趙 晉 黃泗翀 黃立光 鄧澤樺 關(guān)藝青 張漢奎

廣東省中山市人民醫(yī)院(528400)

男性精液檢查標(biāo)本無(wú)法通過(guò)手淫方式獲取者，在家使用安全套收集精液是有效手段之一。專用的(博瑞德male freeSCD-I型)價(jià)格昂貴，且普通群眾在市面上也難以購(gòu)買。 國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)市場(chǎng)上20多種安全套進(jìn)行精子生物毒性研究，發(fā)現(xiàn)金香無(wú)油安全套對(duì)精子的生物毒性小，精子存活指數(shù)和博瑞德male freeSCD-I型精液采集器很接近[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)與金香無(wú)油安全套接觸后精液的精子受精功能以及DNA碎片指數(shù)(DFI)，探討該安全套收集精液標(biāo)本的可行性。

1 標(biāo)本和方法

1.1 標(biāo)本

1.1.1標(biāo)本收集收集本中心男科實(shí)驗(yàn)室行精液常規(guī)分析，根據(jù)WHO《人類精液實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》第五版標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)正常且精液體積>2.0ml的標(biāo)本。

1.1.2實(shí)驗(yàn)組用加樣器吸取液化混勻標(biāo)本1.0ml加入到無(wú)油安全套(上海金香乳膠制品有限公司，批號(hào)：190772)球囊部，置于震蕩器托盤上輕柔搖晃5min后轉(zhuǎn)移至Falcon 5ml離心管，15min后檢測(cè)精子活力，精子頂體酶活性、頂體反應(yīng)和DFI。

1.1.3對(duì)照組取實(shí)驗(yàn)組同一份標(biāo)本的精液1.0ml置于Falcon 5ml離心管中，20min后同法檢測(cè)精子活力，精子頂體酶活性、頂體反應(yīng)和DFI。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1精子活力檢測(cè)按SQA-V全自動(dòng)精液質(zhì)量分析儀(以色列)使用說(shuō)明操作，結(jié)果參考相關(guān)指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2.2精子頂體酶活性檢測(cè)嚴(yán)格按照精子頂體酶活性檢測(cè)試劑盒(底物酶法，深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司)和雷杜RT-6500酶標(biāo)分析儀檢測(cè)(深圳)使用說(shuō)明書操作。結(jié)果判定為在24℃反應(yīng)溫度下，1 U頂體酶活性=24℃水解1.0μmol/min BAPNA。正常參考值: 48.2～218.7μU/106精子。計(jì)算公式：

1.2.3誘發(fā)精子頂體反應(yīng)測(cè)定在精液動(dòng)態(tài)學(xué)檢查結(jié)束后立即刻進(jìn)行取樣測(cè)定，嚴(yán)格按照誘發(fā)精子頂體反應(yīng)檢測(cè)試劑盒(鈣離子載體法，深圳市博瑞德生物科技有限公司)使用說(shuō)明操作。結(jié)果判定為使用鈣離子載體A23187處理，誘導(dǎo)精子發(fā)生頂體反應(yīng)，觀察精子頂體區(qū)的熒光變化，判定頂體反應(yīng)的發(fā)生狀況。正常參考范圍：鈣離子載體誘發(fā)的頂體反應(yīng)率≥15%。結(jié)果計(jì)算公式：

鈣離子載體誘發(fā)的頂體反應(yīng)率(%)=測(cè)定管頂體反應(yīng)率-對(duì)照管頂體反應(yīng)率

1.2.4精子DNA碎片指數(shù)檢測(cè)(SCSA法)嚴(yán)格按照吖啶橙染色試劑盒(深圳市博瑞德生物科技有限公司，批號(hào)：2020401)說(shuō)明書及流式細(xì)胞儀(邁瑞流式細(xì)胞儀BricyteE6，深圳)操作說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果。正常參考值：DFI<30%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 精子活力

實(shí)驗(yàn)組精子活力[(PR+NP)%]為(58.7±12.4)%，低于對(duì)照組(63.6±11.4)%(t=7.3，P<0.05)。

2.2 頂體酶活性

實(shí)驗(yàn)組精子頂體酶活性結(jié)果低于對(duì)照組，頂體反應(yīng)結(jié)果高于對(duì)照組(t=5.7，P<0.05；t=5.113，P<0.05)。而DFI與對(duì)照組無(wú)差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者精子頂體酶、頂體反應(yīng)、DFI檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)市面上多款安全套對(duì)精子生物毒性的研究，發(fā)現(xiàn)金香無(wú)油安全套的精子生物毒性比其他有油安全套要小很多，精子存活指數(shù)明顯更好[1]。但該研究只涉及對(duì)精子活力方面的影響，并未對(duì)精子功能的影響進(jìn)行更深入的研究，國(guó)內(nèi)也未見避孕套對(duì)精子功能檢測(cè)結(jié)果影響的研究報(bào)道。

精液常規(guī)分析(精液體積、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)百分率、存活率、以及形態(tài)學(xué))是評(píng)估男性生育能力的基本檢查，檢測(cè)結(jié)果可為臨床醫(yī)生提供初步的診斷依據(jù)[3]。但精液分析不能準(zhǔn)確反映出精子的受精功能和遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性，因此有必要通過(guò)更多的檢測(cè)指標(biāo)評(píng)價(jià)男性生育力[4]。相關(guān)研究表明，精子頂體酶活性、精子頂體反應(yīng)、DFI能夠更有效、準(zhǔn)確地判斷男性患者生育能力的高低，是進(jìn)行輔助生殖前的重要參考指標(biāo)[5-7]。

本實(shí)驗(yàn)采用較低生物毒性飛金香無(wú)油安全套進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)與該安全套接觸的精液進(jìn)行精子受精功能和DFI檢測(cè)，并與未接觸安全套的精液進(jìn)行比較。結(jié)果表明，即使是市面上精子生物毒性相對(duì)低的金香無(wú)油安全套也會(huì)使精子活力和頂體反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果降低，頂體酶活性檢測(cè)結(jié)果升高，而DFI結(jié)果無(wú)差異。

市場(chǎng)上大多安全套都是采用天然乳膠為基質(zhì)材料，添加防老劑、促進(jìn)劑、硫化劑等橡膠助劑，增強(qiáng)安全套的物理化學(xué)性能，但對(duì)精子具有生物毒性[8-10]。特別是為使安全套更有彈性，在生產(chǎn)過(guò)程需要硫化處理，這過(guò)程產(chǎn)生亞硝胺等物質(zhì)具有較強(qiáng)的生物毒性。頂體區(qū)的細(xì)胞膜上有識(shí)別誘發(fā)頂體反應(yīng)的受體[11]。筆者認(rèn)為，安全套中可能存在一些有害物質(zhì)通過(guò)損傷精子細(xì)胞膜，從而使頂體反應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果低于對(duì)照組。同樣的，由于細(xì)胞膜受損，在膜內(nèi)的頂體酶在檢測(cè)過(guò)程中釋放更完全，因此實(shí)驗(yàn)組頂體酶活性檢測(cè)結(jié)果高于對(duì)照組。而精子DNA存在于更深的位置，與相關(guān)蛋白形成相對(duì)穩(wěn)定的染色體結(jié)構(gòu)，且外層有細(xì)胞核保護(hù)，因此精液與該避孕套短暫接觸并沒(méi)有影響到DNA的完整性。