巴明玉，婁永強，祿保平

1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(鄭州450000)；2.河南省通許縣中醫(yī)院(通許 475400)； 3.河南中醫(yī)藥大學(xué)(鄭州 450046)

非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)在一定程度上是可逆的，肥胖病患者在進行減肥手術(shù)后肝脂肪變能夠得到好轉(zhuǎn)，由此可見，肥胖與非酒精性脂肪肝病的發(fā)病關(guān)系密切[1-2]。導(dǎo)師祿保平教授從中醫(yī)基本理論入手，結(jié)合歷代醫(yī)家的臨證經(jīng)驗，總結(jié)出的健脾疏肝降脂方治療非酒精性脂肪肝效果顯著。現(xiàn)筆者就此方對NAFLD肥胖小鼠ALT、AST、游離脂肪酸(Free fatty acid，F(xiàn)FA)及光鏡下病理組織學(xué)的影響作一實驗研究，現(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 藥 物 健脾疏肝降脂方購買及鑒定均符合國家《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)按要求配制成相應(yīng)濃度藥液。藥物對照組所用殼脂膠囊(批號：Z20050665)，配成混懸液備用；四氯化碳：濟寧恒泰化工有限公司(批號：20130904)；0.9%氯化鈉注射液：廣州市昕迪實驗器材有限公司(批號：20140614)；5%的CCl4食用油溶液：(四氯化碳∶玉米油=5∶95，V/V)混合液。

2 試劑和儀器 游離脂肪酸(FFA)試劑盒(批號：20140617)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒(批號：20140817)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒(批號：20140817)均有青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司提供；全自動生化分析儀、CX31-32C02光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS株式會社)；石蠟切片機、LEICA切片機、攤片機、烘片機(德國萊卡公司)；伯樂680全自動酶標(biāo)儀(北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司)。

3 動物分組 健康SPF級小鼠72只，隨機分為空白組，模型對照組，殼脂膠囊組，健脾疏肝降脂方高、中、低劑量組。除空白組外，其余各組均以髙脂飼料(79.8%基礎(chǔ)飼料、18%豬油、2%膽固醇和0.2%的丙基硫氧嘧啶)喂養(yǎng)6周，6周后除空白組外，其余各組均用CCl4注射法建立非酒精性脂肪肝模型。實驗方法參照《藥理實驗方法學(xué)》[3]。

4 給藥方法及途徑 殼脂膠囊組按0.5 g/(kg·d)殼脂膠囊藥液；健脾舒肝降脂方高、中、低劑量組分別給予80、40、20 g/(kg·d)健脾舒肝降脂方藥液[4]；空白組及模型組均給予等容量的生理鹽水灌胃。每天1次，連續(xù)灌胃6周，每周測量小鼠體重并記錄。

5 一般指標(biāo)測定 實驗6周末，最后1次給藥后對小鼠禁飲食及水12 h后，采血測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，并采取肝組織勻漿檢測游離脂肪酸(FFA)。

6 光鏡觀察 小鼠處死后，迅即剖腹取出肝臟，新鮮肝臟組織用4%的多聚甲醛溶液固定常規(guī)石蠟包埋切片，常規(guī)脫蠟及脫水，常規(guī)石蠟包埋、切片，然后進行HE染色，梯度酒精脫水，中性樹膠封片，放置1周，待膠片干后光鏡下觀察肝組織的脂肪變程度。

結(jié) 果

1 健脾疏肝降脂方對小鼠肝功能的影響 藥物干預(yù)6周后，中藥各個濃度組相比殼脂膠囊組更能明顯降低血清 ALT、AST，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其藥物治療組與模型組相比均可以明顯降低血清 ALT、AST，有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 藥物對各組小鼠血清ALT、AST 水平的影響(U/L)

注：與空白組相比，△P<0.05，*P<0.01；與模型組相比，#P<0.01

2 健脾疏肝降脂方對小鼠肝組織FFA的影響 藥物干預(yù)6周后，治療高、中劑量組 FFA 降低，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義；但高、中劑量組相比殼脂膠囊組效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。由此可以看出，在降低FFA方面，高、中劑量組效果較好。見表2。

表2 藥物對各組小鼠肝組織 FFA 的影響(μmol/gprot)

注： 與正常組相比，△P<0.05；與模型組相比，▲P<0.05

3 光鏡下肝組織病理組織學(xué)觀察 空白組：鏡下見細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，排列均勻；無脂肪變性及壞死，未見炎性細(xì)胞浸潤。模型對照組小鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)不清晰，可見肝組織呈彌漫性脂肪變性，細(xì)胞內(nèi)單個大脂滴將細(xì)胞核擠向細(xì)胞膜，有時可見由2個及2個以上的破裂肝細(xì)胞融合，呈“氣球樣”改變。各用藥組小鼠的肝小葉脂肪變肝細(xì)胞數(shù)目均減少。用藥組中、高劑量組相對低劑量組及殼脂膠囊組細(xì)胞內(nèi)胞漿豐富，胞質(zhì)內(nèi)脂滴減少或消失，細(xì)胞核大小正常，位置居中，肝細(xì)胞脂肪變性程度得到很大改善。

討 論

ALT、AST屬于肝細(xì)胞合成的常見酶之一，可有效維持機體正常的生理活動，是機體進行物質(zhì)代謝的必要物質(zhì)之一，有研究證實，肝臟中含有大量的酶，但當(dāng)肝功能出現(xiàn)異常情況時，肝細(xì)胞的細(xì)胞通透性出現(xiàn)不同程度的改變，易導(dǎo)致酶從肝細(xì)胞內(nèi)大量釋放至血液中，引起血清相關(guān)酶水平出現(xiàn)不同程度的變化，因此，可將血清酶水平作為評價肝細(xì)胞受損的有效指標(biāo)之一，而ALT、AST具有較高的敏感性和特異性，所以可將其作為診斷、評估脂肪肝的指標(biāo)之一[5]。另外脂代謝紊亂及胰島素抵抗(IR)也是NAFLD的主要致病機制之一，脂質(zhì)沉積，即肝臟獲取的游離脂肪酸(Free fatty acid，F(xiàn)FA)超過肝臟自身處理能力(β氧化能力)，導(dǎo)致甘油三酯淤積[6]。游離脂肪酸對非酒精性脂肪肝影響是多重的，同脂肪變性、肝組織炎癥以及其纖維化等病變相關(guān)[7]。FFA過高可啟動氧化應(yīng)激機制，激活多種信號通路導(dǎo)致IR，IR又可降低胰島素抑制脂肪酶的活性，使外周組織脂肪分解增多，F(xiàn)FA水平增高[8]。而血清中FFA過多，被肝細(xì)胞大量攝取后將導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變性，形成NAFLD[9]。因此，檢測血清中AST、ALT含量及游離脂肪酸水平可以作為評價藥物治療非酒精性脂肪肝的重要參考依據(jù)。

肥胖合并NAFLD多因平素嗜食肥甘之品，脾失健運，痰濁內(nèi)生，血脈瘀滯，痰瘀互相搏結(jié)而形成，病機為本虛標(biāo)實，本虛以脾為主，標(biāo)實主要為痰濕、血瘀；脾氣虛津液不能四布，則津液不足；脾虛不能運化水谷精微，則生痰濕，阻滯氣機成瘀。結(jié)合其病機特點，導(dǎo)師祿保平教授通過中醫(yī)辨證結(jié)合臨床經(jīng)驗自擬了健脾疏肝降脂方(由黨參、茯苓、白術(shù)、橘紅、柴胡、郁金、虎杖、荷葉、決明子、山楂、炙甘草等藥物組成)，臨床已取得顯著的治療效果?，F(xiàn)代藥理研究表明，黨參、白術(shù)、茯苓均有護肝、保護肝功能的作用[10-12]。本方中山楂、荷葉、決明子臨床應(yīng)用及現(xiàn)代研究都有很好的降脂減重作用[13-15]。綜觀全方，補中兼泄，體現(xiàn)了健脾不忘疏肝，扶正不忘祛濕的原則，共達(dá)肝體得養(yǎng)，肝用得暢，邪去正安的目的，因此本方充分體現(xiàn)了中醫(yī)辨證論治的基本理論與現(xiàn)代研究的完美結(jié)合。

經(jīng)過6周治療，藥物治療組均可以明顯降低血清ALT、AST，中藥各個濃度組相比殼脂膠囊組更能明顯降低血清ALT、AST，有統(tǒng)計學(xué)意義；由此可以看出此方在降低小鼠血清ALT、AST方面與藥物劑量無明顯關(guān)系；但此方在改善FFA方面，高、中劑量組相比殼脂膠囊組效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)合病理學(xué)觀察顯示，相對于低劑量組及殼脂膠囊組，健脾疏肝降脂方中、高劑量組細(xì)胞內(nèi)胞漿豐富，胞質(zhì)內(nèi)脂滴減少或消失，細(xì)胞核大小正常，位置居中，肝細(xì)胞脂肪變性程度得到很大改善。由此可以看出，健脾疏肝降脂方可以明顯改善NAFLD肥胖小鼠的肝功能、FFA，并且病理結(jié)果也支持其效果與藥物濃度存在關(guān)系。