李志斌

摘要：為進行豬0型口蹄疫免疫程序優(yōu)化，按母豬和肉豬進行分組試驗，抽血檢驗其血液中0型口蹄疫抗體的S/N值，計算抗體的陽性率。對目前常用的免疫程序進行優(yōu)化，結(jié)果：母豬1次免疫后的抗體保護時間為3.5～3.7個月，即每3.5～3.7個月進行1次普免;肉豬在37H齡前母源抗體能提供足夠的免疫保護，首免后，免疫保護時間能維持到80日齡。即肉豬的首免為37日齡，二免為80日齡。根據(jù)生產(chǎn)情況需要，125日齡時進行三免。

關(guān)鍵詞：口蹄疫疫苗;陽性率;口蹄疫抗體;免疫程序的優(yōu)化

中圖分類號：S858.28

文獻標識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.09.002

0 引言

口蹄疫病毒為RNA病毒科中口蹄疫病毒屬。病毒直徑為20～25nm，呈圓形，無囊膜。內(nèi)部為單股線狀正義RNA，決定病毒的感染性和遺傳性;外部為蛋白質(zhì)，決定其抗原性、免疫性和血清學反應(yīng)能力，并保護中央核糖核酸不受外界核糖核酸酶等因素的不利影響[1]?？谔阋卟《揪哂卸嘈行?、易變異的特點。根據(jù)血清學特性，目前可認為有7個血清型，即A、0、C、SAT1（南非1型）、SAT2（南非2型）、SAT3（南非3型）及Asial型（亞洲I型）。我國主要流行0型和I型口蹄疫，偶有A型[2]。2012年，我國流行的泛亞變異毒與世界各地流行的0型口蹄疫被證明存在很大變異，該文預(yù)測在未來數(shù)年將可能形成大面積流行[3]。

目前，廣泛使用的豬0型口蹄疫疫苗有滅活疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗。研究表明，合成肽疫苗具有較好免疫原性，免疫副反應(yīng)較小[4]。傳統(tǒng)滅活疫苗是采用細胞培養(yǎng)病毒，加滅活劑和油佐劑混合乳化而成，在免疫中不良反應(yīng)較大[5]。豬場母豬每年免疫3次，即每4個月免疫1次口蹄疫疫苗。肉豬分別在30、60、90日齡各免疫1次口蹄疫疫苗。

我國進行口蹄疫抗體監(jiān)測的主要方法是正向間接血凝試驗、液相阻斷ELISA以及膠體金法，目前均有相應(yīng)的商品化試劑盒供臨床應(yīng)用。

口蹄疫具有高度接觸傳染性，對畜牧業(yè)有巨大的負面影響，因此對口蹄疫的免疫預(yù)防要重點把握。目前病毒流行形勢越來越嚴峻，生產(chǎn)上的需求越來越大，對口蹄疫免疫程序的優(yōu)化就有更高要求，因此設(shè)計以下試驗。

1 材料與方法

1.1試驗動物與分組

試驗分兩條線選擇豬。試驗選擇既定日齡的健康豬群（體質(zhì)健壯、體重大小均勻，按程序常規(guī)免疫，飼養(yǎng)條件相同）。

（1）母豬：分成5組進行試驗。選擇1次普免前、1次普免后、2次普免前、2次普免后的健康豬群各30～40只。

（2）肉豬：分成7組進行試驗。選擇3s日齡未免疫、首免1周后、首免2周后、首免4周后、首免6周后、二免2周后、二免4周后的健康豬群各30～40只。

1.2試驗疫苗與檢驗試劑

豬口蹄疫0型滅火疫苗（OZK/93+OR/80株），金宇保靈生物制品有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：100mL/瓶，批號H110942J;檢驗試劑是韓國金諾VDPro FMDV-O型抗體檢測試劑盒。

1.3試驗材料采樣與編號

1.3.1采樣

①母豬：采取第1次普免前、第1次普免后、第2次普免前、第2次普免后的母豬血液3～5mL，各20份，共80份樣品血清。②肉豬：采取35、42、49、63、78、93、116日齡的血液3～5mL，各20份，共140份血清樣品。采得的血液樣本放置于4℃保溫箱中，0.5h后有血清析出，取另一試劑瓶保存血清，同樣置于4℃保溫箱。

1.3.2編號

按照試驗要求做好標記和編號，如35日齡小豬首免前為1～20。

1.4試驗檢測流程

①使用前將試劑盒所有組件恢復到室溫，取出抗原包被板;②標記樣品、陽性對照和陰性對照（對照各做2孔），每孔加入樣品稀釋液80uL，然后加入樣品血清，陰陽對照各20uL;③溫事孵育60min;④洗板;每孔加入洗滌液300uL，洗滌3次，最后用吸水紙拍十;⑤每孔加入100uL酶標抗體，溫室孵育60min;⑥重復步驟四，洗滌3次;⑦每孔加入TMB底物反應(yīng)液100uL，溫室暗處放置15min;⑧讀數(shù)：每孔加入50uL終止液，在酶標儀450nm波長處讀數(shù)。

1.5試驗數(shù)據(jù)計算與判斷

試驗有效性判斷及判定標準：①陰性對照OD值≥0.6;陽性對照OD值<0.3。②S/N值的計算方程式：S/N=[樣品值/陰性值]。③S/N值<0.6時判為陽性;S/N值>0.6時判為陰性。

2試驗結(jié)果

2.1母豬組

各階段樣品豬S/N值詳細數(shù)據(jù)（隨機抽取20份血清進行檢測），見表1。陽性率和S/N值見圖l。

2.2肉豬組

各階段樣品豬S/N值詳細數(shù)據(jù)（隨機抽取20份血清進行檢測），見表2。陽性率和S/N值見圖2。

3討論

根據(jù)試驗試劑說明書的判定標準，S/N值的數(shù)值大小與豬血清中抗體效價呈現(xiàn)負相關(guān)。因此，在合理范圍內(nèi)，S/N值越大，抗體的效價越低;反之，S/N值越小，抗體效價越高。

由于母源抗體不能一直保存在體內(nèi)，因此在規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)中母豬的抗體來源通常是疫苗免疫。從圖表中分析，每個免疫階段的S/N值的差異都較大，抗體的陽性率上下波動。國家標準要求口蹄疫抗體保護率≥70%[6]。因此在陽性率降低至一定數(shù)值時，要開始進行免疫。在第1次普免前，豬群的S/N值為0.205，陽性率即保護率為73.25%，數(shù)值即將降到70%，這是上一次免疫的保護效果。隨著時間增長，保護率逐漸減低。因此，要進行免疫。并非一定要70%的保護率才可以免疫，只要數(shù)值接近臨界點就進行免疫，可避免養(yǎng)殖戶承受更大風險。2018年4月11日第1次普免，根據(jù)測得的數(shù)據(jù)，第2次普免應(yīng)該在7月25日左右，時間間隔為3.5個月。而通常豬場母豬的免疫次數(shù)為3次，即每4個月1次。

仔豬在出生一段時間內(nèi)有母源抗體保護，因此在仔豬出生后的這段時間里不需要進行疫苗免疫。從圖表中分析，豬群的抗體S/N值呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，陽性率則在一定的范圍內(nèi)上下波動。隨著抗原水平下降，在35日齡時抗體陽性率下降至73.25%，此時開始準備免疫，在26～27日進行首次免疫保護。此后，通過檢測數(shù)據(jù)可以分析，在首免后1周時抗體的陽性率達到100%，隨時間推移，分析出在首免6周后，抗體陽性率降至74.88%，此時正進行第2次免疫保護，即在80～82日齡時進行第2次免疫保護。在第2次免疫2周后，抗體的陽性率達到100%。隨時間推移，抗體陽性率下降至79.33%。按照這個抗體的衰減速度，可在110～112日齡進行第3次免疫保護。

4結(jié)論

（1）母豬組。常用的母豬口蹄疫免疫程序為每年免疫3次，即每4個月免疫1次。母豬每2次的免疫的時間間隔縮短到每3.5～3.7個月免疫1次。因此得出規(guī)模豬場的母豬免疫程序為每3.5～3.7個月免疫1次。

（2）肉豬組。豬場的免疫程序為30、60、90日齡各免疫1次，即出生后每1個月免疫1次。仔豬母源抗體的保護時間能達到37d，37日齡前后進行免疫。首免后保護時間能到達80日齡。因此規(guī)模豬場肉豬的免疫程序為37日齡進行首免，80日齡進行第2次免疫，觀察生產(chǎn)情況是否需要第3次免疫，通常在125日齡左右進行。

參考文獻

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[5] 楊志軍，林焱，李光金，等。含T細胞表位和B細胞表位的抗O型FMDV基因T程疫曲誘導豚鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)[J] 復旦學報（自然科學版），2000（5）：564-568

[6]黃衛(wèi)平，程曉規(guī)?；B(yǎng)豬場仔豬口蹄疫免疫程序的制定[J]四川畜牧獸醫(yī)，2012（10）：19-20.