于海燕 李亮 馬越 張亞楠

[摘要] 目的 本研究建立咬合創(chuàng)傷合并牙周致病菌條件下的牙周夾板復合實驗性動物模型，觀察大鼠磨牙牙周骨組織的變化規(guī)律，為（牙合）創(chuàng)傷與牙周炎的（牙合）治療提供理論依據(jù)。 方法 雄性Wistar大鼠60只，隨機分三組，單顆磨牙咬合創(chuàng)傷組（A組），牙周夾板磨牙咬合創(chuàng)傷組（B組），牙周夾板磨牙咬合創(chuàng)傷+牙周炎復合組（C組），每組各20只。（牙合）面粘接方絲建立咬合創(chuàng)傷模型，C組管飼P.g菌懸液。在建模0、14、28 d和在建模28 d時將各組刺激物去除后的14、28 d每組各隨機處死4只大鼠，取下頜骨，HE染色，光學顯微鏡下觀察組織學變化及破骨細胞總數(shù)。結(jié)果 經(jīng)重復測量方差分析，3組破骨細胞平均數(shù)值進行組間比較和不同時間效應，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;單顆磨牙咬合創(chuàng)傷組（A組）與牙周夾板磨牙組（B組）比較，牙周組織損傷程度在咬合創(chuàng)傷時間方面比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;牙周夾板磨牙組（B組）與加入P.g菌形成復合因素損傷的C組實驗模型比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結(jié)論 應用牙周夾板可減輕（牙合）創(chuàng)傷導致的牙動度增加，阻止齦袋內(nèi)的菌斑向根尖方向移行定植，減少牙槽骨的破壞。

[關(guān)鍵詞] 咬合創(chuàng)傷;牙周夾板;牙周炎;牙槽骨

[中圖分類號] R781.4? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）33-0030-03

[Abstract] Objective To establish a periodontal splint compound experimental animal model under the condition of occlusal trauma and periodontal pathogens， to observe the changes in the periodontal bone tissue of the molars in rats， and to provide a theoretical basis for the treatment of occlusal trauma and periodontitis. Methods A total of 60 male Wistar rats were randomly divided into three groups， single molar occlusal trauma（group A）， periodontal splint molar occlusal trauma group（group B）， periodontal splint molar occlusal trauma+periodontitis combined group（group C）， with 20 cases in each group. The occlusal surface was bonded with square wire to establish the occlusal trauma model. Group C was gavaged with P.g bacteria suspension. Four rats in each group were randomly killed at modeling 0， 14， 28 days and 14 and 28 days after the stimulation was removed. The stimuli were removed at 28 days after modeling. The mandibles were removed for HE staining. The histological changes and the total number of osteoclasts were observed under an optical microscope. Results After repeated measures analysis of variance， the average values of osteoclasts in the three groups were compared between the groups at different times， and the difference was statistically significant（P<0.01）. There was a significant difference in the degree of periodontal tissue damage in the time of occlusal trauma between the single molar occlusion group（group A） and the periodontal splint group（group B）（P<0.01）. There was no significant difference between periodontal splint molar group（group B） and （group C） with P.g bacteria added to form compound factor damage（P>0.05）. Conclusion The periodontal splint can reduce the increase in dental mobility caused by occlusal trauma， prevent the colonization of plaque in the gingival pocket towards the root tip， and reduce the damage of alveolar bone.

[Key words] Traumatic occlusion; Periodontal splint; Periodontitis; Alveolar bone

咬合創(chuàng)傷是牙周炎的常見合并癥，隨著牙周組織的持續(xù)破壞，牙齒開始出現(xiàn)松動、移位，變化的咬合狀況進一步加重了牙周組織的破壞[1]。牙周炎是由牙菌斑中微生物引起的慢性感染性疾病，它受全身防御機制的調(diào)控和各種全身及局部因素的影響，其中過大的咬合力、異常的側(cè)向力、早接觸、牙齒排列異常等咬合問題均會加重牙周組織的破壞[2-4]。目前，（牙合）治療的方式主要包括選磨法、牙周夾板、正畸治療等。牙周夾板是將松動的患牙與健康穩(wěn)固的鄰牙連接，形成一個咀嚼群體從而分散牙合力，減輕患牙的負擔，為牙周組織的修復和行使正常的功能創(chuàng)造條件[5-6]，但牙周夾板對牙周微環(huán)境的影響并不清晰。本研究建立咬合創(chuàng)傷合并牙周致病菌條件下的牙周夾板復合實驗性動物模型，觀察大鼠磨牙牙周骨組織的變化，為（牙合）創(chuàng)傷與牙周炎的（牙合）治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF級雄性Wistar大鼠（遼寧長生生物技術(shù)有限公司）;牙齦卟啉單胞（Porphyromonas gingivalis，P.g）ATCC 33277、血瓊脂培養(yǎng)基與牛-腦心浸液培養(yǎng)基（黑龍江省醫(yī)院微生物實驗室）;甲硝唑片（山東華魯制藥有限公司）;熒光正置顯微鏡（Leica，德國）。全自動微生物分析儀與全自動麥氏比濁儀（BD，美國）。

1.2 培養(yǎng)菌種

P.g菌接種在血瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，放于恒溫箱培養(yǎng)1周，全自動微生物分析儀進行鑒定。將菌落在牛-腦心浸液培養(yǎng)基中增菌，麥氏比濁儀將濃度調(diào)節(jié)約1.0×109 CFU/mL，備用大鼠口內(nèi)。

1.3 隨機分組與模型建立

雄性Wistar大鼠60只（體重280～310 g），隨機分三組，單顆磨牙咬合創(chuàng)傷組（A組），牙周夾板磨牙咬合創(chuàng)傷組（B組），牙周夾板磨牙咬合創(chuàng)傷+牙周炎復合組（C組），每組各20只。所有大鼠常規(guī)飼養(yǎng)7 d，給予甲硝唑溶液抑制口內(nèi)菌，飲用3 d。實驗大鼠分籠飼養(yǎng)3 d，水合氯醛（3 mL/kg）腹腔麻醉，A組在左下第一磨牙（牙合）面粘接方絲1～2 mm;B、C組左下三顆磨牙（牙合）面粘接方絲5～6 mm，（牙合）面均抬高0.6～0.8 mm，建立左下頜磨牙創(chuàng)傷模型。在C組左下三顆磨牙頸部結(jié)扎絲，同時管飼組內(nèi)每只鼠1.5 mL培養(yǎng)48 h的P.g菌懸液，隔天補充一次，共3次，建立牙周炎及夾板施加創(chuàng)傷復合性模型。B、C組建模28 d時去除刺激物，在左下三顆磨牙頰側(cè)（牙合）1/2處，粘接纖維夾板將下頜磨牙連成一整體。

1.4 標本采集與組織切片

選取0、14、28 d和在建模28 d時將各組刺激物去除后的14、28 d這5個時間點，每組大鼠各隨機處死4只，取下頜骨，甲醛固定，甲酸脫鈣，脫水，包埋及近遠中切片厚約1.5 μm，HE染色，光鏡下視野（200×倍數(shù)）計數(shù)破骨細胞總數(shù)作為主要觀察指標，三次所得結(jié)果求平均值。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SAS9.1統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。對各分組破骨細胞平均數(shù)值用均數(shù)±標準差（x±s）表示，進行不同時間與不同組間重復測量方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異有高度統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組臨床觀察

A、B組大鼠在整個實驗期口腔牙周組織無異常變化。C組14 d結(jié)扎處牙齦紅腫，探診出血，可探及淺牙周袋;28 d探診后出血量大，探及深牙周袋，C組整組磨牙頰舌側(cè)松動度均超出1 mm;去除結(jié)扎刺激物后14、28 d探診出血減輕，牙齒松動幅度小于1 mm。

2.2 三組顯微鏡下觀察

14 d時觀察牙周完整性發(fā)現(xiàn)A、B組牙周纖維部分斷裂，C組牙周完整性被破壞;A、B組牙槽嵴與牙槽骨骨皮質(zhì)不連續(xù)，牙槽骨破骨細胞明顯增多;A組均重于B組。C組結(jié)合上皮明顯根向遷移，牙槽嵴頂消失由纖維代替，牙槽骨骨皮質(zhì)不連續(xù)且破骨細胞增多;28 d時A組部分牙槽嵴由纖維替代，破骨細胞減少，B組增多，兩組骨吸收陷窩明顯;C組炎細胞范圍擴大，破骨細胞增多，去除刺激后14 d和28 d時，A、B組仍存在較多的破骨細胞，牙周組織內(nèi)見新骨增生和大量的成纖維細胞，整個過程中結(jié)合上皮未向根方遷移。C組牙周組織炎癥明顯減輕，仍存較多的破骨細胞，去除刺激后28 d見成骨細胞與成纖維細胞增多。

2.3 三組各個時間點破骨細胞計數(shù)比較

光鏡下破骨細胞數(shù)結(jié)果比較，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)時間效應和分組效應差異均有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）;單顆磨牙咬合創(chuàng)傷組（A組）與牙周夾板磨牙組（B組）比較，牙周組織損傷程度在咬合創(chuàng)傷時間方面比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;牙周夾板磨牙組（B組）與加入P.g菌形成復合因素損傷的C組實驗模型比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

咬合創(chuàng)傷和牙周致病菌均是牙周組織損傷和破壞的誘因，兩種危險因素疊加在一起引起的病理損害與損傷修復機制更為復雜[7]。動物研究和臨床研究帶來的不同研究結(jié)果使臨床醫(yī)生對于牙周病合并咬合創(chuàng)傷患者的治療變得復雜而又矛盾。咬合創(chuàng)傷引起嚴重的炎癥，進而誘導骨吸收[8]的觀點越發(fā)受到關(guān)注。但也有一些調(diào)查[9]指出，外傷性（牙合）與牙周炎相關(guān)并需要實施牙周咬合調(diào)整治療的證據(jù)并不很充分。目前，牙周夾板是控制臨床牙松動常用且有效的方法，松動牙固定是通過固定夾板將松動牙連接固定在相鄰的相對穩(wěn)定的牙上，以形成一個新的咀嚼單位，當牙齒受到不同方向的咬合力時不會再像單一牙齒受到咬合創(chuàng)傷那樣，每個牙齒各自受力而發(fā)生傾斜移位，而是由多個牙根的牙周膜纖維共同負擔[10-11]。本研究綜合國內(nèi)外研究[12-14]建立咬合創(chuàng)傷模型，粘接牙周夾板（USA，美國）將下頜磨牙連成一個整體[15]建立牙周夾板模型，實驗結(jié)果表明，本方法可建立穩(wěn)定、可靠的大鼠復合實驗模型。本研究結(jié)果顯示，單純咬合創(chuàng)傷因素的A組和B組，在實驗期牙齦組織外觀正常，而加入牙周致病菌的C組，14 d均出現(xiàn)典型牙周炎癥狀，28 d牙齒明顯松動。單顆磨牙咬合創(chuàng)傷組（A組）與牙周夾板磨牙組（B組）比較，牙周組織損傷嚴重，這一結(jié)果證明牙周夾板避免了單顆牙牙周組織的應力集中，起到分散（牙合）力的作用。利用夾板的穩(wěn)定性， 御近遠中向的傾斜外力，牙松動被控制在生理范圍之內(nèi)。A、B兩組觀察整個過程中結(jié)合上皮未向根方遷移，提示牙周夾板的應用可以減輕牙周組織的損傷。而有P.g菌因素的C組結(jié)合上皮明顯根向遷移，研究證明，咬合創(chuàng)傷和致病菌具有不同的牙周損傷和修復機制。