張曉亭

（河南省許昌市建安區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心 461000）

豬偽狂犬病 （Pseudorabies） 是由豬偽狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV） 引起的可致妊娠母豬流產(chǎn)、種公豬不育、育肥豬生長停滯、仔豬死亡的一種急性傳染病[1]。一旦豬場發(fā)生該病，將給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前還沒有有效的方法治療該病，疫苗免疫接種是預(yù)防與控制該病的根本措施。而血清抗體水平檢測可以反映出豬群的免疫抗體水平，對豬場免疫程序的制訂具有一定指導(dǎo)意義[2]。目前，國標(biāo)上推薦的方法依然是ELISA，ELISA 方法具有快速、簡便、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)前常用的適合大規(guī)模應(yīng)用的抗體檢測方法?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)合了抗體免疫方法與化學(xué)發(fā)光技術(shù)，其靈敏度更高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等方面。為了解化學(xué)發(fā)光免疫分析法在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面的應(yīng)用價值，本實驗將某國產(chǎn)豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法） 與美國IDEXX 公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gB 抗體ELISA 檢測試劑盒進(jìn)行比較分析，以期為臨床豬血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測尋找更為簡便、快速且準(zhǔn)確的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

河南省某幾個規(guī)?；B(yǎng)殖場的豬血清樣品，共計110 份。

1.2 檢測試劑

豬偽狂犬病病毒 gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法，美國IDEXX）；豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法，國產(chǎn)）。

1.3 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀：美國伯騰儀器有限公司；化學(xué)發(fā)光免疫分析儀：安圖生物；洗板機(jī)：；美國伯騰儀器有限公司；培養(yǎng)箱：德國愛安姆 （北京） 科技有限公司；100 ul 微量移液槍、100 ul 多道移液槍：Eppendorf。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品預(yù)篩

用美國產(chǎn)豬偽狂犬病病毒gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法）預(yù)篩選本實驗室所收集的豬血清樣品，根據(jù)實驗檢測結(jié)果篩選出陽性樣品 58 份，陰性樣品 52 份，共計 110 份。

1.4.2 化學(xué)發(fā)光方法檢測

對預(yù)篩選出的110 份豬血清用豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法） 進(jìn)行檢測。檢測操作及結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作與判定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

將化學(xué)發(fā)光免疫分析法的檢測結(jié)果與ELISA 法的檢測結(jié)果進(jìn)行比對分析。（1） 以 ELISA 法的檢測結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，計算化學(xué)發(fā)光免疫分析法的特異性、靈敏性、符合率；（2） 應(yīng)用Kappa 檢驗判定兩個實驗方法結(jié)果的一致性。Kappa>0.8，表明一致性極高；0.60

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

附表 ELISA 法與化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測豬偽狂犬病gB 抗體的檢測結(jié)果

2.2 方法效能評價

以ELISA 法為標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)附表的結(jié)果計算得出化學(xué)發(fā)光免疫分析法的靈敏度為 98.31%、特異性為 100%、符合率為99.10%。

2.3 一致性結(jié)果

以ELISA 法作為標(biāo)準(zhǔn)，將化學(xué)發(fā)光免疫分析法的檢測結(jié)果與之進(jìn)行Kappa 檢驗，得出化學(xué)發(fā)光免疫分析法的 Kappa 為0.96，表明兩種實驗方法的檢測結(jié)果高度一致。

3 討論

國外對化學(xué)發(fā)光的大量研究始于20 世紀(jì)初，至20 世紀(jì)60年代，隨著現(xiàn)代電子技術(shù)與高靈敏度光傳感器的發(fā)展，其作為一種分析方法得到迅速發(fā)展。我國化學(xué)發(fā)光方法的研究始于20世紀(jì)80 年代初期，目前該項技術(shù)已廣泛應(yīng)用于有機(jī)、冶金、藥物、臨床醫(yī)學(xué)檢驗、食品檢驗、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等各個領(lǐng)域。但卻少有化學(xué)發(fā)光技術(shù)在動物疫病防控中關(guān)于臨床血清樣品抗體檢測的報道。

本文檢測豬偽狂犬病gB 抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析法是一種采用競爭反應(yīng)原理，包被重組蛋白，通過檢測發(fā)光信號值，校準(zhǔn)曲線擬合計算，得出待檢血清樣品抗體量的方法。相比于傳統(tǒng)ELISA 方法檢測豬偽狂犬病gB 抗體，化學(xué)發(fā)光免疫分析法用時更短，操作更加簡便。本試驗結(jié)果表明，在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面，與ELISA 方法相比，化學(xué)發(fā)光免疫分析法的敏感性、特異性、符合率均較高。以ELISA 法為標(biāo)準(zhǔn)計算的化學(xué)發(fā)光免疫分析法的Kappa 為0.96，說明兩種實驗方法的檢測結(jié)果高度一致。這說明，可將化學(xué)發(fā)光免疫分析法應(yīng)用于臨床血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測。