辛躍珍

（黑龍江完達(dá)山哈爾濱乳品有限公司，哈爾濱 150078）

固相萃?。⊿PE）技術(shù)是利用分析物在不同介質(zhì)中被吸附的能力不同將標(biāo)的物提純的技術(shù)，可有效地將標(biāo)的物與干擾組分分離，大大增強(qiáng)對(duì)分析物特別是痕量分析物的檢出能力，提高被測(cè)樣品的回收率。SPE技術(shù)自上世紀(jì)70年代后期問(wèn)世以來(lái)發(fā)展迅速，廣泛應(yīng)用于環(huán)境、制藥、臨床醫(yī)學(xué)、食品等領(lǐng)域[1]。該固相萃取小柱使用前要用水溶性溶劑如甲醇來(lái)浸潤(rùn)填料然后再用水或樣品溶劑來(lái)平衡，不同的柱子處理方法不同，處理完的柱子一定要經(jīng)過(guò)評(píng)估，一是要測(cè)定空白本底，二是要測(cè)定回收率，回收率合格方可使用。

在乳及乳制品違禁添加物三聚氰胺的檢測(cè)[2]過(guò)程中，從原料奶的每個(gè)奶罐的檢測(cè)，到成品的每罐及每批次檢測(cè)，乳制品企業(yè)每天要檢測(cè)幾十批次的樣品。如果固相萃取柱可以回收再利用，則可以大大節(jié)約檢測(cè)成本。為此，本研究根據(jù)固相萃取柱的性能，就其是否可以重復(fù)再利用及利用次數(shù)進(jìn)行了可行性研究。

表1 純奶類各次固相萃取后檢測(cè)的回收率情況

1 實(shí)驗(yàn)與數(shù)據(jù)

筆者所在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用SPE檢測(cè)乳品三聚氰胺時(shí)，樣品處理的提取過(guò)程與國(guó)標(biāo)方法略有差異，方法為：稱取12～16g液態(tài)奶樣品于50mL容量瓶中，振蕩1min，加入10mL乙腈，超聲提取20～30min，加入2mL2%乙酸鋅溶液，振蕩混勻，用1%三氯乙酸定容。凈化過(guò)程同GB/T22388-2008方法。此方法適用于批量樣品處理，具有簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確率高等特點(diǎn)。為了研究固相萃取柱是否可重復(fù)利用及利用次數(shù)問(wèn)題，本試驗(yàn)分別對(duì)純奶類、花色奶類、飲料類各做了4×6次實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)如表1～3所示。

表2 花色奶類各次固相萃取后檢測(cè)的回收率情況

表3 乳飲料類各次固相萃取后檢測(cè)的回收率情況

2 結(jié)果與討論

由表1～3得出表4中三類產(chǎn)品固相萃取小柱各次的平均回收率。由表4可知，純奶類新固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為98.97%[3]；使用一次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為93.52%；使用兩次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為87.30%?；ㄉ填愋鹿滔噍腿≈鳚舛燃訕?biāo)總平均回收率為97.12%；使用一次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為92.93%；使用兩次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為85.47%。乳飲料類新固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為97.52%；使用一次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為92.15%；使用兩次后固相萃取柱各濃度加標(biāo)總平均回收率為85.59%。

表4 三類產(chǎn)品固相萃取小柱各次的回收率

表4的結(jié)果顯示，對(duì)于不同種類的產(chǎn)品，使用第3次的固相萃取柱檢測(cè)樣品后的平均回收率都大于85%，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22388-2008中規(guī)定回收率在80%～110%之間[4]，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。所以，固相萃取小柱可以通過(guò)合理再生技術(shù)，至少使用3次。一般固相萃取柱只要是樣品組成成分不復(fù)雜，就可以重復(fù)使用。用乙酸乙酯和丙酮清洗后，可重復(fù)使用四、五次之多。如果是組分復(fù)雜而又有顏色的產(chǎn)品，如可可奶、高密度原料等[5]，實(shí)驗(yàn)后，按照清洗固相萃取柱的順序清洗兩次，固相萃取柱也可以使用兩次。

如果固相萃取小柱使用過(guò)程中回收率低，可能原因?yàn)椋孩僦罨瘲l件不恰當(dāng)。解決方法：根據(jù)固定相的不同，正確活化SPE小柱，反相填料，正相填料，離子交換填料。②樣品溶劑對(duì)目標(biāo)成分的作用力比固定相強(qiáng)。解決方法：選擇對(duì)目標(biāo)成分具有更強(qiáng)選擇性的SPE小柱；調(diào)整樣品溶劑的pH值，增加目標(biāo)成分在固定相上的作用力[6]；改變樣品溶劑的極性，降低目標(biāo)成分在溶劑中的作用力。③清洗溶劑選擇不當(dāng)，洗脫能力太強(qiáng)。解決方法：使用正確的清洗溶劑，選擇洗脫能力更弱的溶劑。④載樣時(shí)流速過(guò)快。解決方法：重力自然載樣或控制載樣流速≤1mL/min。⑤SPE小柱太小。解決方法：用更大規(guī)格、選擇性更強(qiáng)、載樣量更大的SPE小柱[7]。⑥洗脫前SPE小柱清洗溶劑抽干不充分。解決方法：充分抽干沖洗溶劑。⑦洗脫不充分。解決方法：增加洗脫劑的體積，增加洗脫劑的強(qiáng)度；用更小規(guī)格的SPE小柱。⑧洗脫時(shí)流速過(guò)快或過(guò)慢。解決方法：控制流速為1～2mL/min[8]。

3 效益及展望

筆者所在實(shí)驗(yàn)室使用的陽(yáng)離子交換固相萃取柱，使用前以3mL甲醇活化，抽至盡干后以3mL水沖洗，之后再加凈化液，最后用3mL水和3mL甲醇洗滌后，再用6mL 95%氨化甲醇洗脫。整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)1mL/min。該實(shí)驗(yàn)室使用的陽(yáng)離子交換固相萃取柱，基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，填料質(zhì)量為60mg，體積為3mL[9]。該固相萃?。⊿PE）技術(shù)是日常分析和研究應(yīng)用中廣為使用的一種從各種基質(zhì)中凈化和濃縮分析物的技術(shù)[10]。固相萃取小柱產(chǎn)品是在嚴(yán)格控制的條件下生產(chǎn)和檢測(cè)的，并在標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行了出廠前的嚴(yán)格校驗(yàn)。可以改進(jìn)并簡(jiǎn)化分離，延長(zhǎng)色譜柱壽命以及提高檢測(cè)限, 萃取過(guò)程簡(jiǎn)單快速、溶劑消耗降低、容易實(shí)現(xiàn)操作自動(dòng)化，有良好的回收率和重現(xiàn)性。

其性能與優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)在：①美觀輕便，操作簡(jiǎn)便。②回收率和重現(xiàn)性好。③出色的經(jīng)濟(jì)性，可以最低成本實(shí)現(xiàn)最大使用效果，更適合大批次樣品的集中處理。在提高檢測(cè)效率的同時(shí)，可大大節(jié)省檢驗(yàn)費(fèi)用。

完固相萃取柱重復(fù)再利用，可以大大節(jié)約檢測(cè)成本，為乳品企業(yè)減負(fù)。以完達(dá)山乳業(yè)為例，其有6個(gè)液奶公司，每個(gè)公司日檢測(cè)三聚氰胺成品數(shù)量約為30個(gè)批次，依據(jù)檢測(cè)計(jì)劃，每品、每批需檢測(cè)一次三聚氰胺。每個(gè)固相萃取柱價(jià)格18.33元，除去洗脫試劑價(jià)格約0.33元，這樣，每3個(gè)樣品可節(jié)省36元檢測(cè)費(fèi)用，也就是1個(gè)樣品節(jié)省12元的檢測(cè)費(fèi)用。計(jì)算下來(lái)，每年每個(gè)液奶工廠檢測(cè)樣品30×365=10950個(gè)，一個(gè)工廠年節(jié)約檢測(cè)費(fèi)用12×10950=131400元。并且，這是個(gè)長(zhǎng)久而適用的節(jié)約過(guò)程。倘若將此方法推廣應(yīng)用到完達(dá)山的所有液奶工廠、奶粉工廠，乃至其他乳業(yè)企業(yè)，那么整個(gè)行業(yè)節(jié)約的檢測(cè)費(fèi)用將不容小覷。