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某父母代場種雞群傳染性鼻炎的診斷

2019-09-17 09:27李玉燕
家禽科學(xué) 2019年8期
關(guān)鍵詞:種雞引物雞群

李玉燕

中圖分類號:S858.31 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:C ? ? 文章編號:1673-1085(2019)08-0032-03

雞傳染性鼻炎(IC)是由副雞嗜血桿菌(Hpg)引起的一種雞急性上呼吸道傳染病,此病由Beach 首先報道,De Blieck于1931年初次分離到了該病的病原體,最初命名為雞嗜血紅蛋白鼻炎芽孢桿菌,目前本病在世界許多地方都有發(fā)生和流行[1]。我國從1980年起就有許多疑似本病的病例出現(xiàn),首先由馮文達(dá)于1987年在北京分離到細(xì)菌。臨床主要特征是病雞鼻粘膜發(fā)炎,打噴嚏、流鼻涕,且臉部發(fā)生腫脹。雞群在發(fā)病初期具有較低的死亡率,嚴(yán)重影響雞群生長發(fā)育和產(chǎn)蛋能力[2] ,而且在發(fā)病后期往往會由于出現(xiàn)混合感染而導(dǎo)致機(jī)體消瘦,死亡率明顯升高。所以,該病對養(yǎng)雞業(yè)危害較大,常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3-5]。

2019年6月,某父母代場種雞群從28周齡開始出現(xiàn)呼吸道癥狀,聽雞有啰音,咳嗽、打噴嚏,臨床雞只面部水腫,肉垂出現(xiàn)明顯腫脹,公雞尤為明顯。臨床剖檢死雞發(fā)現(xiàn)鼻腔和眶下竇有粘液性分泌物流出,嚴(yán)重者眶下竇含有大量干酪樣壞死物。臨床種雞群產(chǎn)蛋率下降30%~40%,疑似雞傳染性鼻炎感染。本研究采集臨床發(fā)病雞只的鼻腔拭子和眶下竇拭子,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對發(fā)病原因進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明該父母代種雞群發(fā)病確診為雞傳染性鼻炎感染。

1 ?材料與方法

1.1 ?采集病料 ?送檢疑似雞傳染性鼻炎病死雞,用無菌棉拭子采集典型發(fā)病雞的眶下竇和鼻腔拭子。

1.2 ?試劑 ?EasyPure Viral DNA/RNA Kit、PCR反應(yīng)試劑盒、瓊脂糖、TAE均購自北京全式金生物技術(shù)有限公司;PCR引物由上海英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司合成。

1.3 ?樣品的采集與處理 ?分別采集病雞眶下竇和鼻腔拭子,置于1.5mL離心管中,加入1mL滅菌PBS,放置0.5h后,將棉拭子在管壁上盡量擠干,然后棄至消毒缸內(nèi)。將浸過棉拭子的離心管充分搖震后,12000r/min離心5min。取上清液用于提取DNA。

1.4 ?樣品的鑒定

1.4.1 ?引物 ?參照宋敏訓(xùn)等[6]發(fā)表的針對雞傳染性鼻炎aroA基因的序列進(jìn)行PCR鑒別診斷,雞傳染性鼻炎上游引物:5′-TTC CGT TGC CAT TGC ACT C-3′;下游引物:5′-TTA GGC GTG AAG TAT CAG C-3′,擴(kuò)增的目的片段為887bp。

1.4.2 ?DNA的提取 ?參照EasyPure Viral DNA/RNA Kit的說明書,對離心完樣品的上清液提取DNA。

1.4.3 ?目的片段的擴(kuò)增 ?以提取DNA為模板,進(jìn)行PCR反應(yīng)。其PCR體系(25μL),見表1。

PCR反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性2min;94℃變性30s,54℃退火30s,72℃延伸5min,共計35個循環(huán)。最后復(fù)延伸10min。

反應(yīng)結(jié)束,取5μL PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后,于紫外光線下觀察并記錄結(jié)果。

2 ?結(jié)果

2.1 ?采集樣品傳染性鼻炎的PCR檢測結(jié)果 ?10份檢測樣品中,1、2、3、8號樣品均有887bp的擴(kuò)增條帶符合預(yù)期大小,4、5號樣品為可疑感染,見圖1。初步鑒定該雞群存在傳染性鼻炎的感染。

2.2 ?臨床表現(xiàn)與剖檢變化 ?種雞群產(chǎn)蛋率下降30%~40%,發(fā)病嚴(yán)重雞舍周死淘高達(dá)2%。臨床感染雞只精神沉郁,眼瞼部腫脹,剖檢鼻腔和眶下竇有粘液性分泌物流出,嚴(yán)重者眶下竇含有大量干酪樣壞死物。眼結(jié)膜囊內(nèi)有干酪樣物,見圖2~圖5。

3 ?結(jié)論

對某父母代場種雞群28周齡時疑似感染雞傳染性鼻炎,采集10份鼻腔拭子和眶下竇拭子樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對發(fā)病原因進(jìn)行鑒定,結(jié)果有6份樣品均獲得預(yù)期大小的目的條帶。結(jié)果表明該父母代雞群發(fā)病確診為雞傳染性鼻炎感染。為今后雞傳染性鼻炎動物攻毒保護(hù)試驗的順利進(jìn)行提供了良好的素材。

參考文獻(xiàn):

[1] ?Y.M.Saif.禽病學(xué)[M].第十二版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2012,930-939.

[2] ?吳清民.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2002:287.

[3] ?秦濤.蛋雞副嗜血桿菌病的臨床特點與防治措施[J].現(xiàn)代畜牧科技,2016(10):92

[4] ?宋勤葉,張冰,周林.混合感染中雞毒支原體和副雞嗜血桿菌的分離鑒定[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2002,24(4):280-282.

[5] ?榮光,王東勁,周漢林,等.16SrRNA在獸醫(yī)病原菌分類鑒定中的應(yīng)用[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(10):45-49.

[6] ?宋敏訓(xùn),陳小玲,牟建青,等.利用aroA基因建立雞傳染性鼻炎PCR診斷方法[J].中國獸醫(yī)科技,2001,31(10):7-9.

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