周本裕 劉文清 徐云慶 蔣春香

奧氮平(olanzapine),是一種臨床常用的精神類藥品［1］,其藥理機(jī)制交復(fù)雜,能與多巴胺受體、5-羥色胺(5-HT)受體和膽堿能受體結(jié)合,并具有拮抗作用［2,3］?？诜樟己?食物對(duì)其吸收速率無(wú)影響［4］,口服后5～8 h 可達(dá)到血漿峰濃度。主要在肝臟代謝,約75%的本品以代謝物的形式從尿中排出［5］?？诜鹗紕┝俊⒅委焺┝亢途S持劑量一般為10 mg/d,有效范圍為5～20 mg/d［6,7］。本藥物可引起泌乳素增加,但與劑量無(wú)關(guān)。少見(jiàn)不良反應(yīng)有帕金森綜合征、肝轉(zhuǎn)氨酶一過(guò)性增高等［8］。由于其不良反應(yīng)隨著藥物濃度的增加而增多,因此對(duì)于奧氮平的血藥濃度檢測(cè)尤為重要［9］。作者基于以上認(rèn)識(shí),用高效液相色譜法測(cè)定人血漿中奧氮平的濃度,探討高效液相色譜法測(cè)定人血漿中奧氮平濃度方法及效果。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 奧氮平標(biāo)準(zhǔn)品(美國(guó)禮來(lái)公司)；甲醇、乙腈、乙酸乙酯、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、磷酸、抗壞血酸均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),水為雙重蒸餾水。

1.2 儀器與色譜條件 Agilent 1260 型高效液相色譜儀；G1314B 紫外檢測(cè)器；色譜柱為InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm)；流動(dòng)相為：V(十二烷基硫酸鈉,磷酸二氫鈉 pH 2.5)∶V(乙腈)=1 ∶1 的溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫35℃；干式氮吹儀Version 1.0；LEETO旋片真空泵；JP-dos 超聲波清洗機(jī)。

1.3 樣品處理 ①抽取臨床服用奧氮平患者的靜脈血3 ml,用肝素抗凝,以3000 r/min,離心5 min,吸取上層血漿,在每毫升血漿中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%的抗壞血酸10 μl,置于-20℃的冰箱中保存待檢測(cè)。②取1 ml 待測(cè)血漿,加入乙酸乙酯2 ml 及0.5 mol/L 氫氧化鈉0.5 ml,振蕩5 min,以2500 r/min 的轉(zhuǎn)速離心10 min,吸出上清液,在室溫中用氮?dú)獯蹈?殘?jiān)? ml 流動(dòng)相溶解,進(jìn)樣20 μl,以峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果

2.1 色譜行為 圖1、圖2 分別為在本實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)得的空白血漿及加奧氮平標(biāo)準(zhǔn)品的血漿的高效液相色譜圖,結(jié)果表明血漿中雜質(zhì)成分對(duì)奧氮平測(cè)定沒(méi)有干撓。

圖1 空白血漿

圖2 含奧氮平血漿

2.2 線性關(guān)系及檢測(cè)限 配制300 mg/L 的奧氮平流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)溶液作為儲(chǔ)備液。臨用前,吸取一定體積的儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋為3 mg/L 和30 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,配制成0.15 mg/L,0.30 mg/L,0.60 mg/L,1.20 mg/L,3.00 mg/L,6.00 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別吸取上述系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μl 于1 ml 空白血漿中,制得一系列不同濃度的奧氮平血漿,再加0.25%抗壞血酸10 μl,以下按1.3 ②項(xiàng)操作,進(jìn)樣20 μl 測(cè)定。所得曲線參數(shù)為：Y=mX+b,m=-3.74938×10-2,b=0.322968。相關(guān)性：r=0.99935,本法線性范圍為15～600 ng/ml,最低檢測(cè)限為6 ng/ml。

2.3 回收率與精密度 分別配制含奧氮平標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血漿各5 份,每份1 ml,加0.25%抗壞血酸10 μl,以下按1.3 ②項(xiàng)操作,進(jìn)樣20 μl 測(cè)定。在上述實(shí)驗(yàn)條件下分析,測(cè)得血漿中奧氮平的平均回收率為96.61%(n=15)。取空白血漿15 ml,平均分為3 份,每份中加入奧氮平標(biāo)準(zhǔn)品,分別配制成30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血漿。將每種濃度的血漿分為5 份,每份1 ml,加0.25%抗壞血酸10 μl,按1.3 ②項(xiàng)操作,當(dāng)日測(cè)定,求得日內(nèi)平均相對(duì)偏差為6.70%(n=15)。另配上述3 種濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿各5 ml,加0.25%抗壞血酸50 μl,每日分別取1 ml 測(cè)定,連續(xù)5 d 測(cè)定,求得日間平均相對(duì)偏差為7.60%(n=15)。結(jié)果表明本法的穩(wěn)定性、可靠性均達(dá)到要求。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1,表2,表3。

表1 奧氮平靈敏度實(shí)驗(yàn)

表2 奧氮平回收率及批間差實(shí)驗(yàn)

表3 奧氮平日間差實(shí)驗(yàn)

2.4 靈敏度 目前臨床上奧氮平血藥質(zhì)量濃度在20～80 ng/ml 之間。本法的最低檢測(cè)限為6 ng/ml,可以滿足臨床監(jiān)測(cè)時(shí)靈敏度的需要。

3 討論

奧氮平適用于精神分裂癥和其他有嚴(yán)重陽(yáng)性癥狀和(或)陰性癥狀的精神病的急性期和維持治療［10］；亦可緩解精神分裂癥及相關(guān)疾病常見(jiàn)的繼發(fā)性情感癥狀。由于屬于精神類藥物,長(zhǎng)期服用奧氮平還是有不少副作用,如：①體重增加［11］：服用奧氮平會(huì)導(dǎo)致體重增加,特別是在長(zhǎng)期服用的患者身上,長(zhǎng)期服用患者體重增加超過(guò)正常體重的25%以上的幾率為10%。②血糖的影響：長(zhǎng)期服用奧氮平,可能會(huì)導(dǎo)致糖耐量的異常,導(dǎo)致血糖升高的情況出現(xiàn)［12］。研究表明長(zhǎng)期服用奧氮平可導(dǎo)致糖化血紅蛋白的升高,但6 個(gè)月后,平均血糖增長(zhǎng)率會(huì)有所減緩［13］。③血脂的影響：臨床試驗(yàn)證明,長(zhǎng)期服用奧氮平可能會(huì)使低密度脂蛋白升高,總膽固醇的量也會(huì)有所升高,但如果停服藥物后,4～6 個(gè)月可逆轉(zhuǎn)［14］。④催乳素影響：長(zhǎng)期服用奧氮平可能會(huì)導(dǎo)致催乳素的升高,特別是有月經(jīng)不調(diào)癥狀的患者,但一般程度較輕。⑤除了上述不良反應(yīng),還可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)有：嗜睡、體位性低血壓、運(yùn)動(dòng)障礙,口感、便秘,肝藥酶升高、光敏反應(yīng)等不良反應(yīng)［15］。

因此,對(duì)于糖尿病患者要慎用奧氮平,注意引起酮癥酸中毒或昏迷的風(fēng)險(xiǎn)。服藥期間,應(yīng)當(dāng)注意摔倒的危險(xiǎn),不要進(jìn)行操作機(jī)器、駕駛等可能因瞌睡而發(fā)生危險(xiǎn)的活動(dòng)［16］。奧氮平作為精神類藥物,也應(yīng)當(dāng)注意停藥綜合征的出現(xiàn),如果突然停藥,可能會(huì)引起出汗、失眠、震顫、焦慮、惡心或嘔吐等急性癥狀,如需停藥,需在醫(yī)生指導(dǎo)下逐漸減量為好。吸煙會(huì)導(dǎo)致奧氮平的代謝加快,影響藥效,因此不建議服用藥物期間吸煙［17］。

高效液相色譜法是常用的檢測(cè)方法,作者用高效液相色譜法測(cè)定人血漿中奧氮平的濃度,探討高效液相色譜法測(cè)定人血漿中奧氮平濃度方法及效果。本研究中,作者采用Agilent 1260 型高效液相色譜儀G1314B 紫外檢測(cè)器,色譜柱為InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm),流動(dòng)相為：V(十二烷基硫酸鈉,磷酸二氫鈉 pH 2.5)∶V(乙腈)=1∶1 的溶液。檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm,流速1.0 ml/min,柱溫35℃。在上述條件下,該方法最低檢測(cè)限為6 ng/ml,血漿中奧氮平的平均回收率為96.61%,測(cè)定結(jié)果的日內(nèi)平均相對(duì)偏差為6.70%(n=15),日間平均相對(duì)偏差為7.60%(n=15)。由此可見(jiàn),所建立的高效液相色譜法方法適用于奧氮平臨床應(yīng)用研究中的血藥濃度的監(jiān)測(cè)。