劉月煥

·導(dǎo)讀·

加快推進(jìn)我國(guó)水禽疫病防控技術(shù)的研究

劉月煥

（北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097）

近年來(lái)，我國(guó)的水禽產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展，2018年我國(guó)肉鴨出欄量約35億只，肉鵝超過(guò)5億只，鴨蛋400萬(wàn)噸，總產(chǎn)值超過(guò)1 500億元。根據(jù)世界糧農(nóng)組織的數(shù)據(jù)推算，2018年我國(guó)鴨養(yǎng)殖量占全球的74.3%，鵝養(yǎng)殖量占全球的93.3%，是世界上肉鴨和鵝出欄最多的國(guó)家[1]。水禽產(chǎn)業(yè)已經(jīng)成為我國(guó)畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的重要組成部分，是農(nóng)民增收的重要來(lái)源之一。但目前我國(guó)水禽總體養(yǎng)殖水平偏低，由于飼養(yǎng)數(shù)量和飼養(yǎng)密度不斷增加及各省市間活禽調(diào)運(yùn)頻繁，加之水禽養(yǎng)殖多依賴(lài)水資源，較難進(jìn)行徹底消毒，生物安全管理薄弱，致使水禽養(yǎng)殖老病未除，又添新病。鴨病毒性腸炎于20世紀(jì)50年代在國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)[2]，流行廣泛、傳播迅速、死亡率高。小鵝瘟主要感染雛鵝和雛番鴨，發(fā)病率和死亡率幾可高達(dá)100%。常引起雛鵝大批死亡，對(duì)養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展影響極大[3]。鴨坦布蘇病毒病于2010年首次在國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)，造成產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)蛋量急劇下降，由于繼發(fā)感染和飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)纫蛩乜芍滤劳雎蔬_(dá)到15%—20%[4-5]。

為控制和減少水禽疫病發(fā)生、保障水禽產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，科研人員在病原的生物學(xué)特性、致病機(jī)理、疫苗研制等方面開(kāi)展了大量研究，并取得了一些新的進(jìn)展。本期《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)》（52卷23期）刊登的“水禽疫病防控”專(zhuān)題，共收集6篇論文，2篇與鴨腸炎病毒相關(guān)，涉及病毒生物學(xué)特性研究和表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA基因重組鴨腸炎病毒的構(gòu)建；4篇與鴨坦布蘇病毒病防控技術(shù)相關(guān)，包括鴨坦布蘇病毒分離株的毒力、抗原性和基因序列的比較，鴨坦布蘇病毒血凝特性，鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗本動(dòng)物免疫攻毒效力檢驗(yàn)替代新技術(shù)以及可以抑制鴨坦布蘇病毒復(fù)制的鴨寡腺苷酸合成酶樣蛋白原核表達(dá)及多克隆抗體的制備。這些研究?jī)?nèi)容各有側(cè)重，為有效控制制約水禽產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的疫病提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)方法。

鴨病毒性腸炎是由鴨腸炎病毒（duck enteritis virus，DEV）引起的一種急性傳染病，也稱(chēng)為鴨瘟。該病傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高，在全球都有分布，通過(guò)遷徙水禽在各大洲之間廣泛傳播，對(duì)水禽產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重影響[6-7]，也給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。DEV屬于皰疹病毒科，核酸為線性、雙股DNA，分為UL和US區(qū)，兩端為重復(fù)序列。DEV基因組研究對(duì)了解病毒的復(fù)制和感染機(jī)制等方面有科學(xué)意義。在本專(zhuān)題中，毛婭卿等[8]對(duì)DEV的UL56基因進(jìn)行了研究，以紅色熒光蛋白（RFP）為報(bào)告基因，構(gòu)建缺失UL56基因下游3513bp的重組病毒，比較了缺失前后病毒在細(xì)胞中的生長(zhǎng)特性以及對(duì)易感鴨的致病性、免疫原性。

由于DEV基因組大且宿主范圍窄，既能夠潛伏，也能誘導(dǎo)廣泛強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，以DEV作為載體，研制表達(dá)多種病原體目的蛋白的重組DEV，制備經(jīng)濟(jì)有效的多聯(lián)苗[6, 9-11]，可達(dá)到“一針?lè)纼刹』蛉　钡哪康?。水禽作為流感病毒的天然宿主，在自然條件下感染禽流感病毒并不會(huì)引起發(fā)病和死亡。但帶毒水禽會(huì)經(jīng)過(guò)腸道長(zhǎng)期向水體中排毒，病毒在水體內(nèi)保存一段時(shí)間后仍具有感染性[12]。馬利芳等對(duì)2014—2015年采集的260份組織樣品進(jìn)行了多種病原檢測(cè)，在病毒感染陽(yáng)性樣品中，H9亞型禽流感病毒的檢出率為35.3%[13]。有研究將DEV作為載體表達(dá)H5亞型禽流感病毒，構(gòu)建可同時(shí)保護(hù)鴨瘟和禽流感的雙價(jià)疫苗[14-16]。在本專(zhuān)題中，孫瑩等[17]成功地將H9亞型AIV HA基因插入到缺失gE基因的DEV內(nèi)，獲得了穩(wěn)定表達(dá)HA基因的重組病毒。該重組病毒保留了親本毒的免疫原性，能使宿主抵抗致死性DEV強(qiáng)毒的攻擊；免疫鴨后能誘導(dǎo)產(chǎn)生AIV HI抗體，盡管HI抗體效價(jià)偏低，但仍可有效降低病毒載量或減少排毒。

鴨坦布蘇病毒病自2010年在我國(guó)暴發(fā)后，在全國(guó)主要養(yǎng)鴨地區(qū)均時(shí)有發(fā)生，已經(jīng)成為危害我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)的主要疫病之一。該病的預(yù)防主要依靠疫苗免疫，國(guó)內(nèi)多家單位進(jìn)行了疫苗研制[18-21]，目前已通過(guò)國(guó)家新獸藥注冊(cè)的有滅活疫苗和活疫苗。鴨坦布蘇病毒病流行至今，其病原是否出現(xiàn)變異，現(xiàn)有疫苗能否提供足夠有效的保護(hù)，是研究人員非常關(guān)注的問(wèn)題。本專(zhuān)題中，楊志遠(yuǎn)等[22]對(duì)2011—2015年間從發(fā)病養(yǎng)鴨場(chǎng)分離到的4株鴨坦布蘇病毒分離株進(jìn)行了毒力比較、抗原差異性研究及E基因序列分析。通過(guò)人工感染、基因序列構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)、交叉血凝抑制試驗(yàn)和血清交叉中和試驗(yàn)等研究，認(rèn)為這4株病毒分離株在毒力、抗原性及E基因序列上沒(méi)有顯著差異。

日本乙型腦炎病毒、西尼羅病毒等多種黃病毒屬成員具有血凝性。鴨坦布蘇病毒為黃病毒科成員，但其是否具有血凝性，此前的報(bào)道不盡相同[23-26]。本專(zhuān)題中，王小蕾等[27]利用乳鼠腦內(nèi)接種增殖鴨坦布蘇病毒，發(fā)現(xiàn)用蔗糖-丙酮法提純后的病毒具有廣譜的血凝性，可以凝集雞、鴨、鵝、鴿和豬的紅細(xì)胞。目前鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗的效力評(píng)價(jià)方法為本動(dòng)物免疫攻毒法，但免疫攻毒試驗(yàn)過(guò)于頻繁存在生物安全隱患、使用負(fù)壓動(dòng)物舍成本高等問(wèn)題，國(guó)家鼓勵(lì)研究和采用替代本動(dòng)物免疫攻毒的效力評(píng)價(jià)技術(shù)對(duì)疫苗進(jìn)行效力評(píng)價(jià)。建立鴨坦布蘇病毒抗體的血凝抑制檢測(cè)方法[28]后，王小蕾等[29]將該方法用于鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗的效力評(píng)價(jià)，并對(duì)該方法與現(xiàn)有效力檢驗(yàn)方法即免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)的相關(guān)性進(jìn)行了分析，證明鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗（HB株）免疫后HI抗體與攻毒保護(hù)率存在正相關(guān)，可替代免疫攻毒法用于鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗的效力評(píng)價(jià)。

鴨寡腺苷酸合成酶樣蛋白（duck oligoadenylate synthetase-like protein，DuOASL）是寡腺苷酸合成酶家族蛋白的一種，已有研究表明OAS家族蛋白是一種具有廣譜的抗病毒活性蛋白。通過(guò)鴨OASL蛋白過(guò)表達(dá)和干擾表達(dá)在細(xì)胞學(xué)水平證實(shí)其可以抑制鴨坦布蘇病毒的復(fù)制。畢可然等[30]通過(guò)原核表達(dá)和多克隆抗體制備技術(shù)獲得帶有GST標(biāo)簽的原核表達(dá)蛋白和多克隆抗體，這對(duì)深入探討鴨寡腺苷酸合成酶樣蛋白抑制病毒復(fù)制分子機(jī)制研究奠定了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2018年8月以來(lái)，非洲豬瘟重創(chuàng)了我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)，過(guò)去一年非洲豬瘟導(dǎo)致的豬肉產(chǎn)品不足，這部分缺口急需家禽來(lái)彌補(bǔ)?？梢哉f(shuō)，非洲豬瘟的發(fā)生對(duì)包括水禽在內(nèi)的家禽產(chǎn)業(yè)來(lái)說(shuō)是一個(gè)機(jī)遇。但眾多疫病仍影響著水禽產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，在提高飼養(yǎng)管理水平、加強(qiáng)生物安全管理的同時(shí)，合理使用疫苗仍然是疫病防控的關(guān)鍵。利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)一步了解病原的致病機(jī)制、開(kāi)發(fā)基因工程疫苗，加強(qiáng)水禽疫苗免疫效果監(jiān)測(cè)，對(duì)推進(jìn)我國(guó)水禽疫病防控，促進(jìn)水禽從業(yè)人員對(duì)新老水禽疫病的認(rèn)知和疫苗的合理使用十分必要。

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Promoting the Research on Prevention and Control of Waterfowl Infectious Disease in China

LIU Yuehuan

(Institute of Animal and Husbandry Medicine, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097)

2019-11-18；

2019-11-18

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016YFD0500800，2017YFD0500800）

劉月煥，Tel：010-51503475；E-mail：liuyuehuan@sina.com

10.3864/j.issn.0578-1752.2019.23.018

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