朱衛(wèi)萍 饒高雄

摘要：目的 建立黃龍尾藥材的薄層方法。方法 采用薄層層析法對三批黃龍尾藥材進(jìn)行鑒別。結(jié)果 采用所篩選的薄層鑒別法展開后，與對照藥材的相應(yīng)位置有相應(yīng)的斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾，結(jié)論 薄層色譜分離度好，特異性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為黃龍尾藥材的鑒別方法。

關(guān)鍵詞：黃龍尾;薄層色譜;鑒別

中圖分類號：R286.0?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2019）09-0068-02

黃龍尾來源于薔薇科植物黃龍尾Agrimonia pilosa Ledeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.的干燥地上部分[1]，為仙鶴草的變種，具有收斂止血的功效，主要用于治療咯血、尿血、便血的等各種出血證，除了中草藥應(yīng)用外，納西族、彝族、哈尼族多種民族亦做藥用[2]。

1 儀器與材料

FA1104型0.1mg電子分析天平（上海上平儀器公司）;JP250YHE型超聲波清洗器（南京壘君達(dá)超聲電子設(shè)備有限公司）;硅膠G板（青島海洋化工廠）。正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿均為分析純，水為滅菌注射用水;三批黃龍尾試驗(yàn)樣品分別采自昆明谷律（A20090801），大理清碧溪（B20090818）、楚雄羅茨（C20090709），經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)楊樹德教授鑒定為黃龍尾。

2 方法與結(jié)果

2.1.1 系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn) 文獻(xiàn)報道，黃龍尾（Agrimonia pilosa Ledeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.）主要含有黃酮，鞣質(zhì)和酚類成分，黃酮類有槲皮素、蘆丁、兒茶素等;鞣質(zhì)類有鞣花酸-4-O-β-D-吡喃木糖苷，鞣花酸等;酚類有仙鶴草酚等。此外，還有三萜皂苷，酯類成分。根據(jù)化學(xué)成分研究報道再通過化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示鞣質(zhì)、酚性成分和黃酮是黃龍尾主要的化學(xué)成分[3-7]。

2.1.2 薄層色譜展開系統(tǒng)篩選 根據(jù)文獻(xiàn)資料和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，按黃龍尾藥材所含鞣質(zhì)以及酚性成分研究制定薄層色譜鑒別方法。小極性部分展開系統(tǒng)優(yōu)選：環(huán)己烷-乙酸乙酯（10：1;5：1;3：1），環(huán)己烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-甲醇（20：1;15：1;10：1），三氯甲烷-甲醇-甲酸（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-水（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（20：1：0.1：0.1）上行展開;大極性部分展開系統(tǒng)優(yōu)選：三氯甲烷-甲醇（3：1;2：1;1：1），三氯甲烷-丙酮（1：1），正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上層），三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10，下層），三氯甲烷-乙醇（（3：1;2：1;1：1），上行展開。

2.1.3 供試品提取方法優(yōu)化 供試品溶液制備分別采用了以下8種方法進(jìn)行篩選和優(yōu)化。方法1：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法2：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法3：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法4：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法5：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法6：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法7：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法8：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。

對照物質(zhì)的選用 目前尚無鑒別該藥材專屬性對照品，故鑒別項(xiàng)目中選擇對照藥材為對照物質(zhì)，照供試品溶液的制備方法制備對照藥材溶液。

對照藥材溶液制備：小極性部分：取黃龍尾對照藥材1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對照藥材溶液。

大極性部分：取黃龍尾對照藥材1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4 檢視方法選擇 噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰;噴以三氯化鐵試液，置日光下檢視，置紫外光燈（254nm+365nm）下檢視結(jié)果見表1。

2.1.5 方法耐用性考察

2.1.5.1 不同廠牌的薄層板 硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）;硅膠G薄層板（青島美高化工有限公司）;硅膠G薄層板（煙臺信德化工有限公司）。

2.1.5.2 點(diǎn)樣方式點(diǎn)樣量 點(diǎn)樣方式為接觸點(diǎn)樣;點(diǎn)樣量為1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL、8 μL。

2.1.5.3 溫度及相對濕度的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察本品在溫度10～30℃、相對濕度為35%～80%展開時，對薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果表明，在上述溫度、相對濕度范圍內(nèi)對該薄層色譜結(jié)果無明顯影響。

2.1.5.4 預(yù)平衡的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展開，對薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果表明，未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展開，所得斑點(diǎn)的分離度均較好，因此，為了簡化操作程序，采用未平衡展開。

2.1.5.5 重復(fù)性 不同產(chǎn)地的3批樣品的檢測結(jié)果表明，該方法具有重復(fù)性。

2.2 結(jié)果 試驗(yàn)表明，小極性部分：采用方法8制備供試品溶液，硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量2 μL，以三氯甲烷-甲醇（20：1）為展開劑，噴以含有10%硫酸乙醇試液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰.

大極性部分：試驗(yàn)表明，采用方法3制備供試品溶液，硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量2μl，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上層）為展開劑，噴以三氯化鐵試液后置日光下檢視，所得薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離較好。

3 討論

根據(jù)黃龍尾為所含化學(xué)成分的不同，將該藥材的薄層色譜鑒別分為小極性部分和大極性部分兩個段來鑒別;兩個極性段用所優(yōu)選的方法鑒別，分離效果好，斑點(diǎn)清晰，有較好的鑒別意義。本研究對黃龍尾的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制和薄層色譜鑒別提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2019-06-03）