，鄔攀 ，余幼林 ，劉程浩 ，沈浩元，戴一菲，胡超華，周宏眾，武慶林

（武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院 1.普外科，2.病理科，湖北 孝感 432000；3.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 甲狀腺乳腺外科，浙江 溫州 325000）

三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer, TNBC）是一類雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）及人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factorreceptor-2, HER-2）表達(dá)為陰性的乳腺癌，占所有乳腺癌病理類型的15%～20%，總體預(yù)后較差[1-2]。TNBC缺乏臨床治療的有效靶點(diǎn)，因此探索TNBC相關(guān)發(fā)生、發(fā)展機(jī)制尤為重要。CD97及CD55作為跨膜蛋白的黏附分子受體及配體，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[3-4]。研究顯示，CD97和CD55在直腸癌[5]、膽囊癌[6]及膽管癌[7]中高表達(dá)，并與臨床預(yù)后相關(guān)。本研究通過(guò)對(duì)TNBC組織中CD97和CD55的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，分析其與TNBC臨床病理特征的關(guān)系，探討其在TNBC發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月—2018年6月在武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)并病理檢查證實(shí)為TNBC的70例患者的組織蠟塊及完整病例資料，同時(shí)選取50例切除腫瘤標(biāo)本周圍正常乳腺組織（距腫瘤邊緣≥5 cm）作為對(duì)照組。所有患者為女性，年齡21～78歲，中位年齡43.5歲；全部患者術(shù)前未進(jìn)行新輔助化療；所有患者免疫組織化學(xué)檢測(cè)ER、PR及HER-2為陰性；對(duì)免疫組織化學(xué)檢測(cè)HER-2為陽(yáng)性（++）的患者同時(shí)進(jìn)行FISH檢測(cè)，排除HER-2陽(yáng)性患者。臨床分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期39例，Ⅲ期17例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)20例，Ⅱ級(jí)39例，Ⅲ級(jí)11例；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者35例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；脈管癌栓38例，脈管無(wú)癌栓32例；Ki-67高表達(dá)45例，低表達(dá)25例。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。

1.2 方法

兔抗CD97多克隆抗體（13071-1-AP）及兔抗CD55單克隆抗體（26580-1-AP）采用Envision二步法，免疫組織化學(xué)試劑盒Proteintech Group Brand購(gòu)自武漢珈源生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，工作濃度均為1：1 000），CD97及CD55分別以已知的淋巴瘤作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性染色。嚴(yán)格按免疫組織化學(xué)法試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。染色結(jié)果由2位病理醫(yī)師進(jìn)行隨機(jī)閱片。在400倍視野下，每張切片隨機(jī)取5個(gè)視野，每個(gè)視野隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，采用二次計(jì)分法計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。細(xì)胞膜或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃或棕黃色顆粒為染色陽(yáng)性。參照Remmele半定量計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行結(jié)果評(píng)分：免疫反應(yīng)評(píng)分（IRS）=陽(yáng)性細(xì)胞百分率×染色強(qiáng)度。陽(yáng)性細(xì)胞＜10%為1分，10%～＜51%為2分，51%～＜80%為3分，≥80%為4分；染色強(qiáng)度等級(jí)：陰性為0分，弱陽(yáng)性為1分，中度陽(yáng)性為2分，強(qiáng)陽(yáng)性為3分；將兩者的結(jié)果綜合分析：IRS≥2為陽(yáng)性表達(dá)，IRS＞6為高表達(dá)，IRS≤6為低表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)分析用Spearman法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD97與CD55在TNBC和正常乳腺組織中的表達(dá)

CD97與CD55蛋白染色定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，在癌組織中高表達(dá)，在正常乳腺組織中低表達(dá)。TNBC組CD97和CD55蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TNBC組高于對(duì)照組。另外可見(jiàn)CD97及CD55在癌組織中部分高表達(dá)在細(xì)胞間質(zhì)、腫瘤中央表達(dá)較少。見(jiàn)表1和圖1。

2.2 CD97、CD55蛋白表達(dá)與TNBC臨床病理特征的關(guān)系

CD97、CD55蛋白的表達(dá)與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05），與Ki-67表達(dá)、腫瘤大小、臨床分期、脈管癌栓及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 兩組CD97和CD55蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

圖1 兩組CD97和CD55蛋白的表達(dá) （免疫組織化學(xué)×400）

表2 不同影響因素TNBC患者CD97和CD55蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 例（%）

2.3 CD97和CD55蛋白表達(dá)的相關(guān)性

TNBC中CD97表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性30例，中度陽(yáng)性15例，弱陽(yáng)性18例，陰性7例；CD55表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性28例，中度陽(yáng)性14例，弱陽(yáng)性15例，陰性13例，Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，兩者陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)（rs=0.334，P=0.005）。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多步驟、多階段的病理過(guò)程，轉(zhuǎn)移是腫瘤的最根本惡性特征，也是腫瘤患者的最主要死亡原因[8]；腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展包括黏附特性的改變，癌細(xì)胞與基底膜、細(xì)胞間質(zhì)緊密附著，基底膜的降解，腫瘤血管生成，腫瘤細(xì)胞遷移等過(guò)程，其中黏附分子在腫瘤的進(jìn)展中起重要作用。

CD97屬于黏附分子受體的跨膜蛋白，通過(guò)胞外的EGF樣功能區(qū)與細(xì)胞外基質(zhì)成份或其他細(xì)胞表面分子結(jié)合，發(fā)揮黏附作用，通過(guò)7次跨膜區(qū)介導(dǎo)激素受體功能傳遞信號(hào)，是一個(gè)具有細(xì)胞黏附及信號(hào)傳導(dǎo)雙重作用蛋白[3]。CD55為CD97的配體，屬于膜結(jié)合型補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，通過(guò)抑制補(bǔ)體攻膜復(fù)合物的形成，從而使腫瘤細(xì)胞逃脫補(bǔ)體攻擊。相關(guān)動(dòng)物、細(xì)胞、臨床實(shí)驗(yàn)研究表明，CD97分子的表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)、遷移、侵襲相關(guān)[9-12]，并且研究至CD97亞基水平。AUST等[13]表明，CD97在惡性腫瘤中的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān)，是腫瘤治療及預(yù)后的標(biāo)志物。另外，CD55在胃間質(zhì)瘤、結(jié)腸癌中高表達(dá)并與腫瘤的臨床病理特征相關(guān)，可表明CD55在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起相應(yīng)作用[14-15]。結(jié)合筆者的研究結(jié)果，在TNBC組織中CD97和CD55蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與正常乳腺組織相比較有差異，在癌組織中高表達(dá)與上述研究結(jié)論一致，提示CD97及CD55在腫瘤的進(jìn)展中起一定的作用；另外，CD97蛋白表達(dá)在細(xì)胞膜及細(xì)胞外間質(zhì)，瘤體中央?yún)^(qū)表達(dá)較少，表明腫瘤細(xì)胞可能利用CD97作為黏附性受體與周圍細(xì)胞及間質(zhì)增強(qiáng)識(shí)別環(huán)境的能力，通過(guò)“芽生”不斷地向外侵襲、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。

CD97與CD55兩者表達(dá)在TNBC中呈正相關(guān)，表明CD97與CD55在腫瘤表達(dá)具有一致性。CD97與CD55以受體及配體結(jié)合的形式參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，并與TNBC腫瘤的大小、Ki-67表達(dá)、脈管癌栓、臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且腫瘤越大、Ki-67表達(dá)越強(qiáng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高、臨床分期越高，CD97與CD55蛋白表達(dá)越強(qiáng)。綜上表明CD97與CD55以受體及配體復(fù)合體參與腫瘤的遷徙、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移，可能的機(jī)制為：①CD55為補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，在腫瘤中高表達(dá)，是保護(hù)腫瘤細(xì)胞免遭補(bǔ)體介導(dǎo)的溶解破壞，在腫瘤免疫中起重要作用；另外，有研究表明，CD55直接與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、血管生成、腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)[16]。HOLLA等[17]研究表明，CD55與前列腺素E2表達(dá)相關(guān)，而前列腺素E2可促進(jìn)腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移；抑制CD55基因的表達(dá)可影響腫瘤細(xì)胞的增殖，可影響腫瘤的細(xì)胞周期[18]。②CD97根據(jù)胞外其N端糖基化位點(diǎn)及數(shù)量不同，可分為CD97EGF和CD97Stalk，這2種表型可直接影響腫瘤細(xì)胞增殖、遷徙、細(xì)胞周期[19]；另有研究顯示：CD97在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)與MMPs和β-catenin相關(guān)：MMPs表達(dá)升高一般與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)，β-catenin與腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲相關(guān)[9，20]。③CD97與其配體CD55結(jié)合后可能激活細(xì)胞核相關(guān)信號(hào)通路和細(xì)胞間質(zhì)相關(guān)信號(hào)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞黏附性改變、侵襲、轉(zhuǎn)移[21]。

綜上所述，CD97及其配體CD55高表達(dá)與TNBC的大小、Ki-67表達(dá)、脈管癌栓、臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，表明CD97與CD55可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究提供新的方向。