王瑛韜，郭 鑫，齊 兵

(吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 藥學部，吉林 長春130033)

目前以手術治療和各種藥物干預視神經(jīng)損傷還有一定的爭議，近年來以各種干細胞干預視神經(jīng)損傷作為一種新的方法發(fā)揮著重要的作用[1]。朱興華等[2]以BDNF和hUCBSC共同治療視神經(jīng)損缺后，檢測了動物電生理指標，檢測結(jié)果顯示，模型組的各項電生理指標顯著小于以hUCBSC、BDNF干預組(P<0.05),得出了hUCBSC有恢復大鼠視神經(jīng)電生理指標作用的結(jié)論。劉勇等[3]對視神經(jīng)損傷動物以轉(zhuǎn)染人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子綠色熒光蛋白進行干預后，觀察了轉(zhuǎn)染人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子綠色熒光蛋白在視網(wǎng)膜內(nèi)分化、存活、遷移情況。得出了轉(zhuǎn)染人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子綠色熒光蛋白具有提高視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的分化、遷移作用的結(jié)論。關于視神經(jīng)動物損傷模型以藥物干預后的蠕變特性的研究，袁毅等[4]以中成藥復明膠囊干預神經(jīng)缺損模型后，對視神經(jīng)進行應力松弛測試，得出了中成藥復明膠囊對恢復視神經(jīng)應力松弛特性發(fā)揮了重要作用的結(jié)論。以hUCBSC、BDNF干預視神經(jīng)夾持傷大鼠后視神經(jīng)蠕變性能研究報道很少。本實驗以hUCBSC、BDNF分別干預視神經(jīng)夾持傷后，對視神經(jīng)進行蠕變性能測試，以視神經(jīng)蠕變性能指標判斷以hUCBSC、BDNF干預視神經(jīng)夾持傷大鼠的效果。為視神經(jīng)損傷治療提供蠕變性能指標。

1 材料與方法

1.1 測試用動物60只SD大鼠，均為雄性，鼠齡5.5月，體重328-331 g，由長春科新動物實驗有限公司提供。

1.2 藥物腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子Brain-derived neurotrophic factor，(BDNF)，北京方程嘉鴻科技有限公司生產(chǎn)，人臍血干細胞Human Umbilical Cord Blood Stem Cells(hUCBSC)，上海欽誠生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 動物分組在60只大鼠中隨機取20只設為視神經(jīng)夾持傷模型組，隨機取20只設為BDNF干預組，隨機取20只設為以hUCBSC干預組，隨機取60只大鼠中的20只右眼組為正常對照組。

1.4 復制視神經(jīng)損傷模型按yuyingjiang[7]的方法以血管鉗夾持大鼠視神經(jīng)的方法建立損傷模型，將大鼠麻醉后切開左眼頂側(cè)眶上皮膚，露出視神經(jīng)管，切除眶切跡和眶壁后找到視神經(jīng)，以深圳市澤任科技有限公司生產(chǎn)的血管鉗持續(xù)夾持視神經(jīng)10 s。以青霉素液沖洗創(chuàng)口。模型建立成功的依據(jù)為大鼠對光反射消失。

1.5 藥物治療按yuyingjiang[7]的方法于術后10天對以hUCBSC干預組將hUCBSC1×106個注射于大鼠左眼內(nèi)、于術后10天對以BDNF干預組將BDNF50 ng注射于大鼠左眼內(nèi)。

1.6 切取各組大鼠視神經(jīng)試樣于造模30 d，將大鼠麻醉后分別切取各組大鼠損傷位置視神經(jīng)10 mm后立即進行測試。

1.7 蠕變測試方法測試裝置為MODEL55100型電子拉伸機(長春試驗機研究有限責任公司)以GX-6型工具顯微鏡(長春市光學儀器有限責任公司)測量試樣的長度為10 mm，直徑為0.784-0.831 mm。按Yang Wang等[8]的方法對試樣進行循環(huán)加載預調(diào)后進行測試。依次將試樣裝到實驗裝置上，設定測試速度為0.6Gpa/min，當對照組、hUCBSC干預組、模型組、hUCBSC干預組應變分別為3.14%、 3.06%、2.86%、2.94%時，各組試樣應力均為0.386 Mpa時應力設定為恒定，實驗時間為120 min。

1.8 統(tǒng)計學分析計量資料以mean±SD表示，以SPSS16.0 軟件包(SPSS,Chicago,IL,USA) 進行數(shù)據(jù)分析，組間數(shù)據(jù)的差異以方差分析法和Sceffe法進行比較，P<0.05 為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 各組試樣蠕變曲線各組試樣蠕變曲線見圖1。

圖1 各組試樣蠕變曲線

蠕變測試結(jié)果顯示，模型組視神經(jīng)的120 mins應變改變量小于BDNF和hUCBSC干預組，差異顯著 (P<0.05)，以BDNF干預組視神經(jīng)的120 min應變應變改變量小于以hUCBSC干預組，差異顯著 (P<0.05)。4組試樣應變與時間的函數(shù)表達關系均為指數(shù)函數(shù)。

2.2 各組試樣蠕變函數(shù)歸一化曲線各組試樣蠕變函數(shù)歸一化曲線見圖2。

結(jié)果顯示，hUCBSC干預組120 minsJ/t值大于以BDNF干預組和模型組，差異顯著 (P<0.05)，以BDNF干預組120 minJ/t值大于模型組，差異顯著，(P<0.05)。

2.3 各組試樣蠕變函數(shù)歸一化方程按馬洪順等[9]:的方法設

圖2 視神經(jīng)蠕變函數(shù)歸一化曲線

J(t)=a+be-t

(1)

令

正則方程

(2)

分別把4組試樣的蠕變數(shù)據(jù)代入(2)式，得出a、b值，將a、b值分別代入(1)式，得出應變與時間關系蠕變函數(shù)歸一化方程如下：

以hUCBSC干預組

正常組

以BDNF干預組

模型組

3 討論

蠕變測試結(jié)果顯示，模型組120 mins應變上升值小于BDNF干預組和以hUCBSC組，差異顯著 (P<0.05)，以hUCBSC干預組的120 min應變上升量小于以BDNF干預組，差異顯著 (P<0.05)。各組試樣蠕變曲線的函數(shù)表達關系均為指數(shù)函數(shù)。

眾所周知，視神經(jīng)具有生物粘彈性特性，視神經(jīng)為典型的粘彈性體，其表現(xiàn)形式之一主要是在恒應力下的應變隨時間而變化即蠕變，視神經(jīng)的的應變與時間關系蠕變性能是為了應對承擔恒荷載。王玲等[10]以血管鉗夾持動物視神經(jīng)后以BDNF、hUCBSC干預治療，在治療后30天對視神經(jīng)進行HE染色觀察發(fā)現(xiàn)模型組視神經(jīng)纖維排列不整齊、變薄、變細，纖維幾何尺寸發(fā)生了改變。以hUCBSC干預組軸突有微量核碎片、空泡細胞，有微量膠質(zhì)細胞核排列不整齊，軸突多數(shù)得到恢復。以BDNF干預治療組，膠質(zhì)細胞核較多，軸突得到一定程度的恢復。本實驗根據(jù)王玲等[10]的視神經(jīng)組織形態(tài)觀察結(jié)果分析認為，本實驗視神經(jīng)損傷后神經(jīng)纖維排列紊亂，改變了其組織形態(tài)，改變了視神經(jīng)蠕變性能，視神經(jīng)夾持傷通過以hUCBSC、BDNF干預，使視神經(jīng)蠕變特性得到了一定的恢復。本實驗結(jié)果支持王玲等[10]以BDNF、hUCBSC干預視神經(jīng)夾持傷大鼠視神經(jīng)具有一定恢復的觀點。李云琴等[1]研究發(fā)現(xiàn)hUCBSC對視神經(jīng)RGC具有的保護作用。hUCBSC具有廣泛的來源，取之方便，還有向其它組織和器官分化，移植周圍神經(jīng)等組織后排斥低的特點。神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF 對神經(jīng)活動發(fā)揮著重要作用，視神經(jīng)受到傷害后造成RGCS死亡,移植BDNF有利于受到傷害的神經(jīng)得到恢復[11]。Kaiser R等[12]研究發(fā)現(xiàn)，BDNF對神經(jīng)神經(jīng)元存活和軸突的恢復具有重要作用。本實驗以hUCBS和BDNF干預視神經(jīng)夾持傷動物后視神經(jīng)蠕變特性有一定的恢復。以hUCBSC、BDNF干預視神經(jīng)神經(jīng)夾持傷效果顯著，hUCBSC的效果更好。