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紅景天當(dāng)歸不同配伍對免疫低下小鼠免疫功能的影響

2020-03-23 08:48史頂聰趙宏宇佟曉樂張鳳清
食品研究與開發(fā) 2020年5期
關(guān)鍵詞:紅景天灌胃小鼠

史頂聰,趙宏宇,佟曉樂,張鳳清,*

(1.長春工業(yè)大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,吉林長春130012;2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院,吉林長春130021;3.吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司,吉林集安134200)

以免疫力低下和慢性疲勞為主要癥狀的亞健康問題是21 世紀(jì)威脅人類健康的重大問題,亞健康狀態(tài)以疲勞、活力減退、免疫力降低為主要的臨床表現(xiàn),發(fā)生率呈逐年增加的趨勢。因此,以提高免疫力和抗疲勞來預(yù)防亞健康為切入點(diǎn)具有非常重要的作用。筆者通過以往藥理研究發(fā)現(xiàn),紅景天[1-3]和當(dāng)歸[4-6]具有很好的活性,已有眾多學(xué)者研究報道了其藥理活性,如抗病毒、抗腫瘤、刺激免疫球蛋白和抗體的產(chǎn)生,增強(qiáng)機(jī)體免疫和抗氧化能力等,且抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等活性已被應(yīng)用于臨床研究。紅景天首載的藏醫(yī)藥著作是《四部典醫(yī)》,性甘、苦、平,歸肺、心經(jīng);益氣活血,通脈平喘;用于氣虛血瘀,胸痹心痛,中風(fēng)偏癱,倦怠氣喘[7]。當(dāng)歸始記于《神農(nóng)本草經(jīng)》謂之“當(dāng)歸味溫,主呃逆上氣”被列為中品[8]。從國家食品藥品監(jiān)督管理總局查詢已注冊的國內(nèi)外具有增強(qiáng)免疫的保健食品,紅景天114 種,當(dāng)歸170 種,紅景天當(dāng)歸共同使用的有6 種。在筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)報道中,紅景天和當(dāng)歸在各種保健食品中配伍比例不盡相同,效果也各有差異。筆者通過研究紅景天和當(dāng)歸不同配伍比例對免疫低下小鼠的作用,給紅景天和當(dāng)歸配伍產(chǎn)品的研究開發(fā)提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

雄性 KM 小鼠 210 只,SPF 級,體重為 18 g~22 g:長春生物制品研究所有限責(zé)任公司,合格證號SCXK-(吉)2011-0003,由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會審核通過,符合實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會規(guī)定。

1.2 儀器

JA2003B 千分之一天平:上海越平科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;BT418/3 電子天平:深圳市博途電子科技有限公司;723 可見分光光度計:上海菁華科技儀器有限公司;DT5-3 型低速臺式自動平衡離心機(jī):北京時代北利離心機(jī)有限公司;KDC-2046 低速冷凍離心機(jī):安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;SSW-600-2S 型電熱恒溫水槽、BXM-30R 立式壓力蒸汽滅菌器:上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.3 藥品與試劑

紅景天由長春工業(yè)大學(xué)食品實(shí)驗(yàn)室提供,經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院牛志多副主任鑒定為紅景天為本品為景天科植物大花紅景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba 的干燥根和根莖。當(dāng)歸由長春工業(yè)大學(xué)食品實(shí)驗(yàn)室提供,經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院牛志多副主任鑒定為當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels 的干燥根。印度墨水:上海源葉生物科技有限公司;無水碳酸氫鈉:分析純,天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司,使用時現(xiàn)用現(xiàn)配;巴比妥酸.二水、巴比妥鈉:分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氯化鈉、葡萄糖、檸檬酸鈉、檸檬酸、丙酮:分析純,北京化工廠;2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB):分析純,北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司;麻油:市售。

1.4 樣品制備

1.4.1 紅景天

將紅景天加 70 %乙醇,料液比 1 ∶10(g/mL),回流提取3 次,每次1 h,過濾,濾液合并,濾液減壓回收乙醇(60 ℃,-0.06 MPa)得濃縮液,真空干燥(60 ℃,-0.08 MPa),冷卻得干膏,粉碎,出膏率為28.6%,有效成分為紅景天苷,干膏紅景天苷含量為361 mg/100 g。

1.4.2 當(dāng)歸

當(dāng)歸:將當(dāng)歸加水,料液比為 1 ∶10(g/mL),浸泡30 min,水煎煮 3 次,分別為 2、1、1 h,過濾,將提取液減壓旋蒸后減壓干燥得干膏,粉碎得干膏粉,出膏率為36.8 %,有效成分為粗多糖,干膏粗多糖含量為2.6 g/100 g。

2 方法

2.1 分組與給藥

雄性 KM 小鼠 210 只,適應(yīng) 3 d,隨機(jī)分為3 個部分(細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)、體液免疫實(shí)驗(yàn)、非特異性免疫實(shí)驗(yàn)),每部分70 只。將每部分的70 只雄性KM 小鼠隨機(jī)分為 7 組,每組 10 只,即對照組(C 組)、模型組(M組)、紅景天組(R 組)、當(dāng)歸組(A 組)、紅景天當(dāng)歸質(zhì)量比 2 ∶1 配伍組(RA1 組)、紅景天當(dāng)歸 1 ∶1 配伍組(RA2 組)、紅景天當(dāng)歸 1 ∶2 配伍組(RA3 組)。其中,C組和M 組小鼠給予蒸餾水,R 組給予286 mg/(kg·d)紅景天提取物,A 組給予368 mg/(kg·d)當(dāng)歸提取物,RA1組、RA2 組、RA3 組分別給予313、327、341 mg/(kg·d)紅景天提取物和當(dāng)歸提取物不同配比的樣品,各受試物組灌胃劑量均相當(dāng)于生藥材1 000 mg/(kg·d)。各組小鼠均在每天上午 9:00~10:00 按照 10 mL/kg 給予相應(yīng)受試物,每天1 次,連續(xù)30 d,每周稱1 次體重,根據(jù)體重調(diào)整灌胃量。于第 26 天開始,M 組、R 組、A 組、RA1 組、RA2 組、RA3 組小鼠分別按100 mg/(kg·d)腹腔注射環(huán)磷酰胺,造成免疫低下模型,連續(xù)4 d。

2.2 細(xì)胞免疫功能—遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)

DNFB 溶液配制:稱取DNFB 50 mg,置清潔干燥小瓶中,將預(yù)先配好的5 mL 丙酮麻油體積比為1 ∶1溶液,倒入小瓶,蓋好瓶塞并用膠布密封,混勻后,備用。

第25 天灌胃后,所有小鼠腹部剪毛,范圍約3 cm×3 cm,除C 組外其余組小鼠用新配置的DNFB 溶液50 μL 均勻涂抹腹部致敏,進(jìn)行初次免疫,C 組以同體積丙酮、麻油的混合液均勻涂抹腹部。5 d 后,除C 組外其余組小鼠用DNFB 溶液10 μL 均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行攻擊,C 組以等量丙酮、麻油 1 ∶1 的混合液涂抹右耳。攻擊24 h 后,頸椎脫臼處死小鼠,用打孔器取下直徑8 mm 的耳片,稱重。用耳腫脹度表示遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)的程度。同時取胸腺和脾臟,計算臟器指數(shù)。

耳腫脹度(mg)=右耳質(zhì)量(mg)-左耳質(zhì)量(mg)

2.3 體液免疫功能--血清溶血素測定

水楊酸緩沖液(salicylic acid buffer,SA 緩沖液):巴比妥酸0.46 g,氯化鎂0.1 g,氯化鈣0.2 g,氯化鈉8.38 g,碳酸氫鈉0.252 g,巴比妥鈉0.3 g,加蒸餾水至1 000 mL,25 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

阿氏液(羊紅細(xì)胞保護(hù)液):葡萄糖2.05 g,檸檬酸鈉0.8 g,檸檬酸0.055 g,氯化鈉0.42 g,加蒸餾水至100 mL 溶解,pH 值調(diào)到6.1,經(jīng)過114 ℃高壓蒸汽滅菌10 min,待冷卻后,放置在4 ℃冰箱內(nèi),保存?zhèn)溆谩?/p>

綿羊紅細(xì)胞制備:綿羊站立,向上固定綿羊脖子,清除脖子部位羊毛后,頸靜脈取血。將羊血放入裝有滅菌玻璃珠的滅菌錐形瓶中,朝一個方向搖動,以脫纖維,制備綿羊紅細(xì)胞。按羊紅細(xì)胞∶阿氏液=1 ∶2 的體積比例,將阿氏液加入到綿羊紅細(xì)胞中。放置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。一周更換兩次保護(hù)液。

給予受試物27 d 后,取部分綿羊紅細(xì)胞,移入滅菌的刻度離心管內(nèi),加入生理鹽水,混勻后,2 000 r/min離心10 min,去除上清液,再加生理鹽水混勻離心,反復(fù)洗至上清成清澈透明狀,最后將上清棄掉,留下壓積的綿羊紅細(xì)胞(sheep red blood cell,SRBC),用生理鹽水配成2%(體積分?jǐn)?shù))的細(xì)胞懸液,每只小鼠腹腔注射0.2 mL 的細(xì)胞懸液進(jìn)行免疫。

補(bǔ)體制備:5 只豚鼠,禁食不禁水5 h 后,10%水合氯醛麻醉,腹主動脈采集豚鼠血,25 ℃放置1 h,2 000 r/min 離心10 min,取上清。另取部分綿羊紅細(xì)胞,以生理鹽水反復(fù)洗至上清成清澈透明狀,將上清棄掉,留下壓積的紅細(xì)胞(SRBC),按 SRBC ∶豚鼠血清=1 ∶5(體積比)的比例,將SRBC 加入到豚鼠血清中,放入 4 ℃冰箱 30 min,2 000 r/min 離心 10 min,取上清,-70 ℃保存。用時以 SA 緩沖液按 1 ∶8 體積比稀釋。

給予受試物30 d 后,小鼠稱重,摘除眼球,取血于離心管內(nèi),放置約1 h 后,低速冷凍離心機(jī)2 000 r/min離心10 min,吸取血清備用。取小鼠血清,用SA 緩沖液稀釋200 倍。吸取1 mL 的稀釋后血清置試管內(nèi),依次加入0.5 mL10%(體積比)SRBC,1 mL 補(bǔ)體(用 SA緩沖液按1 ∶8 稀釋)。另設(shè)不加血清的對照管(以SA 緩沖液代替)。置37 ℃恒溫水浴中保溫15 min 后,冰浴終止反應(yīng)。2 000 r/min 離心10 min,取上清液1 mL,加都氏試劑3 mL,同時取10%(體積分?jǐn)?shù))SRBC 0.25 mL 加都氏試劑至4 mL,充分混勻,放置10 min 后,于540 nm處以對照管調(diào)零,分別測定各管吸光度。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示,按下列公式計算:

樣品HC50=(樣品管吸光度值/SRBC 半數(shù)溶血時管的吸光度值)×稀釋倍數(shù)

2.4 非特異性免疫—碳廓清實(shí)驗(yàn)

各組小鼠于末次給藥1 h 后,將各組小鼠稱量體重,各組小鼠按0.01 mL/g 平行由尾靜脈注入按1 ∶3體積比加蒸餾水稀釋的印度墨汁。待墨汁注入小鼠靜脈后,立即記錄注入時間。小鼠注入墨汁后2、10 min,分別從小鼠內(nèi)眥靜脈叢取血20 μL,立即將其加到盛有2 mL 0.1%碳酸鈉溶液試管中。用723 分光光度計在600 nm 波長處測光密度值(OD),以Na2CO3溶液作空白對照。

將小鼠處死,摘取小鼠肝臟和脾臟,用濾紙吸干臟器表面血污,用千分之一天平稱重。以吞噬指數(shù)表示小鼠碳廓清的能力。按下式計算吞噬指數(shù)a。

K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1);吞噬指數(shù)a=體重/(肝重+脾重)×K1/3

式中:K 為吞噬速率(未經(jīng)矯正的吞噬指數(shù));OD1為t1血標(biāo)本的OD 值;OD2為t2血標(biāo)本的OD 值;t1為注入墨汁后第一次取血時間(2 min);t2為注入墨汁后第二次取血時間(10 min)。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果與分析

3.1 測定結(jié)果

與模型組相比較,紅景天和當(dāng)歸不同比例對小鼠的胸腺、脾臟均有影響,紅景天和當(dāng)歸單獨(dú)作用效果不明顯,結(jié)果見表1。

表1 紅景天當(dāng)歸不同配伍對小鼠脾臟、胸腺指數(shù)的影響(n=10,)Table 1 Effects of different compatibility of rhodiola and angelica on spleen and thymus index of mice(n=10,)

表1 紅景天當(dāng)歸不同配伍對小鼠脾臟、胸腺指數(shù)的影響(n=10,)Table 1 Effects of different compatibility of rhodiola and angelica on spleen and thymus index of mice(n=10,)

注:-表示等條件下按10 mL/(kg·d)蒸餾水灌胃;*表示P<0.05,與M組比較具有差異性;**表示P<0.01,與M 組比較具有顯著差異性。

胸腺指數(shù)/(g/10 g)C 組 10 - 4.52±0.77**3.29±0.61**M 組 10 - 3.67±0.55 2.48±0.91 R 組 10 286 4.03±0.69 2.87±0.81 A 組 10 368 3.99±0.60 2.74±0.49 RA1 組 10 313 4.21±0.61*2.97±0.53*RA2 組 10 327 4.27±0.53*2.99±0.51*RA3 組 10 341 4.13±0.55*2.94±0.44*組別 小鼠只數(shù) 灌胃量/(mg/kg)脾臟指數(shù)/(g/10 g)

與C 組比較,M 組的脾臟、胸腺指數(shù)均顯著降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與 M 組比較,R 組和 A 組各指數(shù)均有所升高但無顯著性,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),RA1 組、RA2 組和 RA3 組脾臟、胸腺指數(shù)均明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),RA2 組各項(xiàng)指數(shù)略高于RA1 組和RA3 組。

3.2 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)中,與模型組相比較,紅景天和當(dāng)歸不同比例中RA2 組效果明顯,其余各組作用效果不明顯,結(jié)果見表2。

與C 組比較,M 組左右耳腫脹差值顯著低于C組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與 M 組比較,R 組、A組、RA1 組、RA3 組左右耳腫脹差均高于 M 組,但不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),RA2 組左右耳腫脹差明顯高于 M 組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 2 Cellular immunoassay results(n=10,)

表2 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 2 Cellular immunoassay results(n=10,)

注:-表示等條件下按10 mL/(kg·d)蒸餾水灌胃;*表示P<0.05,與M 組比較具有差異性;**表示P<0.01,與M 組比較具有顯著差異性。

組別小鼠只數(shù)灌胃量/(mg/kg) 左右耳腫脹差/mg C 組 10 - 5.28±0.89**M 組 10 - 3.88±1.21 R 組 10 286 4.31±1.08 A 組 10 368 4.25±0.97 RA1 組 10 313 4.56±1.11 RA2 組 10 327 4.85±0.91*RA3 組 10 341 4.43±1.06

3.3 體液免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

體液免疫實(shí)驗(yàn)中,與模型組相比較,紅景天和當(dāng)歸不同比例對小鼠的半數(shù)溶血值(200 倍稀釋)效果均較為明顯,紅景天個當(dāng)歸作用效果不明顯,結(jié)果見表3。

表3 體液免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 3 Results of humoral immunity test(n=10,)

表3 體液免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 3 Results of humoral immunity test(n=10,)

注:-表示等條件下按10 mL/(kg·d)蒸餾水灌胃;*表示P<0.05,與M組比較具有差異性;**表示P<0.01,與M 組比較具有顯著差異性。

組別小鼠只數(shù)灌胃量/(mg/kg)半數(shù)溶血值(200 倍稀釋)/%C 組 10 - 105.37±20.11**M 組 10 - 72.55±21.50 R 組 10 286 83.88±22.31 A 組 10 368 80.24±20.65 RA1 組 10 313 94.87±22.66*RA2 組 10 327 95.50±20.81*RA3 組 10 341 91.33±19.88*

與 C 組比較,M 組 HC50顯著降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與 M 組比較,R 組和 A 組 HC50有所升高,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),RA1 組、RA2 組、RA3 組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),RA2 組略高于RA1組和RA2 組。

3.4 非特異性免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

非特異性免疫實(shí)驗(yàn)中,與模型組相比較,各組對小鼠的吞噬數(shù)率和吞噬指數(shù)均有明顯的影響,結(jié)果見表4。

與C 組比較,M 組K 值顯著降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),吞噬指數(shù)(α)明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與 M 組比較,R 組、A 組、RA1 組、RA3 組吞噬速率(K)值明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),RA2 組 K 值顯著升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),R組、A 組、RA1 組、RA2 組、RA3 組吞噬指數(shù) α 明顯升高,均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 非特異性免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 4 Non-specific immunoassay results(n=10,)

表4 非特異性免疫實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果(n=10,)Table 4 Non-specific immunoassay results(n=10,)

注:-表示等條件下按10 mL/(kg·d)蒸餾水灌胃;*表示P<0.05,與M組比較具有差異性;**表示P<0.01,與M 組比較具有顯著差異性。

組別 小鼠只數(shù) 灌胃量/(mg/kg)吞噬速率K(×100) 吞噬指數(shù)α 5.15±0.66*M 組 10 - 2.88±0.80 4.20±0.74 R 組 10 286 3.66±0.77*4.94±0.77*A 組 10 368 3.71±0.81*5.05±0.62*RA1 組 10 313 3.79±0.88*5.04±0.69*RA2 組 10 327 3.99±0.96**5.11±0.71*RA3 組 10 341 3.80±0.91*5.10±0.77*C 組 10 - 4.13±1.05**

4 討論與結(jié)論

醫(yī)學(xué)研究表明,免疫系統(tǒng)是由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子等組成。免疫系統(tǒng)具有抗感染的免疫防御功能,具有能夠及時識別、清除體內(nèi)損傷或衰老細(xì)胞的免疫自穩(wěn)功能。具有能夠及時識別細(xì)胞復(fù)制錯誤或細(xì)胞突變并將其清除的免疫監(jiān)視功能[9]。研究表明,正常的免疫功能對機(jī)體有利,對異體抗原如病原微生物、細(xì)菌毒素等產(chǎn)生排斥反應(yīng),發(fā)揮免疫保護(hù)作用;但當(dāng)免疫功能異常時可造成機(jī)體自身組織損傷,導(dǎo)致超敏反應(yīng)、免疫缺陷及自身免疫病等[10]。本研究就細(xì)胞免疫,體液免疫和非特異性免疫三方面指標(biāo)進(jìn)行了動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),綜合評價紅景天提取物和當(dāng)歸提取物不同配伍對免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

紅景天能刺激B 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-12[11-12](interleukin-12,IL-12),IL-12可刺激活化型 T 細(xì)胞增殖,促進(jìn) Th1 細(xì)胞分化[11,13-14];IL-12 誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)和NK 細(xì)胞的細(xì)胞活性并促進(jìn)其分泌γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)[15],促進(jìn)抗原呈遞、提高 NK細(xì)胞活性和巨噬細(xì)胞溶酶體活性。紅景天能明顯增加免疫球蛋白 G(immunoglobulin G,IgG)的含量[16-17],促發(fā)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用[17-18](antibodydependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC) 效應(yīng),IgG抗體通過Fab 段與靶細(xì)胞表面抗原決定簇特異性結(jié)合后,其 Fc 段[19]可與有 FcγR 的殺傷細(xì)胞 NK 細(xì)胞結(jié)合,觸發(fā)效應(yīng)細(xì)胞的殺傷活性,直接殺傷靶細(xì)胞。紅景天苷灌胃小鼠后能明顯促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng),增強(qiáng)脾細(xì)胞對白細(xì)胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的反應(yīng)性,增加小鼠脾細(xì)胞對T 細(xì)胞分泌的淋巴因子IL-2 的分泌[11,20],從而表現(xiàn)出紅景天苷具有明顯調(diào)解和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能。

當(dāng)歸在促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞活化后,作用于各種免疫效應(yīng)細(xì)胞,產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞因子并參與機(jī)體的神經(jīng)、體液及內(nèi)分泌系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)免疫。臨床研究表明,當(dāng)歸多糖可以激活不同種類的免疫細(xì)胞,同時也可以激活補(bǔ)體系統(tǒng),促進(jìn)細(xì)胞因子的生成,對免疫系統(tǒng)起恢復(fù)調(diào)節(jié)的作用[21]。當(dāng)歸多糖直接作用于外周血中的免疫細(xì)胞后,髓系單核細(xì)胞表面特異性分子CDl4表達(dá)增強(qiáng),同時使單核細(xì)胞表面、在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用的第二信號分子CD86 分子表達(dá)也明顯增加[22]。當(dāng)歸多糖作用于巨噬細(xì)胞后可使IL-2,白細(xì)胞介素-4(interleukin-4,IL-4),白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6),和 IFN-γ 表達(dá)增加,IL-6 和 IFN-γ 增加迅速,IL-2 的增加要稍后一些。表明首先作用于非特異性免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和NK 細(xì)胞,隨后影響輔助T細(xì)胞,同時對B 細(xì)胞也具有潛在的活化作用,增加抗體的產(chǎn)生[23]。

中藥配伍傳統(tǒng)意義,在中醫(yī)臨床上,基于病情需要根據(jù)藥性的特點(diǎn)配伍使用,不是藥物的簡單相加,是以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ),辨證論治,并結(jié)合中藥藥性理論,遵守“君臣佐使”的配伍原則,使之成為“有制之師”,最終實(shí)現(xiàn)“整體綜合調(diào)節(jié)”的目標(biāo)[24]。因此中藥藥性理論是指導(dǎo)中醫(yī)臨床用藥的關(guān)鍵[25]。現(xiàn)代研究表明中藥配伍能夠?qū)⑻囟ńM分進(jìn)行整合,達(dá)到多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮藥效的作用[26]。紅景天刺激B 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌IL-12,IL-12 促進(jìn)Th1 細(xì)胞分化,產(chǎn)生IFN-γ,而當(dāng)歸作用于巨噬細(xì)胞,使 IL-6 和 IFN-γ 迅速增加;紅景天促進(jìn)IL-2 和IL-12 的分泌彌補(bǔ)當(dāng)歸促進(jìn)IL-2 分泌的延遲和不足,說明紅景天與當(dāng)歸對小鼠的免疫作用有不同的靶點(diǎn)。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果,M 組各項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于C 組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),說明本次實(shí)驗(yàn)造模成立,配伍組各項(xiàng)指標(biāo)均明顯高于M 組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明紅景天與當(dāng)歸配伍對免疫低下小鼠具有增強(qiáng)免疫的作用。本次實(shí)驗(yàn)配伍組各項(xiàng)指標(biāo)均高于R 組和A 組,其中紅景天當(dāng)歸1 ∶1 配伍組各項(xiàng)指標(biāo)高于其余各組,紅景天和當(dāng)歸配伍可能產(chǎn)生了協(xié)同作用,也印證了這一點(diǎn)。但其具體通過何種途徑發(fā)揮作用,以及T、B 細(xì)胞在此免疫調(diào)節(jié)中的具體作用有待于今后從分子水平、體外實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步闡明。

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