李許丹 楊蘭蘭 劉環(huán)宇

【摘 要】小兒清肺化痰顆粒是臨床常用藥物，使用受眾廣、頻率高，其藥品質(zhì)量直接關(guān)系到小兒患者生命健康。微生物限度檢查法是判定藥品微生物含量的重要方式，檢查方法不同可能會(huì)得出不同結(jié)論。故此文章將以小兒小兒清肺化痰顆粒作為藥品檢驗(yàn)樣本，將其分成對(duì)照組與試驗(yàn)組，分別對(duì)需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、大腸埃希菌進(jìn)行科學(xué)試驗(yàn)，判定能否使用常規(guī)方法進(jìn)行檢查。

【關(guān)鍵詞】小兒清肺化痰顆粒;微生物限度檢查法;微生物限度檢查法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R927.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-8714（2020）03-0-01

樣品名稱(chēng)：小兒清肺化痰顆粒 檢驗(yàn)依據(jù)：《中國(guó)藥典》2015年版微生物限度檢查法

批號(hào)：15120217;15120317;15120417 規(guī)格： 每袋裝6克

檢驗(yàn)日期：2015年12月4日 報(bào)告日期：2015年12月19日

生產(chǎn)單位：神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司

培養(yǎng)基 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基等。

實(shí)驗(yàn)儀器：立式滅菌柜、生化培養(yǎng)箱、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜。

1 陽(yáng)性對(duì)照菌菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 銅綠假單胞菌 [CMCC（B）10 104]

枯草芽孢桿菌 [CMCC（B）63 501] 白色念珠菌 [CMCC （F） 98 001] 黑曲霉菌? [CMCC（F）98 003] 大腸埃希菌 [CMCC（B）44 102]（菌種來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研究院）

對(duì)照菌制備：枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌采用10倍稀釋法。制備成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。

2 試驗(yàn)方法

通過(guò)對(duì)曾經(jīng)進(jìn)行過(guò)的方法適用性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析小兒清肺化痰顆粒沒(méi)有抑菌性，可采用常規(guī)法進(jìn)行試驗(yàn)。

供試液制備：稱(chēng)取10g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖溶解，混勻制成1︰10的供試液。

2.1需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查

試驗(yàn)組：取上述供試液9.9ml，共5份，分別加入0.1ml枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌液后搖勻，使供試液的含菌量不大于100cfu/ml，分別從5支試驗(yàn)組試管中吸取2ml供試液加入2個(gè)平皿中，每皿1ml，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;另從加入白色念珠菌、黑曲霉的菌液的試管中分別吸取2ml供試液加入2個(gè)平皿中，每皿1ml。傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，搖勻。

供試品對(duì)照組：吸取上述1 ：10供試液4ml分別加入4個(gè)平皿中，每皿1ml，2個(gè)平皿傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，2個(gè)平皿傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，搖勻。

菌液組：吸取pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液9.9ml，每份中加入與試驗(yàn)組相同的菌懸液后搖勻，操作同試驗(yàn)組。

培養(yǎng)計(jì)數(shù)：將胰酪大豆胨瓊脂平皿放入30-35℃培養(yǎng)箱，沙氏葡萄糖瓊脂平皿放入20-25℃培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，需氧菌不超過(guò)3天，霉菌和酵母菌培養(yǎng)不超過(guò)5天，在3天和5天分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。

批號(hào)15120217需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)：

陽(yáng)性菌 代數(shù) 陽(yáng)性菌數(shù)cfu/ml 供試品+陽(yáng)性菌 供試品 回收率

1 2 均值 1 2 均值 1 2 均值

霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)：

同法操作，批號(hào)15120317需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)：枯草芽孢桿菌的回收率：1.03、金黃色葡萄球菌的回收率：0.86、銅綠假單胞菌的回收率：0.71、白色念珠菌的回收率：0.95、黑曲霉菌的回收率：1.01。

霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)：白色念珠菌的回收率：0.88、黑曲霉菌的回收率：0.80。

批號(hào)15120417需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)：枯草芽孢桿菌的回收率：0.93、金黃色葡萄球菌的回收率：0.86、銅綠假單胞菌的回收率：0.76、白色念珠菌的回收率：0.96、黑曲霉菌的回收率：0.80。

霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)：白色念珠菌的回收率：0.68、黑曲霉菌的回收率：0.97。

從上述結(jié)果可以看出：采用常規(guī)法檢驗(yàn)供試品，人工污染5株代表菌株，該供試品對(duì)銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率試驗(yàn)均在0.5-2范圍內(nèi)，方法適用。

2.2大腸埃希菌檢查

試驗(yàn)組：取1：10供試液10ml和不大于100cfu的大腸埃希菌置100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。

供試品對(duì)照組：照試驗(yàn)組，不加菌液作為供試品對(duì)照組。

菌液組：照試驗(yàn)組，不加供試液作為菌液對(duì)照組。

陰性對(duì)照組：取10mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液加入到100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

培養(yǎng)判斷：上述制備好的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)物置33℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)后，分別取上述培養(yǎng)物1mL接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，42-44℃培養(yǎng)24小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，33℃培養(yǎng)18小時(shí)。若麥康凱瓊脂平板上有菌落生長(zhǎng)，且試驗(yàn)組菌落形態(tài)與菌液對(duì)照組相同，則判斷試驗(yàn)組大腸埃希菌檢出;若試驗(yàn)組無(wú)菌生長(zhǎng)或與菌液組菌落形態(tài)不同，則判定試驗(yàn)組大腸埃希菌未檢出，應(yīng)消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。結(jié)果如下：

從上述結(jié)果判斷：試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，通過(guò)控制菌檢查方法適用性試驗(yàn)表明，常規(guī)法可用于進(jìn)行供試品的大腸埃希菌檢查。

3 結(jié)論

根據(jù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，小兒清肺化痰顆粒在微生物限度檢查時(shí)需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、大腸埃希檢查均可采用常規(guī)法進(jìn)行檢查。

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