李佳霖，吳嘉瑞，賈珊珊，劉殊羽，劉鑫馗，倪夢(mèng)蔚，劉瑩瑩，王郝嘉

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488)

益母草注射液是益母草單味藥材經(jīng)水煎、醇沉、精濾和滅菌等一系列工藝加工制成的純中藥制劑[1]，對(duì)自然分娩產(chǎn)后出血、剖宮產(chǎn)產(chǎn)后出血、排卵障礙性子宮出血、子宮復(fù)舊不全和月經(jīng)不調(diào)等均有療效[2-5]。益母草注射液可引起全子宮的持久興奮，增加子宮收縮的張力、強(qiáng)度和幅度，其發(fā)揮止血作用不僅與促進(jìn)子宮收縮有關(guān)，還與調(diào)節(jié)內(nèi)源性凝血時(shí)間而促進(jìn)止血等有關(guān)[6-7]。益母草注射液所含的水溶性生物堿是發(fā)揮子宮收縮作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[8]；在水溶性生物堿中，起主要作用的是水蘇堿、膽堿和葫蘆巴堿[9-10]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是整合了系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)和網(wǎng)絡(luò)分析學(xué)等學(xué)科的一門新興學(xué)科[11]；其研究策略的整體性、系統(tǒng)性的特點(diǎn)與中藥多成分、多靶點(diǎn)和多途徑的特點(diǎn)高度吻合，已被廣泛用于中藥活性成分的預(yù)測(cè)以及中藥作用機(jī)制的研究[12-13]。本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度初步分析、預(yù)測(cè)益母草注射液發(fā)揮止血調(diào)經(jīng)作用的分子機(jī)制，為深入開展益母草注射液機(jī)制研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 益母草注射液活性成分的收集

通過(guò)查找相關(guān)文獻(xiàn)和閱讀藥品說(shuō)明書，獲取已報(bào)道的益母草注射液的活性成分，最終將具有止血調(diào)經(jīng)作用的水蘇堿、膽堿和葫蘆巴堿納入研究，通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)查找并導(dǎo)出活性成分二維化學(xué)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。

1.2 活性成分靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)

依托中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)，尋找化合物的靶點(diǎn)蛋白；通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)尋找活性成分的Smiles結(jié)構(gòu)，并分別輸入SuperPred數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//prediction.charite.de/)、Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://swisstargetprediction.ch/)中進(jìn)行預(yù)測(cè)基因靶點(diǎn)；通過(guò)STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)(http://stitch.embl.de/)，直接查找活性成分的基因靶點(diǎn)[限定物種為“智人(Homo sapiens)”]。收集以上3種方式檢索得到益母草注射液活性成分的所有基因靶點(diǎn)。

1.3 疾病靶點(diǎn)的查找

治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)(therapeutic target database，TTD)(https://db.idrblab.org/ttd/)是一個(gè)提供已知或正在探索的可用作治療的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)和核苷酸靶點(diǎn)信息，以及與之相對(duì)應(yīng)的靶疾病、靶通路和相應(yīng)的藥物/配體信息的數(shù)據(jù)庫(kù)[14]。遺傳藥理學(xué)與藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(pharmacogenetics and pharmacogenomics knowledge base，PharmGKB)(http://www.pharmg-kb.org/)是一個(gè)收集完整的與藥物基因組相關(guān)的基因型和表型信息，并將這些信息系統(tǒng)歸類的數(shù)據(jù)庫(kù)。以“hemorrhage”“dysmenorrhea”和“excessive bleeding following childbirth”等疾病為關(guān)鍵詞，在TTD、PharmGKB數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行搜索，收集疾病作用的靶點(diǎn)基因。

1.4 “化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)和“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利用Cytoscape 3.6.1軟件(http://www.cytoscape.org/)，構(gòu)建益母草注射液的化學(xué)成分與相應(yīng)靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)構(gòu)建疾病與疾病靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)。Cytoscape 3.6.1是一個(gè)生物信息分析軟件，應(yīng)用于可視化生物通路、分子間相互作用網(wǎng)絡(luò)等，其提供了一套基本的數(shù)據(jù)整合、分析和可視化的功能，用于復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的分析，對(duì)于交互網(wǎng)絡(luò)中的每個(gè)節(jié)點(diǎn)，通過(guò)計(jì)算重要參數(shù)“度”來(lái)評(píng)估其拓?fù)涮卣鱗15]。度定義為節(jié)點(diǎn)i的邊數(shù)，度越高，表示節(jié)點(diǎn)越重要。

1.5 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

由于蛋白質(zhì)很少獨(dú)立發(fā)揮其功能，因此，通過(guò)研究蛋白質(zhì)功能群來(lái)了解PPI是很重要的，STRING 10.5數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/)正是這樣一個(gè)儲(chǔ)存已知和預(yù)測(cè)PPI的數(shù)據(jù)庫(kù)。將收集到的所有化合物靶點(diǎn)基因輸入到STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，限定物種為“智人(Homo sapiens)”，選取置信度>0.7的PPI關(guān)系數(shù)據(jù)[16]。將PPI關(guān)系數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape軟件中繪制PPI網(wǎng)絡(luò)，并對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析(Cytoscape→Tools→Network analyzer→Network analysis→Analyze network)。在網(wǎng)絡(luò)中，將節(jié)點(diǎn)大小設(shè)置為反應(yīng)度值的大小。同理，將疾病靶點(diǎn)基因輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，重復(fù)以上步驟。分別得到化合物靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)、疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.6 PPI網(wǎng)絡(luò)合并

運(yùn)用Cytoscape軟件中的Merge功能，將化合物靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)與疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)取交集，除去不相交的基因，2個(gè)網(wǎng)絡(luò)之間的共同靶點(diǎn)可能是益母草注射液發(fā)揮止血調(diào)經(jīng)作用的潛在作用靶點(diǎn)[17]。

1.7 富集分析

為說(shuō)明益母草注射液發(fā)揮止血調(diào)經(jīng)作用靶點(diǎn)在基因功能和信號(hào)通路中的作用，將潛在的作用靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//david.ncifcrf.gov/)，進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)生物學(xué)過(guò)程富集分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)代謝通路富集分析。DAVID平臺(tái)列表與背景均設(shè)置為“智人(Homo sapiens)”進(jìn)行操作[18]。選取錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(false discovery rate，F(xiàn)DR)<0.01的數(shù)據(jù)，分別利用Excel和Cytoscape軟件建立柱狀圖和“藥物-成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)模型圖。

2 結(jié)果

2.1 益母草注射液活性成分

經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)挖掘與整理，選取益母草注射液中3個(gè)主要活性成分進(jìn)行研究，見表1。

表1 納入研究的益母草注射液活性成分Tab 1 Active ingredients of motherwort injection

2.2 益母草注射液“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

益母草注射液的3個(gè)活性成分在TCMSP、STITCH、SwissTargetPrediction及SuperPred等數(shù)據(jù)庫(kù)中預(yù)測(cè)得到的靶點(diǎn)共58個(gè)，去除重復(fù)靶點(diǎn)后得到靶點(diǎn)56個(gè)。將活性成分和預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的信息導(dǎo)入Cytoscape軟件，構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，見圖1。圖中，正中間3個(gè)節(jié)點(diǎn)代表益母草注射液的3個(gè)活性成分，活性成分靶點(diǎn)位于四周，各化合物節(jié)點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)間形狀相同，節(jié)點(diǎn)的大小與節(jié)點(diǎn)的度呈正比例關(guān)系，邊代表化合物與作用靶點(diǎn)之間的聯(lián)系。

圖1 益母草注射液“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig 1 “Active Ingredient-Target” network of motherwort injection

2.3 益母草注射液“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

從TTD、PharmGKB數(shù)據(jù)庫(kù)中共檢索到53個(gè)與出血和月經(jīng)不調(diào)等疾病相關(guān)的靶點(diǎn)。將疾病和預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的信息導(dǎo)入Cytoscape軟件，構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，見圖2。圖中，方形節(jié)點(diǎn)代表益母草注射液可能治療的相關(guān)疾病，圓形節(jié)點(diǎn)代表與疾病相關(guān)的作用靶點(diǎn)，節(jié)點(diǎn)的大小與節(jié)點(diǎn)的度呈正比例關(guān)系，邊代表疾病與作用靶點(diǎn)之間的聯(lián)系。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

2.4.1 化合物靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)：將56個(gè)化合物靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中，設(shè)置置信度為0.7，蛋白相互關(guān)聯(lián)度為20，得到PPI關(guān)系文本，進(jìn)而得到PPI關(guān)系表格，導(dǎo)入Cytoscape軟件中繪制PPI網(wǎng)絡(luò)，見圖3。該網(wǎng)絡(luò)共涉及59個(gè)節(jié)點(diǎn)，202條邊，節(jié)點(diǎn)表示蛋白，每條邊代表PPI關(guān)系，節(jié)點(diǎn)的大小與節(jié)點(diǎn)的度呈正相關(guān)。

圖2 益母草注射液“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig 2 “Disease-Target” network of motherwort injection

圖3 化合物靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)Fig 3 PPI network of compound target

2.4.2 疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)：將在TTD、PharmGKB數(shù)據(jù)庫(kù)中得到的53個(gè)靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中，設(shè)置置信度為0.7，蛋白相互關(guān)聯(lián)度為20，得到PPI關(guān)系文本，進(jìn)而得到PPI關(guān)系表格，導(dǎo)入Cytoscape軟件中繪制PPI網(wǎng)絡(luò)，見圖4。該網(wǎng)絡(luò)共涉及62個(gè)節(jié)點(diǎn)，202條邊，節(jié)點(diǎn)表示蛋白，每條邊代表PPI關(guān)系，節(jié)點(diǎn)的大小與節(jié)點(diǎn)的度呈正相關(guān)。

圖4 疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)Fig 4 PPI network of disease target

2.5 網(wǎng)絡(luò)合并

運(yùn)用Cytoscape(Version 3.6.1)軟件中的Merge功能，將益母草注射液活性成分靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)與相關(guān)疾病的PPI網(wǎng)絡(luò)合并取交集(Tools→Merge→Intersection→Merge)，重合的基因則可能為益母草注射液發(fā)揮止血調(diào)經(jīng)作用的潛在靶點(diǎn)。共得到9個(gè)潛在靶點(diǎn)蛋白，分別為PTGS1、PTGS2、CYP2D6、CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9、CYP2C19、NCOA2和RXRA；其中，度值較大的靶點(diǎn)為CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4、CYP1A2、PTGS1和PTGS2，見表2。

2.6 GO和KEGG富集分析

2.6.1 GO功能富集分析：利用DAVID平臺(tái)進(jìn)行GO功能富集分析，對(duì)合并網(wǎng)絡(luò)后涉及的9個(gè)靶點(diǎn)蛋白在基因功能中的作用進(jìn)行研究。選取FDR<0.01的25個(gè)GO條目，其中，與分子功能相關(guān)的條目有11個(gè)，主要涉及血紅素結(jié)合(GO：0020037)、氧氣結(jié)合(GO：0019825)、鐵離子結(jié)合(GO：0005506)和酶結(jié)合(GO：0019899)等；與生物學(xué)過(guò)程相關(guān)的條目有11個(gè)，主要涉及藥物代謝過(guò)程(GO：0017144)、藥物分解過(guò)程(GO：0042737)和肝藥酶CYP通路(GO：0019373)等；與細(xì)胞組分相關(guān)的條目有3個(gè)，為細(xì)胞器膜(GO：0031090)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜(GO：0031090)和細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞膜結(jié)合的細(xì)胞器(GO：0043231)，見表3、圖5。

表2 益母草注射液止血調(diào)經(jīng)的潛在靶點(diǎn)信息Tab 2 Information on potential targets of motherwort injection for hemostasis and regulating menstruation

2.6.2 KEGG通路富集分析：利用DAVID平臺(tái)的KEGG通路富集分析功能，對(duì)上述25個(gè)蛋白在信號(hào)通路中的作用進(jìn)行研究，共得到11個(gè)通路，根據(jù)FDR<0.01篩選出5條信號(hào)通路，見表4、圖6。圖6是對(duì)益母草注射液靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG分析的氣泡圖，Y軸表示靶基因顯著富集的KEGG途徑，X軸表示通路中靶基因的數(shù)目；富集因子代表屬于該通路的靶基因數(shù)量與位于該通路中所有注釋基因數(shù)量的比值，富集因子越大，代表富集程度越高；點(diǎn)的大小表示通路中的靶基因數(shù)量，且點(diǎn)的顏色深淺反映了不同的P范圍。所篩選到的通路包括“Serotonergic synaps”(含血清素的神經(jīng)突觸)信號(hào)通路、“Drug metabolism-cytochrome P450”(藥物代謝-肝藥酶CYP)信號(hào)通路、“Chemical carcinogenesis”(化學(xué)致癌作用)信號(hào)通路、“Linoleic acid metabolism”(亞油酸的新陳代謝)信號(hào)通路和“Arachidonic acid metabolism”(花生四烯酸代謝)信號(hào)通路，推測(cè)益母草注射液的有效成分可能通過(guò)作用于上述通路來(lái)達(dá)到治療疾病的目的。

表3 益母草注射液止血調(diào)經(jīng)的相關(guān)GO富集分析條目Tab 3 List of GO functional enrichment analysis of motherwort injection for hemostasis and regulating menstruation

圖5 潛在靶點(diǎn)的GO分析Fig 5 GO enrichment analysis of potential target

表4 益母草注射液止血調(diào)經(jīng)的相關(guān)KEGG通路分析條目Tab 4 List of KEGG pathway enrichment analysis of motherwort injection for hemostasis and regulating menstruation

圖6 KEGG途徑富集分析不同模塊的靶標(biāo)Fig 6 KEGG pathway enrichment analysis for targets in different modules

2.7 “藥物-成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建

益母草注射液“藥物-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)見圖7，共包括65個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中1個(gè)藥物節(jié)點(diǎn)，3個(gè)化合物節(jié)點(diǎn)，56個(gè)靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)，5個(gè)通路節(jié)點(diǎn)；圖中，菱形節(jié)點(diǎn)代表藥物，正六邊形節(jié)點(diǎn)代表化合物，圓形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，三角形節(jié)點(diǎn)表示益母草注射液潛在的治療靶點(diǎn)，正方形節(jié)點(diǎn)代表信號(hào)通路，節(jié)點(diǎn)的大小與節(jié)點(diǎn)的度成正比關(guān)系。該圖體現(xiàn)出了益母草注射液多成分、多靶點(diǎn)和多疾病的復(fù)雜作用特點(diǎn)。

圖7 益母草注射液“藥物-活性成分-潛在靶點(diǎn)-作用通路”網(wǎng)絡(luò)Fig 7 “Drug-Active Ingredient-Potential Target-Action Pathway” network of motherwort injection

3 討論

益母草注射液具有止血調(diào)經(jīng)的功效，臨床上主要用于治療產(chǎn)后出血、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病。為了更好地探究益母草注射液止血調(diào)經(jīng)的作用機(jī)制，本研究依托網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，構(gòu)建了“化合物-靶點(diǎn)”“靶點(diǎn)-疾病”和“藥物-化合物-靶點(diǎn)-疾病”等網(wǎng)絡(luò)，分析了化合物與靶點(diǎn)、靶點(diǎn)與疾病以及藥物之間的相互作用關(guān)系。益母草注射液所涉及到的關(guān)鍵靶點(diǎn)主要包括PTGS2、PTGS1、CYP2C19、CYP2C9和CYP2D6等，上述靶點(diǎn)參與調(diào)控的疾病主要包括出血癥、月經(jīng)不調(diào)和功能失調(diào)性子宮出血等；對(duì)其潛在治療靶點(diǎn)進(jìn)行了GO功能富集和KEGG通路富集分析，得到富集潛在靶點(diǎn)的通路5條，潛在靶點(diǎn)通過(guò)5條通路相互作用，為益母草注射液多成分、多靶點(diǎn)和多途徑的治療機(jī)制研究提供了參考。

前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶(PTGS)是一種花生四烯酸合成前列腺素類物質(zhì)的關(guān)鍵性限速酶，目前已知至少有2種同功異構(gòu)體，即PTGS1和PTGS2。PTGS及其產(chǎn)物參與機(jī)體的凝血平衡、炎癥反應(yīng)等多種生理病理過(guò)程。PTGS1為結(jié)構(gòu)型，在大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)呈穩(wěn)定表達(dá)，產(chǎn)生多種生理學(xué)功能，如調(diào)節(jié)血小板聚集和腎血流量[19]。PTGS2是引起炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶之一，可促進(jìn)炎癥反應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和炎癥遞質(zhì)等刺激因素的影響時(shí)，前列腺素E2(PGE2)濃度增加，引起子宮平滑肌收縮，提升子宮平滑肌緊張度與收縮頻率[20-22]。因此，益母草注射液治療產(chǎn)后子宮出血的作用機(jī)制可能與調(diào)控PTGS表達(dá)有關(guān)，對(duì)PTGS的調(diào)控具體表現(xiàn)在調(diào)節(jié)血小板聚集、增加子宮收縮力等方面，這可能在治療產(chǎn)后子宮出血的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。排卵障礙性異常子宮出血是異常子宮出血的最常見原因，為臨床常見疾病，其致病機(jī)制為，下丘腦-垂體-卵巢軸功能異常引起持續(xù)性無(wú)排卵，雌激素持續(xù)作用于子宮內(nèi)膜，引起雌激素突破性出血或撤退性出血，故單一雌激素的長(zhǎng)期作用是出血的主要原因[7]。體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，通過(guò)靜脈或第三腦室注射PGE2能促進(jìn)促性腺激素的分泌。研究結(jié)果顯示，排卵障礙性異常子宮出血患者外周循環(huán)中PTGS2表達(dá)量較正常對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，PTGS2作為前列腺素合成的關(guān)鍵酶可催化花生四烯酸合成多種前列腺素，作用于下丘腦，調(diào)節(jié)促性腺激素釋放激素的分泌，導(dǎo)致排卵障礙性異常子宮出血的發(fā)生[23]。而益母草注射液止血的機(jī)制可能是抑制PTGS2表達(dá)，減少前列腺素的合成，進(jìn)而減少單一雌激素的分泌，防止出血。PTGS2也可參與月經(jīng)的發(fā)生，月經(jīng)前期，子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞PTGS2表達(dá)增加并催化合成前列腺素，子宮肌層受到刺激而收縮，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜功能層的螺旋小動(dòng)脈發(fā)生持續(xù)痙攣現(xiàn)象，使子宮內(nèi)膜血流減少，組織變性壞死，發(fā)生月經(jīng)。若PTGS2的表達(dá)過(guò)高，則會(huì)引起子宮肌層持續(xù)收縮，發(fā)生痛經(jīng)。由此可見，益母草注射液對(duì) PTGS的調(diào)控可能在治療痛經(jīng)、調(diào)節(jié)月經(jīng)的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。

肝藥酶CYP系統(tǒng)多位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，催化多種內(nèi)源、外源物質(zhì)的代謝。肝藥酶CYP能通過(guò)其結(jié)構(gòu)中的血紅素中的鐵離子傳遞電子，氧化異源物質(zhì)，增強(qiáng)異源物質(zhì)的水溶性，使異源物質(zhì)更易排出體外。肝藥酶CYP有多個(gè)亞家族，其中與心血管相關(guān)的酶包括CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19、CYP1A2和CYP3A4等5種。研究結(jié)果表明，CYP2C19基因攜帶者對(duì)血小板的抑制率高于野生型患者，而血小板在止血、傷口愈合及炎癥反應(yīng)等生理和病理過(guò)程中有著非常重要的作用，CYP2C19基因突變可降低藥物的抗血小板作用[24-26]。強(qiáng)效血小板抑制劑能抑制ADP、花生四烯酸、膠原、凝血酶和血小板活化因子等引起的血小板聚集，并對(duì)血小板聚集的各階段都有抑制作用，抑制CYP2C19基因的表達(dá)，使血小板聚集抑制率降低，可增強(qiáng)凝血效果[26-29]。因此，益母草注射液治療產(chǎn)后子宮出血的作用機(jī)制可能與調(diào)控CYP2C19基因表達(dá)有關(guān)，其對(duì)CYP2C19的調(diào)控表現(xiàn)在調(diào)節(jié)血小板聚集程度從而達(dá)到凝血效果。

GO功能富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，益母草注射液治療出血性相關(guān)疾病可能主要通過(guò)對(duì)肝藥酶CYP的生物合成的調(diào)控、對(duì)藥物的反應(yīng)、與血紅素結(jié)合、與氧結(jié)合和對(duì)類固醇激素代謝方面的調(diào)控。KEGG通路富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥物代謝-肝藥酶CYP通路和含血清素的神經(jīng)突觸通路中均富集了CYP2C9、CYP2D6和CYP2C19基因，這些通路之間存在很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性，說(shuō)明1個(gè)基因可能參與出血相關(guān)疾病的多條通路，而益母草注射液對(duì)于出血性疾病的治療也可能是通過(guò)對(duì)多條通路共同作用實(shí)現(xiàn)的。由此推測(cè)，益母草注射液的有效成分可能通過(guò)作用于上述靶點(diǎn)，影響信號(hào)通路，達(dá)到治療疾病的目的。

綜上所述，本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，對(duì)益母草注射液的多成分、多靶點(diǎn)與多種疾病間復(fù)雜的關(guān)系進(jìn)行了研究。研究結(jié)果初步闡釋了益母草注射液止血調(diào)經(jīng)的基本藥理學(xué)作用和相關(guān)機(jī)制，并為進(jìn)一步深入探討其作用機(jī)制奠定了良好的基礎(chǔ)和參考依據(jù)。