徐曉津，李秀華，馬一帆，李慧耀，祁 欣，呂海龍，鄢慶枇

中草藥復(fù)方及其與抗生素聯(lián)用對(duì)斜帶石斑魚河流弧菌病的治療效果

徐曉津1,2,3，李秀華4，馬一帆5，李慧耀1,2，祁 欣1,2，呂海龍3，鄢慶枇1,2

（1. 福建福鼎海鷗水產(chǎn)食品有限公司，大黃魚育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 寧德 352103；2. 集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，福建 廈門 361021；3. 福建天馬科技股份集團(tuán)有限公司，福建福州 350308；4. 廈門醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院中醫(yī)科，福建 廈門 361021；5. 廈門大學(xué)海洋與地球?qū)W院，福建 廈門 3610051）

【】通過(guò)藥物體外抑菌試驗(yàn)及斜帶石斑魚抗病力研究，篩選有效治療斜帶石斑魚（）河流弧菌（）病復(fù)方中藥與中西藥聯(lián)用配方。用黃連、烏梅、黃柏比例分別為0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的復(fù)方中藥對(duì)河流弧菌進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)；將質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2%復(fù)方中草藥與中西藥聯(lián)用復(fù)方分別添加到基礎(chǔ)飼料中，投喂感染河流弧菌的斜帶石斑魚73 d，研究中西藥對(duì)石斑魚河流弧菌病治療效果。其中，試驗(yàn)組I、II、III的黃連、烏梅、黃柏比例分別為0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1，試驗(yàn)組IV、V、VI的黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星配比分別為0.9∶1.3∶0.9∶1.3、1.2∶0.9∶1.0∶0.9、1∶1∶1∶1，另設(shè)空白對(duì)照組I（健康魚，投喂基礎(chǔ)飼料）、II（病魚，投喂基礎(chǔ)飼料）和陽(yáng)性對(duì)照組III（病魚，投喂板黃散）、IV（病魚，投喂大黃五倍子散）。黃連、烏梅、黃柏配比1∶1∶1、質(zhì)量濃度200 mg/mL的復(fù)方中藥對(duì)河流弧菌的體外抑菌效果較佳，為最佳配方及用量。40 d病魚死亡數(shù)，對(duì)照組Ⅱ>對(duì)照組Ⅳ>對(duì)照組Ⅲ>試驗(yàn)組Ⅰ>試驗(yàn)組Ⅲ>試驗(yàn)組Ⅱ>試驗(yàn)組V>試驗(yàn)組VI>試驗(yàn)組Ⅳ>對(duì)照組Ⅰ，試驗(yàn)組Ⅱ的黃連、烏梅、黃柏比1.2∶0.9∶1.0為療效最佳的中藥復(fù)方，試驗(yàn)組Ⅳ的黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星比為 0.9∶1.3∶0.9∶1.3為療效最佳的中西藥聯(lián)用復(fù)方。中藥復(fù)方及中西藥聯(lián)用復(fù)方均可較好治療斜帶石斑魚河流弧菌病，后者藥效優(yōu)于前者。

復(fù)方中藥；中西藥聯(lián)用；恩諾沙星；斜帶石斑魚；河流弧菌

石斑魚肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，主要有棕點(diǎn)石斑魚（）、鞍帶石斑魚（）、斜帶石斑魚（）、豹紋鰓棘鱸（）、駝背鱸（）等，福建、海南等地已有規(guī)模化養(yǎng)殖。隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，水體環(huán)境逐步惡化，常因細(xì)菌感染而引發(fā)敗血癥、爛尾、爛鰓等疾病。河流弧菌（）是養(yǎng)殖石斑魚的主要病原之一[1-4]?？股卦谥委熂?xì)菌性疾病時(shí)有易產(chǎn)生耐藥性、導(dǎo)致藥物殘留等缺點(diǎn)[5]，且石斑魚自身抵抗力日益降低，病害問(wèn)題日趨嚴(yán)重，給石斑魚養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失[6]。中藥可增強(qiáng)水產(chǎn)生物免疫力，復(fù)方中藥有良好抑菌作用[7-9]，研究與開發(fā)中草藥防治魚病有重要意義。

研究表明，采用現(xiàn)代化制藥技術(shù)制作的中藥顆粒劑對(duì)細(xì)菌性疾病有良好療效，已有200多種中藥被用于魚類飼料添加劑[10-11]。中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦（）、尼羅羅非魚（）、歐鰻（）等疾病有良好療效[12-13]。已有中藥提取物對(duì)褐點(diǎn)石斑魚（）的免疫研究報(bào)道[6]，但鮮見石斑魚病害的中草藥防治、配方篩選等研究，以及中草藥對(duì)河流弧菌體外抑菌、中西藥聯(lián)用治療魚病的系統(tǒng)研究。本課題組前期中藥與西藥對(duì)河流弧菌體外抑菌研究中表明，240 mg/mL的黃連、烏梅、黃柏組成三聯(lián)復(fù)方中藥對(duì)河流弧菌的抑菌圈為（22.012±1.346）mm，抑菌作用極敏感；恩諾沙星對(duì)河流弧菌抑菌圈直徑為（33.039±1.476）mm，藥物敏感性結(jié)果為高度敏感。本研究將該中藥復(fù)方與中西藥聯(lián)用復(fù)方藥物拌入飼料，飼喂人工攻毒的河流弧菌病石斑魚，進(jìn)行藥物防治魚病效果比較研究，以篩選藥效強(qiáng)的復(fù)方中藥、復(fù)方中西藥配方，以及有效使用劑量，為魚類細(xì)菌性疾病防治、中草藥合理利用以及石斑魚的健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 不同配方復(fù)方中藥對(duì)河流弧菌體外抑制效果

1.1.1 供試菌種 河流弧菌分離自患病石斑魚，河流弧菌菌液由集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院海洋漁用疫苗工程技術(shù)研究中心保存[3]。將保存的河流弧菌分別用LB液體培養(yǎng)基28 ℃下恒溫培養(yǎng)8～12 h，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液，用磷酸鹽緩沖液（PBS）調(diào)整菌液濃度光密度值為0.5 (含菌量約108cfu/mL)，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 復(fù)方三聯(lián)中藥配方 采用篩選的中藥黃柏、黃連、烏梅（江陰天江藥業(yè)有限公司），黃連、烏梅、黃柏比例分別為0.9∶1.3∶0.9（配方1）、1.2∶0.9∶1.0（配方2）、1∶1∶1（配方3）。將中藥配方顆粒溶解于無(wú)菌蒸餾水中，于沸水浴加熱30 min，使中藥充分溶解。實(shí)驗(yàn)用中藥顆粒劑溶液分別相當(dāng)于生藥的質(zhì)量濃度為200、220、240 mg/mL。

1.1.3 復(fù)方三聯(lián)中藥對(duì)河流弧菌體外抑菌活性測(cè)定 采用牛津杯法，在平板中倒入10 mL滅菌后的LB固體培養(yǎng)基，待凝固后，用鑷子輕輕在每個(gè)培養(yǎng)皿中等距離放入4 個(gè)牛津杯，浸入培養(yǎng)基中。取15 mL的LB液體培養(yǎng)基混勻，并倒入平板，凝固后取出牛津杯，將河流弧菌稀釋至108cfu/mL，用移液槍吸取0.1 mL菌懸液，滴入平板，用涂布器涂勻用移液槍在1個(gè)孔中加入200 μL的無(wú)菌水為對(duì)照組，在另3個(gè)孔中用移液槍加入含生藥240 mg/mL 3種不同藥液各200 μL，于28 ℃條件下恒溫培養(yǎng)18～24 h，觀察抑菌圈，并用SupcreG1菌落計(jì)數(shù)/篩選/抑菌圈測(cè)量聯(lián)用儀（杭州迅數(shù)科技有限公司）測(cè)量抑菌圈大小，每個(gè)實(shí)驗(yàn)3次重復(fù)。計(jì)算平均值，進(jìn)行對(duì)比研究，根據(jù)抑菌圈直徑大小判定其抑菌能力的強(qiáng)弱。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌直徑≥20 mm為極敏感“+++”，15 mm≤抑菌直徑< 20 mm為高敏“++”，10 mm≤抑菌直徑< 15 mm為中敏“+”，抑菌直徑< 10 mm則低敏或無(wú)效“-”。

1.2 不同配方復(fù)方中藥與中西藥聯(lián)用復(fù)方對(duì)石斑魚河流弧菌病防治比較

1.2.1 藥材 黃連、烏梅、黃柏（廈門連福堂藥店），用中藥粉碎機(jī)（FW177天津市泰斯特儀器有限公司）制成約150μm的顆粒，再用超微粉碎機(jī)（三清振動(dòng)微粉機(jī)，SQW-60山東三清不銹鋼設(shè)備有限公司）再次粉碎至粒徑5～10 μm的超微粉。黃連、烏梅、黃柏三聯(lián)中藥配伍組成中藥復(fù)方，黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星（興化市恒威生物技術(shù)有限公司）組成中西藥聯(lián)用復(fù)方。復(fù)方中草藥制劑：3種中草藥超微粉等質(zhì)量均勻混合，在65℃下烘干約24 h，用孔徑96 μm篩絹過(guò)濾。按一定比例添加到斜帶石斑魚基礎(chǔ)飼料（福建天馬飼料有限公司）中，使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.2％。將粉碎后的飼料原料用孔徑180 μm篩絹過(guò)濾后，混勻，用SLX-80型擠壓機(jī)制成直徑1.0 mm顆粒餌料，于45℃烘干，裝袋密封，置-18℃冰箱中保存。

1.2.2 攻毒試驗(yàn) 試驗(yàn)前先進(jìn)行攻毒預(yù)試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)斜帶石斑魚注射河流弧菌，以80%魚出現(xiàn)病癥，但無(wú)魚死亡的河流弧菌濃度為本試驗(yàn)用菌濃度。斜帶石斑魚購(gòu)自福建省漳浦市某養(yǎng)殖場(chǎng)，體長(zhǎng)（11 ± 2）cm，暫養(yǎng)于1 t水體的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)。暫養(yǎng)1 周后用于試驗(yàn)。將規(guī)格相當(dāng)?shù)慕】敌睅唪~隨機(jī)分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各20尾，分別在18℃的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。用102cfu/g 的河流弧菌菌懸液通過(guò)胸腔注射方式對(duì)受試魚進(jìn)行攻毒。對(duì)照組斜帶石斑魚則注射磷酸鹽緩沖液（PBS）。將各組魚分別轉(zhuǎn)入相應(yīng)水體中飼養(yǎng)。

1.2.3 中藥復(fù)方及中西藥聯(lián)用復(fù)方試驗(yàn) 中藥復(fù)方試驗(yàn)：設(shè)對(duì)照組Ⅰ（健康魚，喂基礎(chǔ)飼料）、對(duì)照組Ⅱ（病魚，喂基礎(chǔ)飼料），試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別投喂黃連、烏梅、黃柏比例為 0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的飼料。

中西藥聯(lián)用復(fù)方試驗(yàn)：試驗(yàn)組Ⅳ投喂黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星為 0.9∶1.3∶0.9∶1.3的飼料，試驗(yàn)組V投喂黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星為1.2∶0.9∶1.0∶0.9的飼料，試驗(yàn)組VI投喂黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星為1∶1∶1∶1的飼料。為與生產(chǎn)中常用藥物進(jìn)行治療效果對(duì)比，另設(shè)對(duì)照組Ⅲ（投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％板黃散的飼料）、對(duì)照組Ⅳ（投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％大黃五倍子散的飼料）。

各試驗(yàn)組和對(duì)照組均設(shè)置3個(gè)重復(fù)組。試驗(yàn)開始后每日于8:00、17:00 投喂2 次，投飼量為魚體質(zhì)量的2%～3%，根據(jù)生長(zhǎng)、攝食情況作調(diào)整。待魚飽食后吸出殘餌。日換水1次，換水量為總體積的1/3。試驗(yàn)飼料分別中添加復(fù)方中草藥制劑、中西藥聯(lián)用制劑，對(duì)照組飼料中不添加。

每天保持觀察并記錄存活情況（觀察40 d），記錄發(fā)病癥狀及死亡情況，解剖檢查死亡魚，計(jì)算累積死亡率（Cumulative mortality rate，CM）。

CM=［(0－t) /0］× 100%。

式中，CM為累積死亡率（%），0為試驗(yàn)初始魚數(shù)，N為試驗(yàn)結(jié)束魚數(shù)。各組如仍有魚存活則繼續(xù)以上述方式投喂至魚全部死亡。測(cè)第1尾魚死亡時(shí)間、半數(shù)魚死亡時(shí)間及魚死亡率、全部魚死亡時(shí)間及魚死亡率、40 d累計(jì)死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，先對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并進(jìn)行Duncan’s 多重比較，分析各指標(biāo)差異的顯著性（＜0.05）。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方三聯(lián)中藥體外抑菌比較

表1可見，復(fù)方中藥配方2比配方3、配方1藥效強(qiáng)。配方2、3抑菌為極敏感，配方1抑菌為高敏。3種配方中藥，隨著藥物水溶液的濃度增加，抑菌效果也增強(qiáng)。從用量少且達(dá)到較強(qiáng)抑菌效果等方面篩選，黃連、烏梅、黃柏比例為1∶1∶1，藥物水溶液的濃度200 mg/mL，是最佳配方和使用劑量（表1）。

2.2 藥餌組和對(duì)照組斜帶石斑魚的成活率

以河流弧菌人工感染斜帶石斑魚后，試驗(yàn)各組病魚死亡情況見表2。攻毒后1、2 d各試驗(yàn)組魚攝食飼料減少。在攻毒5 d后，各組斜帶石斑魚陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病、死亡現(xiàn)象。病魚腹腔內(nèi)有淡黃色液體，腹部膨大，脾臟出血、腫大，肝腫大、呈蒼白色，腸內(nèi)食物減少，少數(shù)魚死亡，體表無(wú)癥狀。由于攻毒后40 d 內(nèi)各組魚的死亡數(shù)趨于穩(wěn)定，比較分析攻毒后40 d各組的死亡率。同時(shí)還統(tǒng)計(jì)各組魚全部死亡的的時(shí)間。

40 d時(shí)病魚死亡數(shù)（圖1）比較：對(duì)照組Ⅱ > 對(duì)照組Ⅳ> 對(duì)照組Ⅲ > 試驗(yàn)組Ⅰ> 試驗(yàn)組Ⅲ > 試驗(yàn)組Ⅱ > 試驗(yàn)組V > 試驗(yàn)組VI > 試驗(yàn)組Ⅳ > 對(duì)照組Ⅰ。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組Ⅰ（空白對(duì)照組）均健康存活，成活率為100.00%，且活動(dòng)和攝食均正常，無(wú)肉眼可見病癥。對(duì)照組Ⅱ在注射菌懸液后6 d時(shí)死亡1尾，6～10 d為死亡高峰期，死亡11尾。40 d時(shí)病魚全部死亡。

表1 不同濃度復(fù)方中藥配方1 ~ 3組合物的抑菌情況

說(shuō)明：配方1、2、3，黃連、烏梅、黃柏比例分別為0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1；+++，極為敏感；++，高度敏感；+，中度敏感；-，低敏或無(wú)效。

Notes: Theratio of,andof Chinese medicines formulas Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ are 0.9∶1.3∶0.9, 1.2∶0.9∶1.0，1∶1∶1, respectively; +++, extreme sensitivity; ++, high sensitivity; +, slight sensitivity; -, insensitivity.

表2 復(fù)方中藥與中西藥聯(lián)用藥組斜帶石斑魚成活率

注：對(duì)照組Ⅰ，健康魚，投喂基礎(chǔ)飼料；對(duì)照組Ⅱ，病魚，投喂基礎(chǔ)飼料；試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，投喂添加黃連、烏梅、黃柏比例分別為 0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的飼料；試驗(yàn)組Ⅳ、V、VI，投喂添加黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星比例分別為 0.9∶1.3∶0.9∶1.3、1.2∶0.9∶1.0∶0.9、1∶1∶1∶1的飼料；對(duì)照組Ⅲ，投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％板黃散的飼料；對(duì)照組Ⅳ，投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％大黃五倍子散的飼料。

Notes: ControlⅠ, healthy fish fed on basal feed; Positivie groupⅡ, diseased fish fed on basal feed; test fish group Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, theratio of,andⅠin diets are 0.9∶1.3∶0.9, 1.2∶0.9∶1.0, 1∶1∶1, respectively; test fish group Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ, theratio of,,and Enrofloxacin in dietsare 0.9∶1.3∶0.9∶1.3, 1.2∶0.9∶1.0∶0.9, 1∶1∶1∶1, respectively; control Ⅲ, fed with compound BanHuang San; control Ⅳ, fed with compound Rhubarb and.

對(duì)照組Ⅰ，健康魚，投喂基礎(chǔ)飼料；對(duì)照組Ⅱ，病魚，投喂基礎(chǔ)飼料；試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，投喂添加黃連、烏梅、黃柏比例分別為 0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的飼料；試驗(yàn)組Ⅳ、V、VI，投喂添加黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星比例分別為 0.9∶1.3∶0.9∶1.3、1.2∶0.9∶1.0∶0.9、1∶1∶1∶1的飼料；對(duì)照組Ⅲ，投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％板黃散的飼料；對(duì)照組Ⅳ，投喂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2％大黃五倍子散的飼料。

復(fù)方中藥組，試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ注射菌懸液后13～15 d時(shí)石斑魚死亡1尾，43～47 d為死亡高峰期（圖1）。40 d時(shí)魚死亡率為43.00%、38.00%、40.00%。投喂復(fù)方中藥組的病魚死亡數(shù)量為試驗(yàn)組Ⅰ> 試驗(yàn)組Ⅲ > 試驗(yàn)組Ⅱ（表2），投喂添加黃連、烏梅、黃柏比例1.2∶0.9∶1.0的復(fù)方中藥治療河流弧菌病的效果最佳。

中西藥聯(lián)用組，試驗(yàn)組V、VI、Ⅳ，40 d時(shí)石斑魚死亡率為14.00%±0.00%、13.67%±0.58%、12.67%±0.58%，試驗(yàn)組Ⅳ治療魚病效果最佳，該組黃連、烏梅、黃柏、恩諾沙星比例為 0.9∶1.3∶0.9∶1.3。而生產(chǎn)常用藥治療組對(duì)照組Ⅲ、對(duì)照組Ⅳ，40 d魚死亡率為85.00%、95.00%，死亡率高于中西藥聯(lián)用各配方用藥組。

綜上，病魚飼以添加黃連、烏梅、黃柏中藥復(fù)方飼料，可較好治療斜帶石斑魚河流弧菌病，治療效果優(yōu)于生產(chǎn)常用藥板黃散、大黃五倍子散。而黃連、烏梅、黃柏和恩諾沙星組成的中西藥復(fù)方治病效果較中藥復(fù)方療效更佳?？梢姡睅唪~飼料中添加黃連、烏梅、黃柏中藥復(fù)方或中西藥聯(lián)用藥，其抗病力明顯提高。

3 討論

河流弧菌可引起人、獸、水產(chǎn)動(dòng)物疾病[14]，是海水魚類養(yǎng)殖中的重要病原菌，可引起牙鲆（）、斜帶石斑魚（）、大黃魚（）患病，并造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[1-4, 15-18]。西藥防治易產(chǎn)生病原菌抗性，復(fù)方中藥或中西藥聯(lián)用防治魚病已成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。目前一些單方中藥與復(fù)方中藥的抑菌效果還未明了，不同單方中藥在魚體內(nèi)外抑菌效果不同，因此，獲得療效較佳的復(fù)方中藥、中西藥聯(lián)用配方，應(yīng)通過(guò)病魚治療試驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)際的應(yīng)用效果[13,19]。本研究通過(guò)河流弧菌體外抑制實(shí)驗(yàn)比較篩選出體外抑制河流弧菌效果較佳的三聯(lián)中藥復(fù)方再進(jìn)行魚病的治療效果試驗(yàn)，體外抑制實(shí)驗(yàn)表明，黃連、烏梅、黃柏配比為1∶1∶1，藥物水溶液質(zhì)量濃度為200 mg/mL時(shí)抑菌效果最佳，是最佳配方及用量。

張照紅等[20]通過(guò)研究黃芪等7味中草藥組成的復(fù)方對(duì)奧尼羅非魚（♀×.♂）的影響，發(fā)現(xiàn)飼料中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%復(fù)方中草藥對(duì)提高魚非特異性免疫力效果最顯著。本研究中，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2%的復(fù)方中藥亦可降低斜帶石斑魚的死亡率，且對(duì)斜帶石斑魚河流弧菌病療效優(yōu)于板黃散、大黃五倍子散等生產(chǎn)常用藥。可見本研究的中藥復(fù)方均可提高病魚的抗病力，對(duì)魚病療效優(yōu)于單一藥方?？赡艿脑蚴?，中藥復(fù)方對(duì)治療魚病有一定的協(xié)同增效作用。

本研究中，中西藥聯(lián)用組治療效果優(yōu)于中藥復(fù)方組。恩諾沙星是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最常用藥之一，抗菌力極強(qiáng)，對(duì)多種細(xì)菌性疾病療效較佳。王靜波等[21]研究表明，以魚體質(zhì)量30 mg/kg（正常量）拌餌投喂對(duì)魚體影響不大，鱘魚血清中GPT、GOT、AKP、SOD和溶菌酶指標(biāo)與對(duì)照組無(wú)顯著差異，但十倍劑量會(huì)損害魚類內(nèi)臟，且休藥期較長(zhǎng)。本研究恩諾沙星用量（30 mg/kg）在正常范圍內(nèi)，對(duì)魚體內(nèi)臟損傷少，且對(duì)魚病的治療效果顯著。

本研究篩選出2個(gè)配方，對(duì)斜帶石斑魚河流弧菌病療效較佳，罹患河流弧菌病的斜帶石斑魚在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中存活率高。復(fù)方中藥、中西藥聯(lián)用防治魚病，具有療效好、藥殘少、前景廣闊的優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果可為復(fù)方中草藥、中西藥聯(lián)用應(yīng)用于石斑魚的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 鄢慶枇, 鄒文政, 紀(jì)榮興. 應(yīng)用熒光抗體技術(shù)檢測(cè)牙鲆體內(nèi)的河流弧菌[J]. 海洋科學(xué), 2006, 30(4): 16-19.

[2] 王曉露, 鄒文政, 鄢慶枇, 等. 病原性河流弧菌對(duì)青石斑魚體表黏液黏附特性的研究[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2008, 32(3): 441-447.

[3] 朱蘇琴, 紀(jì)榮興, 蘇永全, 等. 河流弧菌() 對(duì)大黃魚()鰓黏液黏附特性研究[J]. 海洋與湖沼, 2012, 43(2): 389-393.

[4] 周妍妍, 閆東輝, 蘇建榮. 臨床分離河流弧菌毒力及藥敏表型特征分析[J]. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2016,15(5): 492-495.

[5] 唐懷慶，張健東，陳剛，等. 養(yǎng)殖密度、投喂頻率和投喂水平對(duì)珍珠龍膽石斑魚特定生長(zhǎng)率、飼料轉(zhuǎn)化率和胃蛋白酶活力的協(xié)同影響[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2018, 38(1): 22-31.

[6] 李焯新，蔡小輝，黃瑜，等. 中草藥與抗生素聯(lián)用對(duì)羅非魚源無(wú)乳鏈球菌的體外抑菌作用[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 36 (4): 45-49.

[7] 曾佳佳, 陳靜, 李士棟, 等. 中草藥-微生態(tài)制劑在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 飼料與畜牧, 2018 (8): 71-73.

[8] 李忠琴, 關(guān)瑞章, 郭松林, 等. 中藥雙聯(lián)用復(fù)方對(duì)養(yǎng)殖鰻鱺主要致病菌的抑制作用研究[J]. 集美大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011, 16(4): 241-245.

[9] 李霞, 馬馳原, 李雅娟, 等. 中草藥預(yù)混料對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能和免疫抗病力的影響[J]. 中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn), 2017, 7(2): 43-49.

[10] 陳輝輝, 涂晨凌, 唐楊, 等. 復(fù)方中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、消化酶和免疫因子活性及抗WSSV的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2017, 41(11): 1766-1777.

[11] 湯菊芬, 黃瑜, 蔡佳, 等. 中草藥復(fù)合益生菌制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、抗病力及水質(zhì)的影響[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 35(6): 47-52.

[12] 董曉慧, 李明, 葉繼丹. 復(fù)方中草藥對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和血清非特異免疫因子的影響[J]. 大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 24(2): 162-165.

[13] 張彬, 黃婷, 陳明, 等. 致病性鮰愛德華氏菌藥敏及中草藥體外抑菌作用研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào), 2010, 37(6): 282-287.

[14] 楊夢(mèng)香,柴方超, 周前進(jìn), 等. 應(yīng)用LAMP-LFD 技術(shù)可視化檢測(cè)河流弧菌()的研究[J]. 海洋與湖沼，2017，48(2): 383-390.

[15] 孫曉飛, 郭偉良, 謝珍玉, 等. 棕點(diǎn)石斑魚中草藥免疫增強(qiáng)劑的快速篩選[J]. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2015, 36(1): 54-60.

[16] CHEN Y Y, CHENG A C, CHENG S A. Orange-spotted grouperthat have encountered low salinity stress have decreased cellular and humoral immune reactions and increased susceptibility to[J]. Fish & Shellfish Immunology,2018, 80: 392-396.

[17] HAI T N, THUY T T N, CHEN, Y C. Enhanced immune responses and effectiveness of refined outer membrane protein vaccines againstin orange-spotted grouper ()[J]. Journal of Fish Diseases, 2018, 41: 1349-1358.

[18] ZHU Z M, DONG C F, WENG S P. The high prevalence of pathogenicwith multiple antibiotic resistance in scale drop and muscle necrosis disease of the hybrid grouper,(f) ×(o), in China[J]. Journal of Fish Diseases, 2018, 41: 589-601.

[19] 蘇振霞, 肖輝, 陳列歡, 等. 中藥單味藥及復(fù)方對(duì)嗜水氣單胞菌的體外抑菌作用[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志, 2011, 479(11): 52-54.

[20] 張照紅, 林旋, 張偉妮, 等. 復(fù)方中草藥對(duì)奧尼羅非魚血液非特異性免疫功能的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2011, 30(1): 1-5.

[21] 王靜波, 徐立蒲, 王小亮, 等. 鹽酸恩諾沙星對(duì)鱘魚主要非特異免疫指標(biāo)影響的研究[J]. 中國(guó)水產(chǎn)，2018(2):100-103.

Effect of Chinese Medicines Formula and Antibiotics PreventingDiseases of

XU Xiao-jin1,2,3, LI Xiu-hua4, MA Yi-fang5, LI Hui-yao1,2, QI Xin1,2, LYU Hai-long3, YAN Qing-pi1,2,3

(1.,.,,352103,; 2.,,361021,; 3.350308,; 4.,361021,; 5.361005,)

【】 To study the effects of antibacterial effect of the drugs againstin vitro and the drugs on the resistance to diseases of. To screen traditional Chinese medicines formula and Chinese and western medicines formula in preventingdiseases of【】Bacteriostatic test on traditional Chinese medicines formulaagainstin vitro was used. Theratios of,andof Chinese medicines formulas Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ are 0.9∶1.3∶0.9, 1.2∶0.9∶1.0，1∶1∶1, respectively. To test the drugs in preventing the diseases,was injected with either PBS as control orfor treatment. The fishes were divided into 10 groups for 73 days: control groupⅠ(healthy fish ), control groupⅡ(diseased fish), drug production in aquaculture control group Ⅲ (Banhuang San supplemental group, diseased fishes) and control group Ⅳ (Dahuang Wubeizi San supplemental group, diseased fishes). Theratios of,andwere different in Chinese medicines formulas trial groupⅠ,Ⅱ, Ⅲ. Theratio of,,and enrofloxaci were different in Chinese and western medicines formulas trial groupⅣ, V, VI. The groups with 3 replicates per treatment of feed containing the drugs feed additives at 2.2% respectively，were fed to. 【】The concentrations of Chinese medicines formulas Ⅲ (200mg/ml) is the best formula. The mortality for 40 d in test groups were as follows: control groupⅡ> control group Ⅳ> control group Ⅲ> trial groupⅠ> trial group Ⅲ> trial groupⅡ> trial group V> trial group VI> trial groupⅣ> control groupⅠ. Theratios of,of Chinese medicines formulaⅡis 1.2∶0.9∶1.0. Theratio of,,and enrofloxaci in Chinese and western medicines formula Ⅳare 0.9∶1.3∶0.9∶1.3. These are the best formulas. 【】The Chinese and western medicines formula is better than the Chinese medicines formula. By adding the formulas, the capacity of disease resistance can be improved.

Chinese medicines formula; enrofloxaci;;

S943.334.42

A

1673-9159（2019）05-0038-06

10.3969/j.issn.1673-9159.2019.05.006

2018-12-05

2018年開放課題基金項(xiàng)目（LYC2018RS04，閩海鷗[2018]31號(hào)）；福建省自然基金項(xiàng)目（2018J01455、2016N5009）；國(guó)家基金（是自然科學(xué)基金）（31702384）；福建省科技重大專項(xiàng)（2016NZ0001-3）；2017年集美大學(xué)研究生教育教學(xué)改革研究項(xiàng)目（集大研［2017］18號(hào)）；教育部鰻魚工程研究中心開放基金項(xiàng)目（RE201704）

徐曉津（1969―），女，副教授，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)微生物學(xué)。E-mail: xiaojinxu@jmu.edu.cn

鄢慶枇（1971―），男，教授，研究方向?yàn)樗a(chǎn)微生物學(xué)。E-mail: yanqp@jmu.edu.cn

徐曉津，李秀華，馬一帆，等. 中草藥復(fù)方及其與抗生素聯(lián)用對(duì)斜帶石斑魚河流弧菌病的治療效果[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，39（5）：38-43.

（責(zé)任編輯：劉慶穎）