血小板減少癥模型小鼠外周血小板和白細(xì)胞數(shù)量的影響，為其進(jìn)一步藥用開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠，清潔級，18～23g，雌雄各半，共64只，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑

環(huán)磷酰胺（上海華聯(lián)制藥有限公司，滬衛(wèi)藥淮字（1995）第012034號）、石油醚（國藥集團(tuán)）、正丁醇（國藥集團(tuán)）、氯仿（國藥集團(tuán)）、羧甲基纖維素（安耐吉）。

1.3 主要儀器與設(shè)備

CA-800全自動(dòng)血球分析儀（日本吉泰）、FA1104 型精密電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、灌胃針、采血針等 。

1.4 特種甘薯TSP-1不同提取物的制備

制備流程：特種甘薯TSP-1干燥葉片→清洗、去砂、粉碎→溶劑提取（水、石油醚、正丁醇、氯仿）→過濾→真空濃縮→冷凍干燥→真空4℃保存。灌胃前用1%羧甲基纖維素配成混懸液。

1.5 環(huán)磷酰胺致血小板減少癥小鼠模型的建立與給藥

ICR小鼠，雌雄各半，18～23g，隨機(jī)分為8組，分別為空白對照組、模型對照組、6g/kg TSP-1水提取物、2g/kg TSP-1水提取物、6g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1正丁醇提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物。各受試組按每10g體重灌服0.2mL受試藥物，空白和模型對照組給予等量的1%羧甲基纖維素溶劑，每日1次，連續(xù)6d。給藥第4天，除空白對照組外，其余各組腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，每日1次，連續(xù)3d，建立血小板減少癥模型。

1.6 外周血小板和白細(xì)胞數(shù)量的測定

造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血，加入全自動(dòng)血球分析儀，測定血小板、白細(xì)胞數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件處理數(shù)據(jù)，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。統(tǒng)計(jì)顯著性水平設(shè)為：P<0.05有差異、P<0.01差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 TSP-1不同提取物對環(huán)磷酰胺致血小板減少癥模型小鼠外周血血小板的影響

小鼠連續(xù)3d灌胃特種甘薯TSP-1不同提取物，TSP-1石油醚提取物、TSP-1正丁醇提取物和TSP-1氯仿提取物組血小板降低10%～25%，其中2g/kg石油醚提取物、1g/kg氯仿提取物組具有顯著性差異（P<0.01），其余各組血小板數(shù)量相近。連續(xù)3d腹腔注射環(huán)磷酰胺，模型組血小板數(shù)量下降到693×109/L，與造模前比較減少19.8%，與造模前和空白對照組均有顯著性差異（P<0.05）。2g/kg水提取物組血小板數(shù)量降幅最大，與造模前、模型對照組和空白對照組均有極顯著差異（P<0.01）;2g/kg正丁醇提取物組小鼠血小板與造模前也有顯著下降（P<0.05）。6g/kg水提取物和石油醚提取物組的小鼠血小板無明顯減少，分別與造模前和空白對照組相近（P>0.05）;而1g/kg氯仿提取物組血小板數(shù)量較造模前顯著升高（P<0.01）。

造模后第6天，模型對照組血小板數(shù)量已明顯回升，這說明環(huán)磷酰胺骨髓抑制效果結(jié)束，但實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組小鼠血小板數(shù)量仍然明顯低于造模前（P<0.05），說明模型建立成功[6]。造模后隨著給藥時(shí)間的延長，給藥小鼠血小板均有所提高，除2g/kg水提取物組外，其余各組血小板數(shù)量均超過造模前水平，其中2g/kg石油醚提取物和1g/kg氯仿提取物組提升效果最好，與造模前比較具有顯著性差異（P<0.01）。試驗(yàn)結(jié)果提示，特種甘薯TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善環(huán)磷酰胺致外周血血小板減少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好。

2.2 TSP-1不同提取物對環(huán)磷酰胺致血小板減少癥模型小鼠外周血白細(xì)胞的影響

連續(xù)3d灌胃特種甘薯TSP-1不同提取物，6g/kg水提取物和6g/kg石油醚提取物組小鼠外周血白細(xì)胞比空白對照組升高約30%，其中6g/kg甘薯水提取物組升高具有顯著性差異（P<0.05），其余各提取物組均顯著降低（P<0.05或0.01）。造模后第3天，外周血中白細(xì)胞數(shù)量即急劇下降，約為給藥前的15%～30%之間，包括模型對照組在內(nèi)，各組與空白對照比較均具有極顯著差異（P<0.01），試藥組與模型組比較無顯著性差異（P>0.05）。造模后第6天，各組小鼠白細(xì)胞數(shù)量均無明顯變化。試驗(yàn)結(jié)果提示，特種甘薯TSP-1水提取物6g/kg劑量與石油醚提取物6g/kg劑量具有升高正常小鼠外周血白細(xì)胞的作用，但各提取物對環(huán)磷酰胺致外周血白細(xì)胞減少均無治療作用。

3 結(jié)論與討論

環(huán)磷酰胺為常用抗腫瘤化療藥物，有骨髓抑制等不良反應(yīng)，給予大劑量環(huán)磷酰胺會(huì)使B和T淋巴細(xì)胞免疫功能下降，引起體液及細(xì)胞免疫功能的全面抑制，從而對血小板生成起抑制作用。已有文獻(xiàn)報(bào)道，小鼠連續(xù)3d皮下注射100mg/kg環(huán)磷酰胺，停藥后3d左右血小板可下降20%～30%[7]。本研究應(yīng)用環(huán)磷酰胺對血小板的抑制作用，以環(huán)磷酰胺100mg/kg連續(xù)3d給小鼠皮下注射，成功建立血小板減少癥模型，造模后第3天血小板數(shù)量降到最低，造模后第6天血小板數(shù)量仍低于造模前。

抗腫瘤化學(xué)藥物臨床應(yīng)用常導(dǎo)致血小板減少，嚴(yán)重者可威脅生命。目前臨床上主要治療手段是應(yīng)用促血小板生成素（TPO）或白細(xì)胞介素-11（IL-11）、輸注血小板和應(yīng)用糖皮質(zhì)激素，降低化療藥物劑量或推遲治療至患者的骨髓造血功能恢復(fù)。應(yīng)用重組人血小板生成素（rhTPO）治療，價(jià)格昂貴;輸注血小板有可能增加血源性感染肝炎和艾滋病的危險(xiǎn);而降低化療藥物劑量或推遲治療，對患者的療效會(huì)有不利影響[8]。

近年來，相繼有文獻(xiàn)報(bào)道，中藥或天然藥物對血小板減少癥有一定療效[9-10]。本研究以特種甘薯TSP-1為研究對象，對TSP-1抗血小板減少癥的有效部位進(jìn)行篩選，結(jié)果表明，TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善環(huán)磷酰胺致外周血血小板減少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好，但各提取物對環(huán)磷酰胺致外周血白細(xì)胞減少均無治療作用。在外周血血小板數(shù)量方面，石油醚提取物低劑量組的效果強(qiáng)于高劑量組，這說明其最低有效劑量可能低于2g/kg，今后的藥效實(shí)驗(yàn)需進(jìn)一步測定其最低有效劑量;而高劑量組藥效不如低劑量組，可能是高劑量給藥無法完全吸收。

中藥來源的化合物一直都是國內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)顯示，特種甘薯TSP-1在提升血小板減少癥小鼠外周血血小板數(shù)量上有很好的效果，其作用機(jī)制還需要更加深入的研究，有效成分也有待進(jìn)一步鑒別，然而，其用量少、成本低、給藥方便等優(yōu)勢足以使其成為有潛力的候選藥物?！?/p>

參考文獻(xiàn)

[1]王洪云，孫健，鈕福祥，等.甘薯的功能成分及其藥用價(jià)值[J].中國食物與營養(yǎng)，2013，19（12）：59-62.

[2]Gundala SR，Yang C，Lakshminarayana N，et al.Polar biophenolics in sweet potato greens extract synergize to inhibit prostate cancer cell proliferation and in vivo tumor growth[J].Carcinogenesis，2013，34（9）：2039-2049.

[3]Johnson M，Pace RD.Sweetpotato leaves：properties and synergistic interactions that promote health and prevent disease[J].Nutrition Reviews，2010，68（10）：604-615.

[4]許世衛(wèi)，鈕福祥.甘薯主張[M].青島：青島出版社，2006.

[5]周紅，蘇蘭，郭寧櫟.補(bǔ)血I號方對化療藥物環(huán)磷酰胺致血小板減少動(dòng)物作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2014，33（6）：543-545.

[6]馬健康，姜艷霞，馬洪波，等.羊蹄根提取物對血小板減少癥模型小鼠造血系統(tǒng)的作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，35（1）：82-86.

[7]張擎，彭紅娟，余曉彬，等.環(huán)磷酰胺誘發(fā)小鼠血小板減少癥模型的建立及其血小板功能的測定[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，23（12）：1277-1279、1282.

[8]邵志堅(jiān)，秦叔逵，王琳，等.促紅細(xì)胞生成素治療腫瘤化療導(dǎo)致血小板減少癥的臨床研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2007，12（2）：120-122.

[9]展昭民，王志平，陳立君，等.玳瑁紫疲寧治療原發(fā)性血小板減少性紫癜的研究[J].中醫(yī)雜志，1994，35（9）：541-543.

[10]徐平聲，李新中，潘善慶，等.西蒙膠囊對兔與大鼠性免疫性血小板減少的保護(hù)作用[J].中南藥學(xué)，2006，4（6）：418-420.