梁淑芳 韋世民 陸晶山 江林源 李長(zhǎng)喜 韋巧燕 龍海寧 黃春柳 吳靜 俸祥仁

（1，廣西壯族自治區(qū)柳州種畜場(chǎng) 545003；2，廣西柳城縣沙埔鎮(zhèn)獸醫(yī)站 545003，3，廣西壯族自治區(qū)百朋種畜場(chǎng) 541502；4，廣西南寧強(qiáng)微農(nóng)牧科技有限公司 530001）

隨著生豬養(yǎng)殖規(guī)?；?、集約化、標(biāo)準(zhǔn)化的不斷發(fā)展，生豬養(yǎng)殖 “資源-產(chǎn)品-污染排放”單向流動(dòng)的線形增長(zhǎng)經(jīng)濟(jì)，帶來的環(huán)境污染和資源浪費(fèi)等問題日益突出。為解決隨豬肉需求增加產(chǎn)生的問題，生豬的健康養(yǎng)殖受到越來越多人的關(guān)注[1]。2018 年4 月20 日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定印發(fā)了 《關(guān)于開展獸用抗菌藥使用減量化行動(dòng)試點(diǎn)工作的通知》 （農(nóng)辦醫(yī) 〔2018〕 13號(hào)），公布了 《獸用抗菌藥使用減量化行動(dòng)試點(diǎn)工作方案（2018～2021 年）》。通過在飼料中添加綠色飼料添加劑 （如飼料酶制劑、微生態(tài)制劑等），可降低環(huán)境污染、減少動(dòng)物應(yīng)激、提升動(dòng)物產(chǎn)品品質(zhì)等，有助于家畜的健康養(yǎng)殖[1]。肖宏德[2]等 （2014） 研究發(fā)現(xiàn)，用復(fù)合益生菌制劑部分或全部替代斷奶仔豬飼糧中的抗生素，可以改善仔豬生長(zhǎng)性能，顯著降低仔豬腹瀉率。楊文軍等[3]研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬日糧中添加微生態(tài)制劑可有效提高仔豬日增重，并降低腹瀉率。Kantas 等[4]和胡虹等[5]研究表明，在基礎(chǔ)日糧中聯(lián)合添加微生態(tài)制劑和酸化劑可有效調(diào)節(jié)仔豬腸道微生態(tài)平衡，減少致病菌含量并提高乳酸菌含量，從而降低腹瀉率，并可提高仔豬日增重，降低料重比。但很少有關(guān)于商品化微生態(tài)制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率及腸道菌群影響的對(duì)比研究。本試驗(yàn)選用市場(chǎng)使用比較廣泛的不同商品化微生態(tài)制劑飼喂仔豬，研究各微生態(tài)制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率及腸道菌群的影響，旨在為不同微生態(tài)制劑在仔豬生產(chǎn)中應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)微生態(tài)制劑：復(fù)合酵素由廣西南寧強(qiáng)微農(nóng)牧科技有限公司研制，主要成分乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌、放線菌，總有效活菌數(shù)量為5×108cfu/g；活力99 生酵劑由宜春強(qiáng)微生物科技有限公司生產(chǎn)，主要成分乳酸菌、產(chǎn)軟假絲酵母菌、枯草芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌，總有效活菌數(shù)量為2×109cfu/g；EM 菌原粉由上海天地生物科技有限公司，主要成分雙歧桿菌、光合細(xì)菌、酵母菌、放線菌、乳酸菌和枯草芽孢桿菌，總有效活菌數(shù)量為1×109cfu/g。

試驗(yàn)試劑：BS 培養(yǎng)基；MRS 培養(yǎng)基；MAC 培養(yǎng)基；EC 培養(yǎng)基。

1.2 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平 （風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)選擇30 日齡健康、體重一致的杜×長(zhǎng)×大三元仔豬40頭，公母各半，隨機(jī)分成 4 個(gè)處理，每個(gè)處理 2 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 頭。預(yù)試期7d，試驗(yàn)期11d。試驗(yàn)期間飼喂不含任何藥物的自配飼料，自由飲水。試驗(yàn)不同的添加處理如表2。

表2 試驗(yàn)分組方案設(shè)計(jì)

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

分別于試驗(yàn)第1 天、第11 天早晨空腹個(gè)體稱重，以每處理組為單位記錄耗料量，計(jì)算平均日采食量、平均日增重和料肉比。

平均日增重= （試驗(yàn)?zāi)┲亍囼?yàn)始重） /試驗(yàn)天數(shù)

平均日采食量=試驗(yàn)期總耗料量/試驗(yàn)天數(shù)

料肉比=各處理組平均日采食量/日增重

1.4.2 腹瀉率

按朱劍鋒[6]等方法記錄和計(jì)算各處理組仔豬的腹瀉率。

腹瀉率 （%） =腹瀉仔豬頭次/（試驗(yàn)仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)） ×100

1.4.3 腸道菌群檢查

試驗(yàn)開始前 （0d） 每處理組隨機(jī)抽取仔豬4 頭，每頭無菌采集直腸糞便做細(xì)菌分離檢查，試驗(yàn)第4 天，每處理組試驗(yàn)仔豬采取直腸糞便進(jìn)行細(xì)菌增殖培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)糞便中大腸埃希氏菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌和腸球菌的含菌量。試驗(yàn)第11 天，同樣的方法采集直腸糞便進(jìn)行細(xì)菌細(xì)菌增殖培養(yǎng)，分離計(jì)數(shù)。

試驗(yàn)時(shí)將仔豬保定，直腸取糞便放入無菌的10ml 離心管中，4℃保存帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)處理組取0.5g 糞便放入無菌的10ml 離心管中，加入生理鹽水4.5ml，用旋渦混合儀充分混勻，吸取0.5ml 于盛有4.5ml 生理鹽水的無菌離心管中依次進(jìn)行10 倍稀釋。

腸道糞便中大腸桿菌數(shù)量的計(jì)數(shù)：將10-3～10-5的稀釋液接種至MAC 瓊脂培養(yǎng)基中；置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)20h后計(jì)數(shù)[6]。

腸道糞便中乳酸菌數(shù)量的計(jì)數(shù)：將10-6～10-8的稀釋液接種至MRS 瓊脂培養(yǎng)基中；置于 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng) 36h 后計(jì)數(shù)[6]。

腸道糞便中腸球菌數(shù)量的計(jì)數(shù)：將10-3～10-5的稀釋液接種至EC 瓊脂培養(yǎng)基中；置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)20h 后計(jì)數(shù)[7]。

腸道糞便中雙歧桿菌數(shù)量的計(jì)數(shù)：將10-3～10-5的稀釋液接種至BS 瓊脂培養(yǎng)基中；置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48h 后計(jì)數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007 進(jìn)行整理，用DPS 進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan's 法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腹瀉率的影響

由表3 可知，不同微生態(tài)制劑可以減少仔豬腹瀉。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組與對(duì)照組的仔豬腹瀉頭次相差明顯，且差異顯著 （P<0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組間的仔豬腹瀉頭次相差不大，相比較差異不顯著 （P>0.05）；各處理的仔豬腹瀉率大小依次為CK （對(duì)照組） >Ⅲ組>Ⅰ組>Ⅱ組。

2.2 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響

由表4 可知，不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬有促長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬的平均增重比對(duì)照組仔豬的平均增重分別顯著提高17.24%、10.34%和17.24% （P<0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬的平均增重比試驗(yàn)Ⅱ組仔豬的平均增重分別顯著提高6.25%、6.25%。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬的平均耗料量分別顯著提高 9.03%、8.58%、10.84% （P<0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬的平均耗料量相差不明顯 （P>0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬料肉比比對(duì)照組分別降低6.22%、3.34%和 5.74% （P>0.05）。

表3 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腹瀉率的影響

表4 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.3 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

由表5 可知，空腹灌服不同微生態(tài)制劑第4 天、第11 天；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬腸道的大腸桿菌、腸球菌菌群數(shù)量逐漸下降，且與對(duì)照組仔豬腸道的大腸桿菌、腸球菌菌群數(shù)量變化相比差異顯著 （P<0.05）；空腹灌服不同微生態(tài)制劑第4 天、第11 天；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬腸道的乳酸桿菌、雙歧桿菌菌群數(shù)量逐漸提高，且與對(duì)照組仔豬腸道的乳酸桿菌、雙歧桿菌菌群數(shù)量變化相比差異顯著 （P<0.05）?？崭构喾煌⑸鷳B(tài)制劑第 4 天、第 11 天；試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組仔豬腸道的大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌菌群數(shù)量變化不是很明顯，且相比差異不顯著（P>0.05）。

3 結(jié)論與討論

3.1 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腹瀉率的影響

畜禽消化道是由不計(jì)其數(shù)菌群組成，仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)不是很穩(wěn)定，仔豬在應(yīng)激條件下，正常的腸道微生物容易發(fā)生紊亂，從而影響仔豬健康。飼喂微生物飼料添加劑能調(diào)節(jié)仔豬腸道中大腸桿菌的數(shù)量，減緩仔豬腹瀉。Bon 等[8]報(bào)道，飼糧中添加釀酒酵母和乳酸片球菌可顯著減少糞便中大腸桿菌的數(shù)量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，灌服不同微生態(tài)制劑，仔豬腹瀉率明顯降低。

3.2 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響

目前，國內(nèi)外有關(guān)益生菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響報(bào)道很多，但不同菌種益生菌的作用效果不同，一些菌株對(duì)宿主的益生效果更明顯[9]。Ross 等[10]發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加淀粉乳桿菌和糞腸球菌可顯著降低飼料采食量和改善飼料利用效率。Huang 等[11]報(bào)道，飼糧中添加乳酸菌復(fù)合物能顯著提高斷奶仔豬平均日增重。劉曉琳等[12]給斷奶仔豬飼喂地衣芽孢桿菌發(fā)現(xiàn)，其顯著提高了整個(gè)試驗(yàn)期的平均日增重。本試驗(yàn)結(jié)果表明，灌服不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬有促長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率作用。

表5 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

3.3 不同微生態(tài)制劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

動(dòng)物消化道內(nèi)存在種類繁多的微生物，與自身營養(yǎng)、生長(zhǎng)、免疫抵抗病原菌入侵和消除某些化合物的毒性等都有密切關(guān)系[13,14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，灌服不同微生態(tài)制劑可以提高仔豬腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌菌群數(shù)量。這一結(jié)果與蔣小豐等[15]的結(jié)果一致。

3.4 結(jié)論

灌服不同微生態(tài)制劑可改善仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，減少腹瀉，對(duì)仔豬有促長(zhǎng)和提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用，且商品化的微生態(tài)制劑效果差異不明顯。