邱波, 王艷, 胡建廷

(1. 山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省化學(xué)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 濟(jì)南 250101;2. 山東英才學(xué)院, 濟(jì)南 250104)

大鼠心臟自發(fā)性原發(fā)性腫瘤罕見(jiàn)，心臟的自發(fā)性原發(fā)性腫瘤包括心房間皮瘤、心臟副神經(jīng)節(jié)瘤、心內(nèi)膜神經(jīng)鞘瘤和心壁內(nèi)神經(jīng)鞘瘤等[1-3]。海綿狀血管瘤也是大鼠心臟自發(fā)性原發(fā)性腫瘤的一種類型，但對(duì)于大鼠心臟自發(fā)性原發(fā)性腫瘤中的海綿狀血管瘤的文獻(xiàn)報(bào)道極為罕見(jiàn)。本文以空白對(duì)照組大鼠(試驗(yàn)周期為26周)出現(xiàn)的一例自發(fā)性心臟海綿狀血管瘤為研究對(duì)象, 通過(guò)肉眼形態(tài)觀察、HE染色及血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31陽(yáng)性標(biāo)記物的免疫組織化學(xué)染色方法, 對(duì)該病例進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)的初步探討。

1 動(dòng)物來(lái)源與飼養(yǎng)環(huán)境

6～8周齡SPF級(jí)SD大鼠160只，雌雄各半，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[SCXK(京)2012-0001]。動(dòng)物飼養(yǎng)于本中心SPF級(jí)動(dòng)物房大鼠飼養(yǎng)間[SYXK(魯)2014-0008]，分4組進(jìn)行為期26周的灌胃重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)。

2 患病動(dòng)物概況

該患病動(dòng)物為給藥26周結(jié)束后的空白對(duì)照組(雌雄各10)雄性大鼠。肉眼觀察，該動(dòng)物心臟腫大，檢查體表皮膚無(wú)破損，眼、耳、鼻、口、外陰部等無(wú)出血或分泌物，肛周無(wú)排泄物附著。大鼠經(jīng)剖檢后對(duì)心臟組織進(jìn)行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)觀察。

3 肉眼形態(tài)學(xué)觀察

剖檢見(jiàn)病變位于室間隔，與心壁間界限不清晰，呈海綿樣結(jié)構(gòu)，大小約1.5 cm×0.8 cm×0.5 cm，切面呈蜂窩狀(圖1箭頭所示)。

4 組織病理學(xué)檢查

顯微鏡下, 觀察到心肌組織間含海綿狀血管瘤成分, 主要由邊界不清、擴(kuò)張、充血的血管構(gòu)成, 血管腔大小不等, 血管腔內(nèi)有許多紅細(xì)胞, 管壁常較薄,內(nèi)襯扁平的內(nèi)皮細(xì)胞, 內(nèi)皮細(xì)胞未見(jiàn)異型性(圖2)。

5 CD31免疫組織化學(xué)

圖 1 心臟的肉眼形態(tài)學(xué)觀察

5.1 試劑

SP-0023 HistostainTM-Plus Kits免疫組織化學(xué)試劑盒，規(guī)格: 18 mL，批號(hào): AG08164417，Rabbit Anti-CD31單抗、DAB染色試劑盒，均由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供。

圖 2 心臟海綿狀血管瘤的病理組織學(xué)觀察

5.2 方法

CD31免疫組織化學(xué)染色: (1)石蠟切片, 常規(guī)脫蠟至水; (2)蒸餾水沖洗, PBS浸泡5 min; (3) 抗原修復(fù): 將切片插到玻璃切片架上, 倒入0.01 mol/L的檸檬酸鈉緩沖液，微波爐中火加熱3 min至沸騰后，靜置5 min, 再加熱3 min至沸騰, 自然冷卻至室溫，PBS漂洗3次，每次2 min; (4) 3%去離子水孵育15～20 min; (5)添加試劑A室溫孵育15～20 min，傾去，勿洗; (6)添加適當(dāng)比例稀釋的一抗，4 ℃過(guò)夜; (7)PBS沖洗，3 min×3次;(8)添加試劑B, 室溫孵育15～20 min; (9)PBS沖洗,3 min×3次; (10)添加劑C, 室溫孵育15～20 min;(11) PBS沖洗，3 min×3次; (12)顯色劑顯色。(13)自來(lái)水充分沖洗; (14)復(fù)染：蘇木素輕度復(fù)染1 min，鹽酸酒精分化，自來(lái)水藍(lán)化5～10 min;(15)高梯度系列酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，鏡檢。

5.3 結(jié)果

血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，低倍鏡下(圖3A)，心肌間含海綿狀血管瘤成分，血管腔大小不等，呈海綿狀改變，血管腔內(nèi)有許多紅細(xì)胞; 高倍鏡下(圖3B)，毛細(xì)血管管壁較薄，管腔擴(kuò)大，管腔內(nèi)充滿紅細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞扁平，陽(yáng)性染色，呈棕褐色。

6 討論

在大鼠中，大多數(shù)原發(fā)性腫瘤通常為低分化的間充質(zhì)腫瘤，由梭形細(xì)胞組成，這些梭形細(xì)胞腫瘤通常被認(rèn)為是神經(jīng)鞘瘤，這一觀點(diǎn)已被S100蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽(yáng)性支持[4,5]。血管瘤也是大鼠心臟自發(fā)性原發(fā)性腫瘤的一種類型，但人們對(duì)于大鼠心臟原發(fā)性腫瘤中的血管瘤的報(bào)道極為罕見(jiàn)。對(duì)大鼠來(lái)說(shuō)，血管瘤最常見(jiàn)于脾臟、肝臟和皮下組織[6]。血管瘤是相對(duì)邊界清楚的血管腫瘤，其特征是大小不一的血管輪廓，內(nèi)襯單層均勻、分化良好的內(nèi)皮細(xì)胞，其特征類似于正常的血管內(nèi)皮?；|(zhì)通常很少[7]。本病例鏡下觀察心肌間由大小不一的血管輪廓組成，血管內(nèi)襯單層均勻、分化良好的內(nèi)皮細(xì)胞，這與大鼠血管瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)相一致。

圖 3 心臟海綿狀血管瘤的免疫組織化學(xué)染色

與大鼠相比，人類心臟血管瘤報(bào)道的文獻(xiàn)資料相對(duì)較多，但是對(duì)于人類來(lái)說(shuō)，心臟血管瘤也是十分罕見(jiàn)的原發(fā)性良性腫瘤，占心臟腫瘤的0.8%[8]。據(jù)谷伯起[9]和Basso等[8]統(tǒng)計(jì)，過(guò)去國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)告只占0.8%～2.8%。病理組織學(xué)上主要有兩種：毛細(xì)血管瘤和海綿狀血管瘤。毛細(xì)血管瘤鏡下主要為大量新生的毛細(xì)血管，新生的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生肥胖，管腔大小不等，管腔內(nèi)幾乎沒(méi)有紅細(xì)胞; 而海綿狀血管瘤主要為增生的毛細(xì)血管是薄壁，管腔擴(kuò)大，大小不等，管腔內(nèi)充滿紅細(xì)胞，呈海綿狀改變[10]。海綿狀血管瘤是一種比較少見(jiàn)的血管源性腫瘤，機(jī)體任何部位都可發(fā)生，常見(jiàn)于皮膚、肌肉，而發(fā)生在心臟的海綿狀血管瘤極為罕見(jiàn)。本病例剖檢肉眼觀察血管瘤體積小、呈海綿樣結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色顯示血管內(nèi)皮細(xì)胞上CD31分子為陽(yáng)性; 鏡下觀察瘤體由不規(guī)則形的血竇構(gòu)成，瘤與心壁間界限不清晰，瘤體中心部的血管竇纖維間隔可見(jiàn)散在的心肌細(xì)胞，高倍鏡下未見(jiàn)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生肥胖，而本病例血管管腔擴(kuò)張，管腔內(nèi)充滿紅細(xì)胞，呈海綿狀改變。因此，結(jié)合上述肉眼形態(tài)學(xué)觀察、組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31分子染為陽(yáng)性的方法，本病例可診斷為心臟血管瘤類型中的海綿狀血管瘤。