楊 宇，陳永坤，孔春艷，龔 明

(云南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院/生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程研究中心/云南省生物質(zhì)能與環(huán)境生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500)

【研究意義】小桐子(Jatrophacurcas)又名膏桐、麻瘋樹、假花生、臭油桐等，廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，為大戟科(Euphorbiaceae)麻風(fēng)樹屬植物，其種仁含油量高達(dá)40 %～60 %，桐油流動(dòng)性較好，是一種極具開發(fā)價(jià)值的能源植物[1]。但由于小桐子起源于熱帶，屬于冷敏(chilling-sensitive)植物，低溫嚴(yán)重影響著小桐子植株的生長(zhǎng)發(fā)育、種子形成及桐油產(chǎn)量，限制著小桐子產(chǎn)業(yè)發(fā)展和地域分布[2]。因此，對(duì)小桐子抗冷性的分子機(jī)理研究和遺傳育種就顯得迫切和重要?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】促分裂原激活蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)級(jí)聯(lián)途徑由促分裂原激活蛋白激酶的激酶之激酶(MAPK kinase kinase，MAP3K或MAPKKK、MEKK)、促分裂原激活蛋白激酶的激酶(MAPK kinase, MAPKK或MAP2Ks、MKKs、MEKs)、促分裂原激活蛋白激酶(MAPK或MPK、MMK)3個(gè)組分組成，通過(guò)MAPKKK-MAPKK-MAPK依次磷酸化[3]。MAPK被磷酸化后繼續(xù)激活信號(hào)通路中下游特定的轉(zhuǎn)錄因子或蛋白激酶，引發(fā)相應(yīng)的生理生化反應(yīng)，對(duì)各類刺激做出應(yīng)答[4]。研究發(fā)現(xiàn)，MAPK含有11個(gè)保守的蛋白激酶域，在激酶域VII和VIII之間具有TEY(絲氨酸-谷氨酸-酪氨酸；Thr-Glu-Tyr)或TDY(絲氨酸-天冬氨酸-酪氨酸；Thr-Asp-Tyr)磷酸化的基序，提供激活MAPK的蛋白質(zhì)結(jié)合域。研究者們基于-TxY-結(jié)構(gòu)域(Thr-x-Tyr)，并根據(jù)保守區(qū)域的特點(diǎn)將MAPK(MPK/MMK)家族進(jìn)行分類，含TEY結(jié)構(gòu)域的亞家族可以分為A、B、C三類，含TDY結(jié)構(gòu)域的則歸為D類[5]。研究發(fā)現(xiàn)，MAPK基因在響應(yīng)與適應(yīng)各種生物和非生物脅迫中起著重要作用[6]。在含TEY結(jié)構(gòu)的亞家族中，A類亞家族中MPK3/MPK6廣泛參與各種逆境(極端溫度、鹽、重金屬、氧化脅迫、紫外、蟲害等)響應(yīng)[7-8]；B類成員參與調(diào)控非生物脅迫、激素信號(hào)途徑、細(xì)胞分裂等，如AtMPK4在水楊酸信號(hào)途徑中起負(fù)調(diào)控作用[9-10]；C類亞家族中AtMAP3K17/18-AtMKK3-AtMPK1/2/7/14途徑參與對(duì)ABA的響應(yīng)[11]，PsMPK7參與抗氧化和抵御病原菌侵染[12]。目前，已在多種植物中鑒定到多個(gè)MAPK基因，煙草(Nicotianatabacum)中發(fā)現(xiàn)17個(gè)MAPK成員[13]，木薯(ManihotesculentaCrantz)中鑒定到21個(gè)[14]，鷹嘴豆(Cicerarietinum)中有19個(gè)[15]；通過(guò)前期研究發(fā)現(xiàn)，小桐子(Jatrophacurcas)有12個(gè)MAPK基因[16]。此外，在玉米[17]、葡萄[18]等植物中也鑒定到許多MAPK基因?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】前期研究發(fā)現(xiàn)，小桐子幼苗經(jīng)過(guò)12 ℃低溫鍛煉后，其在1 ℃低溫脅迫下的抗冷性顯著提高[19-20]；基于高通量測(cè)序，得到了小桐子低溫鍛煉條件下的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)MAPK3為差異表達(dá)基因[21]。研究克隆了小桐子MAPK3基因，進(jìn)行該基因的生物信息學(xué)分析，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)研究JcMAPK3在小桐子不同器官中，以及在12 ℃低溫鍛煉和1 ℃低溫脅迫下的表達(dá)變化模式?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】探究JcMAPK3基因在12 ℃低溫鍛煉和1 ℃低溫脅迫過(guò)程中的表達(dá)模式，為小桐子低溫關(guān)鍵基因挖掘和功能研究打下基礎(chǔ)，為小桐子提高抗冷性的分子育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

研究中使用的小桐子種子來(lái)源于云南省楚雄州元謀縣，采用前期的方法進(jìn)行種子消毒和萌發(fā)[22]，挑選萌發(fā)狀態(tài)一致的小桐子種子種于花盆中，放置在人工氣候箱中[設(shè)置相對(duì)濕度(RH)75 %、光周期為(光照/黑暗)16/ 8 h、晝/夜溫度為26/20 ℃]，當(dāng)小桐子幼苗培養(yǎng)28 d后，將長(zhǎng)至第3片真葉的小桐子幼苗進(jìn)行低溫處理和取樣。首先，分別取正常生長(zhǎng)的小桐子幼苗的根莖葉樣品；其次，進(jìn)行材料低溫處理，將長(zhǎng)勢(shì)一致的小桐子幼苗在12和1 ℃培養(yǎng)箱中(RH和光周期條件同上)低溫處理3 d，分別取低溫處理6、12、24、48、72 h的樣品，液氮速凍后凍存于-80 ℃冰箱，未處理的小桐子幼苗作為對(duì)照，每個(gè)處理進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)。

1.2 小桐子RNA提取和反轉(zhuǎn)錄

小桐子幼苗根莖葉和不同低溫處理樣品的RNA提取使用Omega生物公司的OMEGA HP plant RNA Kit試劑盒，并對(duì)提取的RNA進(jìn)行濃度測(cè)定和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄使用寶日醫(yī)生物的反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa PrimeScriptTMⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit)，得到的小桐子cDNA置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 JcMAPK3全長(zhǎng)cDNA的克隆

根據(jù)JcMAPK3基因mRNA序列(GenBank登錄號(hào)：XM 012209518.2)，利用DNAMAN8軟件設(shè)計(jì)MAPK3基因擴(kuò)增引物JcMAPK3-F/R(表1)。PCR擴(kuò)增以小桐子cDNA為模板，按照高保真酶(TaKaRa PrimeSTAR?GXL DNA Polymerase)說(shuō)明書進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離后，進(jìn)行目的DNA片段的回收和純化，再連接pGEM-T Easy載體、轉(zhuǎn)化，放置在37 ℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)，挑取白色單菌落進(jìn)行PCR驗(yàn)證，送至擎科生物技術(shù)公司進(jìn)行測(cè)序。

表1 JcMAPK3基因克隆及qRT-PCR引物

1.4 生物信息學(xué)分析

通過(guò)NCBI中的ORF finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)找出JcMAPK3的開放閱讀框，利用ProtParam(https://web.expasy.org/protparam/)分析JcMAPK3蛋白的基本性質(zhì)等參數(shù)，小桐子JcMAPK3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)使用SOPMA軟件預(yù)測(cè)，JcMAPK3的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)則通過(guò)Phyre2軟件進(jìn)行。JcMAPK3跨膜結(jié)構(gòu)分析通過(guò)在線軟件TMHMM2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)進(jìn)行；JcMAPK3亞細(xì)胞定位使用ProtComp在線軟件(http://linux1.softberry.com/)；JcMAPK3蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析使用NCBI中的CDD數(shù)據(jù)庫(kù)；JcMAPK3序列磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)利用NetPhos3.1進(jìn)行。在DNAMAN8軟件中將小桐子JcMAPK3序列與多種植物的MAPK3序列進(jìn)行比對(duì)，利用MEGA X[23]進(jìn)行MAPK3蛋白的親緣關(guān)系分析，構(gòu)建JcMAPK3蛋白進(jìn)化樹。

1.5 基因的表達(dá)分析

使用1.3測(cè)序正確后獲得的小桐子JcMAPK3序列，在IDT DNA在線網(wǎng)站(www.idtdna.com/)中設(shè)計(jì)JcMAPK3基因的qPCR引物JcMAPK3-RT-F和JcMAPK3-RT-R(表1)，以JcGAPDH為內(nèi)參。使用Roche Lightcycler 96(Roche Diagnostics Ltd.)儀器進(jìn)行小桐子JcMAPK3基因的qRT-PCR，配置qPCR反應(yīng)體系20 μl，分別加入12 μl TB Green Premix Ex Taq II、上下游引物(JcMAPK3-RT-F/R)各0.9 μl，以及1.2 μl的小桐子cDNA模板，加ddH2O 5μl。qRT-PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，進(jìn)行45個(gè)循環(huán)，3次生物學(xué)重復(fù)。使用2-ΔΔCT法[24]計(jì)算JcMAPK3基因的相對(duì)表達(dá)量，顯著性分析(P<0.05)使用SPSS軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 克隆得到小桐子JcMAPK3基因

以小桐子cDNA為模板，進(jìn)行JcMAPK3基因編碼序列(Coding sequence, CDS)的PCR擴(kuò)增，電泳檢測(cè)后得到一條為1500 bp左右的清晰條帶(圖1)，長(zhǎng)度與預(yù)期大小相符。對(duì)該目的條帶進(jìn)行切膠回收、載體連接、轉(zhuǎn)化和測(cè)序后，結(jié)果表明其包含一個(gè)1119 bp的完整開放閱讀框(Open Reading Frame, ORF)，編碼372個(gè)氨基酸(圖2)。

1: DNA Marker DL5000；2: JcMAPK3基因1: DNA Marker DL5000; 2: JcMAPK3 gene

圖2 小桐子JcMAPK3基因CDS序列及編碼氨基酸序列Fig.2 CDS sequence and amino acid sequence of JcMAPK3 gene in J. curcas

2.2 JcMAPK3蛋白理化性質(zhì)和疏水性分析

通過(guò)理化性質(zhì)分析發(fā)現(xiàn)，JcMAPK3蛋白分子式為C1920H2985N521O551S20，總原子數(shù)為5997個(gè)，其相對(duì)分子量為42.82 kD，理論等電點(diǎn)pI為5.6；JcMAPK3蛋白編碼372個(gè)氨基酸，其中亮氨酸(Leu)含量最高，為10.8 %，谷氨酸(Glu)為7.3 %、異亮氨酸(Ile)為7.3 %、脯氨酸(Pro)為7.0 %、丙氨酸(Ala)為6.7 %、精氨酸(Arg)為6.5 %、天冬氨酸(Asp)為6.2 %，負(fù)電荷氨基酸殘基數(shù)為50個(gè)，正電荷氨基酸殘基數(shù)為37個(gè)；其脂肪系數(shù)為91.77；不穩(wěn)定指數(shù)Ⅱ?yàn)?9.25(<40)，被認(rèn)定為穩(wěn)定性蛋白。該蛋白的總平均疏水指數(shù)為-0.264，預(yù)測(cè)JcMAPK3為親水蛋白。

2.3 JcMAPK3蛋白二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析

通過(guò)SOPMA預(yù)測(cè)JcMAPK3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)(圖3)，結(jié)果表明JcMAPK3具有大量的α-螺旋(Alpha helix)，占氨基酸殘基總數(shù)的44.35 %(含有氨基酸165個(gè))；其次，無(wú)規(guī)則卷曲(Random coil)占氨基酸殘基總數(shù)的36.29 %(135個(gè))；延伸鏈(Extended strand)占氨基酸殘基總數(shù)的13.44 %(50個(gè))；β-折疊(Beta turn)占氨基酸殘基總數(shù)的5.91 %(22個(gè))。三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)也表明小桐子JcMAPK3蛋白包含大量α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲(圖4)。

豎線由長(zhǎng)及短分別為α-螺旋、延伸鏈、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲Vertical lines from long to short are Alpha helix, Extended chain, Beta turn and Random coil, respectively

圖4 小桐子JcMAPK3蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)Fig.4 Tertiary structure of JcMAPK3 protein in J. curcas

2.4 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位、保守結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析

亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示小桐子JcMAPK3蛋

白定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。其保守結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明(圖5)，JcMAPK3含有高度保守的STKc_TEY_MAPK結(jié)構(gòu)域(含TEY基序的促分裂活化蛋白激酶_絲氨酸/蘇氨酸激酶催化結(jié)構(gòu)域)。磷酸化位點(diǎn)分析表明JcMAPK3含有8個(gè)Ser位點(diǎn)，9個(gè)Thr位點(diǎn)，7個(gè)Tyr位點(diǎn)。小桐子JcMAPK3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明該蛋白不具有跨膜結(jié)構(gòu)域，也不包含跨膜螺旋。

圖5 JcMAPK3蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析Fig.5 Protein conserved domain analysis of JcMAPK3

2.5 JcMAPK3基因同源性及進(jìn)化樹分析

通過(guò)NCBI Blast后發(fā)現(xiàn)MAPK3基因在多個(gè)物種中存在，利用DNAMAN8軟件序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)(圖6)，小桐子MAPK3氨基酸序列與大戟科橡膠樹(Heveabrasiliensis)XP_021655692.1、木薯(ManihotesculentaCrantz)XP_021610630.1序列一致性分別為94.20 %、92.47 %；與錦葵科陸地棉(Gossypiumhirsutum)NP_001314498.1序列一致性為92.47 %，與薔薇科桃(Prunuspersica)XP_007205387、甜櫻桃(Prunusavium)XP_021809182.1、月季(Rosachinensis)XP_024157102.1序列一致性分別為91.71 %、90.32 %、88.44 %，與木棉科榴蓮(Duriozibethinus)XP_022729325.1序列一致性為91.42 %，與梧桐科可可(Theobromacacao)EOY34273.1序列一致性為91.58 %，與番木瓜科番木瓜(Caricapapaya)XP_021889758.1序列一致性為89.78 %，與樺木科白樺(Betulaplatyphylla)AHY02158.1序列一致性為88.83 %，與葡萄科葡萄(Vitisvinifera)RVW56822.1序列一致性為88.62 %，與葫蘆科南瓜(Cucurbitamoschata)XP_022948699.1、黃瓜(Cucumissativus)NP_001267653.1序列一致性分別為87.63 %、90.33 %、與十字花科甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus)NP_001303218.1、高山離子芥(Chorisporabungeana)AAV68711.1、擬南芥(Arabidopsisthaliana)XP_002875737.1序列一致性分別為87.53 %、86.14 %、85.09 %，與楊柳科毛果楊(Populustrichocarpa)XP_002298450.1序列一致性為88.95 %，與豆科蔓花生(Arachisduranensis)XP_015952347.1序列一致性為87.37 %、與茄科煙草(Nicotianaattenuata)XP_019226861.1序列一致性為84.80 %。由此可見(jiàn)，JcMAPK3氨基酸序列與其他物種的同源性較高，且均含有TEY結(jié)構(gòu)域，這表明該基因在進(jìn)化過(guò)程中高度保守(圖6)。

紅色框表示JcMAPK3含有的TEY結(jié)構(gòu)域The red box indicates the TEY domain contained in JcMAPK3

利用MEGA X軟件構(gòu)建進(jìn)化樹，將小桐子MAPK3氨基酸序列和其它20種植物MAPK3序列進(jìn)行親緣關(guān)系分析，結(jié)果(圖7)顯示，小桐子的MAPK3與大戟科的橡膠樹和木薯聚在同一分支上，親緣關(guān)系較近；與擬南芥、高山離子芥、歐洲油菜、煙草、大豆距離較遠(yuǎn)，其親緣關(guān)系也較遠(yuǎn)。

標(biāo)尺表示遺傳距離；數(shù)值表示從1000次重復(fù)計(jì)算得到的Bootstrap百分比值The scale bar represents genetic distance；Numbers represent the bootstrap percentage values calculated from 1000 replicates

2.6 小桐子不同器官中JcMAPK3基因的表達(dá)模式

JcMAPK3基因在小桐子中不同器官表達(dá)分析結(jié)果(圖8)顯示，JcMAPK3基因在根、莖和葉中均有表達(dá)，但JcMAPK3基因在根中表達(dá)量最高，莖中次之，葉中表達(dá)量最低，根中的表達(dá)量為葉片中的17.03倍，是莖中的3.39倍，這表明JcMAPK3基因在小桐子中的表達(dá)存在顯著的器官特異性(P<0.05)。

不同英文小寫字母表示處理間水平存在差異顯著性(P<0.05)There are significant differences level between different lower-case letters (P<0.05)

2.7 低溫處理下JcMAPK3基因的表達(dá)模式

前期的研究發(fā)現(xiàn)，小桐子幼苗經(jīng)過(guò)12 ℃低溫鍛煉后，其在1 ℃低溫脅迫下的抗冷性大幅提高[19-20]。在1 ℃低溫脅迫和12 ℃低溫鍛煉處理0、6、12、24、48、72 h后，對(duì)小桐子幼苗葉片中JcMAPK3表達(dá)量進(jìn)行qRT-PCR分析，結(jié)果(圖9)顯示，在1 ℃低溫脅迫后，JcMAPK3基因出現(xiàn)明顯的上調(diào)表達(dá)，在72 h表達(dá)量最高，為對(duì)照(0 h)的13.5倍；在12 ℃低溫鍛煉期間，JcMAPK3基因表達(dá)量以48 h最高，為對(duì)照(0 h)的5.58倍。這些結(jié)果表明JcMAPK3可以顯著響應(yīng)1 ℃低溫脅迫和12 ℃低溫鍛煉，JcMAPK3明顯受到低溫誘導(dǎo)表達(dá)。

同一溫度下不同英文小寫字母表示處理間水平存在差異顯著性(P<0.05)There are significant differences level between different lower-case letters at the same temperature (P<0.05)

3 討 論

MAPK級(jí)聯(lián)途徑在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中高度保守，MAPK連接著上游級(jí)聯(lián)反應(yīng)與下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白激酶。通過(guò)從小桐子中克隆到JcMAPK3基因，生物信息學(xué)分析顯示JcMAPK3基因編碼372個(gè)氨基酸，相對(duì)分子量為42.82 kD，JcMAPK3蛋白在激活環(huán)上含有保守的TEY結(jié)構(gòu)域，與MAPK家族的典型特征一致，說(shuō)明克隆到的JcMAPK3基因?qū)儆贛APK家族。小桐子JcMAPK3蛋白的序列與其它植物的同源性較高，進(jìn)化樹分析表明小桐子JcMAPK3蛋白與橡膠樹和木薯聚在同一分支上，親緣關(guān)系較近。

低溫影響植物的生理生化代謝和生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，是限制植物生長(zhǎng)的環(huán)境因子之一[25-26]。已有許多研究證實(shí)MAPK基因的表達(dá)受環(huán)境誘導(dǎo)，甘薯[Ipomoeabatatas(L.) Lam]IbMPK3和IbMPK6的激酶活性被NaCl、SA、H2O2和ABA誘導(dǎo)，IbMPK3/6在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)增強(qiáng)了病原體的耐受性[27]。在干旱脅迫下甲基環(huán)丙烯處理后，甘蔗(SaccharumofficinarumL.)通過(guò)調(diào)控SoMAPK4的表達(dá)來(lái)維持細(xì)胞內(nèi)生理生化平衡，最終抵御干旱脅迫[28]。水稻(OryzasativaL.)中OsMPK3和OsMPK6在12 ℃低溫下被激活，在轉(zhuǎn)基因植株中過(guò)表達(dá)后抗冷性增強(qiáng)，表明OsMPK3和OsMPK6參與調(diào)控水稻的抗寒性[29]。吳紹華等在橡膠樹中發(fā)現(xiàn)HbMAPK1受低溫誘導(dǎo)表達(dá)，與橡膠樹抵御低溫逆境有關(guān)[30]。有研究顯示，CsMAPK3參與茶樹(Camelliasinensis)的抗寒、耐鹽響應(yīng)，茶樹在ABA處理、寒冷和鹽脅迫下，CsMAPK3的表達(dá)均顯著上調(diào)[31]。在前期對(duì)小桐子低溫響應(yīng)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果的基礎(chǔ)上[21]，研究發(fā)現(xiàn)JcMAPK3的表達(dá)在小桐子中存在器官特異性，且JcMAPK3基因可以顯著響應(yīng)12 ℃低溫鍛煉和1 ℃低溫脅迫。在1 ℃低溫脅迫72 h，小桐子JcMAPK3基因表達(dá)量最高，為對(duì)照(0 h)的13.5倍；在12 ℃處理48 h時(shí)JcMAPK3表達(dá)量最高，為對(duì)照(0 h)的5.58倍，表明JcMAPK3表達(dá)顯著，受到低溫誘導(dǎo)表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，12 ℃處理下72 h時(shí)表達(dá)量下調(diào)，而1 ℃處理下48、72 h時(shí)MAPK3表達(dá)量仍然上調(diào)，1 ℃低溫脅迫72 h的JcMAPK3基因表達(dá)量是12 ℃低溫鍛煉下的3.28倍，12 ℃屬于臨界生長(zhǎng)溫度，1 ℃對(duì)小桐子有致命的傷害，JcMAPK3對(duì)1 ℃脅迫響應(yīng)更強(qiáng)烈，在短期內(nèi)快速引發(fā)一系列的信號(hào)系統(tǒng)來(lái)響應(yīng)和抵御低溫。

4 結(jié) 論

通過(guò)研究克隆到小桐子的MAPK家族基因，命名為JcMAPK3，其開放閱讀框?yàn)?119 bp，小桐子JcMAPK3基因在12 ℃低溫鍛煉和1 ℃低溫脅迫下受到低溫誘導(dǎo)表達(dá)顯著，推測(cè)JcMAPK3基因參與小桐子對(duì)低溫的響應(yīng)與適應(yīng)過(guò)程，在小桐子低溫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及耐冷性提高中起重要作用，這為后續(xù)的小桐子抗冷性的分子育種提供了一個(gè)重要的基因資源和理論依據(jù)。